Тригидрохлорид 2-[2-фенил-5(6)-бензимидазолил]-n-(3- диметиламинопропил)-5(6)-бензимидазолкарбоксамида в качестве флуоресцентного красителя для исследования днк

 

Изобретение относится к производным бис-бензимидазолов, в частности к тригидрохлориду 2-[2-фенил-5(6)-бензимидазолил]-N-(3-диметиламинопропил)-5(6)-бензимидазолкарбоксамида, который может быть использован в качестве флуоресцентного красителя для исследования ДНК в биологии. Цель изобретения - создание более эффективных красителей указанного класса. Синтез целевого соединения ведут гидрированием 3-нитро-4-амино-N-(3-диметиламинопропил)бензамида в присутствии NI Ренея при комнатной температуре в среде метанола с последующей обработкой гидрохлоридом метоксиэтилового иминоэфира 2-фенил-5(6)-бензимидазолкарбоновой кислоты при кипячении (5ч). Выход 68%, т.пл. *98350°С, брутто-формула C<SB POS="POST">26</SB>H<SB POS="POST">26</SB>N<SB POS="POST">6</SB>O<SP POS="POST">.</SP>3HCL, область излучения находится в пределах 350 - 450 нм при λ<SB POS="POST">MAX</SB>ъ387 нм. Интенсивность флуоресценции клеток, окрашенных этим красителем, пропорциональна содержанию в них ДНК, причем в отличие от известных ДНК-тропных флуоресцентных зондов, это вещество имеет структурированную эмиссионную полосу, не перекрывающуюся другими флуоресцентными метками, и более высокий квантовый выход. 2 ил., 1 табл.

СОЮЗ СО8ЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1530628 A 1 (50 4 С 07 1! 235/20 С 09 К 11/06

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

А 1 Д п ! >. - 0>> ->

III I ЫÇAJI

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

2 исследования ДНК в биологии. Цель изобретения - создание более эффективных красителей указанного класса.

Синтез целевого соединения ведут гидрированием 3-нитро-4-амино-N-(3-диметиламинопропил)бензамида в присут" ствии Ni Ренея при комнатной температуре в среде метанола с последующей обработкой гидрохлоридом-метоксиэтилового иминоэфира 2-фенил-5(6)-бензимидазолкарбоновой кислоты при кипячении (5 ч). Выход 68, т.пл. )350 С, брутто-формула С Н N60-3НС1, область излучения находится в пределах 350450 нм при Ъ „, „ = 387 нм. Интенсивность флуоресценции клеток, окрашен-ных этим красителем, пропорциональна содержанию в них ДНК> причем в отличие от известных ДНК-тропных флуоресцентных зондов, это вещество имеет структурированную эмиссионную полосу, не перекрывающуюся другими флуоресцентными метками, и более высокий квантовый выход. 2 ил., 1 табл.! (21) 4331426/31-04 (22) 20.11.87 (46) 23.12.89. Бюл. Ь 47 (71) Ленинградский технологический институт им. Ленсовета (72) И.В.Склярова, А.В.Гарабаджиу, О.ф.Гинзбург, lO.М.Розанов и В.Н.Умецкая (53) 547 ° 785 ° 5 (088.8) (56) Lat t S.À., Mohleb S. Chromosoma, 1975, v.52, р. 297-316. (54) ТРИГИДРОХЛОРИД 2- 2-ФЕНИЛ-5 (6)БЕНЗИМИДАЗОЛИЛ -N-(3 ДКМЕТИЛАМИНОПРСПИЛ)-5(6)-БЕНЗИМИДАЗОЛКАРБОКСАМИДА

В КА4ЕСТВЕ ФЛУОРЕСЦЕНТНОГО КРАСИТЕЛЯ

ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ ДНК (57) Изобретение относится к произ водным бис-бензимидазолов, в частности к тригидрохлориду 2-(2-фенил-5(6)бензимидазолил) -N-(3-диметиламинопронил)-5(6)-бензимидазолкарбоксамида, который может быть использован в качестве флуоресцентного красителя для

Изобретение относится к органической химии, а именно к новому тригидрохлориду 2-(2-фенил-5(6)-бензимидазолил)-N-(3-диметиламинопропил)-5(6)— бензимидазолкарбоксамиду формулы

1 н н

I (СН3121((СН11) (1 Н (\- Ф 3(-(с(Цель изобретения — создание нового

ДНК-тропного зонда в ряду бис-бензимидазолов, обладающего структурированным спектром флуоресценции, расширяю щего спектральные возможности метода

ДНК-флуориметрии.

На фиг.1 приведены спектры флуоресценции препарата (Z) и "Хехста-33258 в,фосфатном буфере (М 0,05) при рН

6,8); на фиг.2 - гистограммы распределения окрашенных клеток тимуса мыши по интенсивности флуоресценции. который может найти применение в качестве красителя в методе ДНК-флуориметрии.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

1530628

П р и и е р 1„ Тригидрохлорид 2(2-фенил-5(6)-бензимидазолил)-Г -(3диметиламинопропил)-5(6)-бензимидазолкарбоксамида.

Раствор 0,4 г (1,5 ммоль) 3-нитро4-амино-N-(3-диметиламинопропил)бензамида в 30 мл метанола гидрируют при комнатной температуре и нормальном давлении в присутствии Ni Ренея

10 (10 мас. ). После поглощения расчетного количества водорода раствор отфильтровывают в атмосфере аргона, упаривают метанол в вакууме, остаток растворяют в 30 мл ледяной уксусной кислоты. К полученному раствору добавляют 0,581 г (1,58 ммоль) гидрохлорида метоксиэтилового иминоэфира

2-фенил-5(6)-бензимидазолкарбоновой кислоты. Реакционную смесь кипятят

5 ч. Уксусную кислоту отгоняют B вакууме. Маслянистый остаток затирают до образования кристаллов в 30 мл 7 н. раствора хлористого водорода в изопропиловом спирте. Осадок отфильтро- 25 вывают, промывают ацетоном. Выход

0,558 г (68 ). Т.пл. 350 С, Найдено„ 4: С 56,84; Н 5,21

15,25„ Cl 19,50. М =438 (массспектрально, B виде основания)

СтьНгьГ1 ° О 3" 1

Вычислено, б: С 56,99; Н 5,33, i5,34, Cl 19,41. M=438,5.

Основная область излучения полученного препарата (1) лежит в пределах 350-450 нм, 9, = 387 нм.

Краситель "Хехст, 3258" обладает следующими спектральными характеристиками; il =465 нм s основной области

>щк излучения 410-530 нм (фиг.1) .

Пример 2, Интенсивность флуоресценции клеток, окрашенных препаратом (I) или Хехст-33258, пропорциональна содер>кан ю в них ДНК. Гистограммы распределения окрашенных кле- 45 ток тимуса мыши пе интенсивности флуоресценции (фиг.2) идентичны для сравниваемых красителей, Результаты определения долей клеток, находящихся в разных фазах клеточного цикла (С +С,, S и С +И), по50 лученные при обработке 10 гистограмм для каждого красителя, даны в таб.-. лице.

Ъ

Коэффициенты вариации пиков G +G<

55 гистограмм невелики, что свидетельствует о высокой стабильности и надеж ности окрашивания. Таким образом, аналогично красителю Хехст-33258

Характеристики Показатели для препарата

Хехст-33258 (Т) Параметры ДКНгистограммы: доля С,>+, +с,, Z 89,6а0,6 доля S, 4 5,310,3 доля С М,7 5,1+0,3

Коэффициент вариации пика

Со+С < 2,510,2

Относительная доля AT-пар в геноме ящерицы по сравнению с геномом

90,21;0,5

5,0+0,4

4,8i092

2,4+0,2

О, 793+ О, 01 5 О, 774+ О, 016 мыши

АТя/ (АТ+ГЦ я

АТм (АТ+ГЦ) м

Предлагаемый препарат - тригидрохлорид 2-(2-фенил-5(6)-бенэимидазолил)-Y-(3-диметиламинопропил)-5(6)бензимидазолкарбоксамид отличается о от известных ДНК-тропных флуоресцентных зондов тем, что имеет структурированную эмиссионную полосу, не перекрывающуюся с аналогичными полосами известных флуоресцентных меток, и более высокий квантовый выход, что расширяет возможности многопараметрического анализа в клеточной биологии и биотехнологии. ф о р м у л а и э о б р е т е н и я

Тригидрохлорид 2-.(2-фенил-5(6)бензимидазолил1-N-(3-диметиламинопропил)-5(6)-бенэимидаэолкарбоксамида формулы

N (СН31УИСН113КНСО! > i .ЗНС! в качестве флуоресцентного красителя для исследования ДНК. препарат (1) может использоваться для количественной ДНК-цитометрии.

Предлагаемый препарат (1) обладает ярко выраженной нуклеотидной специфичностью. Результаты оценки относительной доли AT-nap в геноме двух животных (ящерицы и мыши), проведенной с помощью сравниваемых красителей, практически одинаковы. Таким образом, препарат (Z) обладает нуклеотидной специфичностью AT-типа.

1530628

1530628

50, 100 7$0 (одерж. ЯМ (ояц.ед) на клепик

10 с 5È"

5Р IN (50

Соберя. gHK на клеяку (отн.ед)

Фиг 2

Составитель Г.Жукова

Редактор И.Гунько Техред М.дидик Корректор M,Êó÷åðÿâàÿ

Заказ 7862/27 Тираж 352 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина,101