Способ получения s-аденозилгомоцистеина

 

Изобретение относится к биохимии и биотехнологии. Цель изобретения - увеличение выхода S-аденозилгомоцистеина на 1 г ткани печени и получение меченого радиоактивными изотопами S-аденозилгомоцистеина с высоким уровнем включения метки. Цель достигается через внутрибрюшинное инъецирование животным диоксипропиладенина в дозе 150 - 250 мг/кг массы тела в концентрации 150 - 250 мг/мл физиологического раствора за 2 - 6 ч до забоя и введение за 20 мин до забоя L-метионина и глицина в дозе 100 мг/кг массы тела в физиологическом растворе, с последующими извлечением печени, гомогенизацией, центрифугированием, экстракцией диэтиловым эфиром, хроматографией на колонке с фосфоцеллюлозой CELLEX-P, элюцией целевого продукта и его лиофилизацией. Предлагаемый способ позволяет получить выход S-аденозилгомоцистеина - 1 мкг/г ткани печени, а удельная радиоактивность меченого S-аденозилгомоцистеина составляет 20 мкКи/ммоль. Применение предлагаемого способа облегчает обеспечение работ по экспериментальной онкологии, медицинской биохимии S-аденозилгомоцистеином, 1 з.п. ф-лы. 2 ил.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51) 5 G 01 Н 7/00, 7/06

С 12 Р 19/40

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н A ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

250 мг/кг массы тела в концентрации

150-250 мг/мл физиологического раст- . вора за 2-6 ч до забоя и введение за 20 мин до забоя L-метионина и глицина в дозе 100 мг/кг массы тела в физиологическом растворе, с пос ледующими извлечением печени, гомогениэацией, центрифугированием, 3Кстракцией диэтиловым эфиром, хроматографией на колонке с фосфоцеллюлозой Cellex-P, элюцией целевого продукта и его лиофилиэацией. Предлагаемый способ позволяет получить выход S-аденозилгомоцистеина 1 мкг/г ткани печени, а удельная радиоактивность меченого S-аденоэилгомоцистеина составляет 20 мкКи/ммоль. Применение предлагаемого способа облегчает обеспечение работ по экспери-ментальной онкологии, медицинской биохимии S-аденоэилгомоцистеином. з.п. ф-лы, 2 ил.

S-аденозилгомоцистеина в ткани печени крыс после введения им диоксипропиладенина; на фиг.2 — график динамики изменения радиоактивности

I фракций S-аденоэнлгомоцистеина, полученных после хроматографии экстрактов ткани печени крыс после внут1Л ривенного введения Ь-(U- С -метионина.

Достижение поставленной цели осу- Й ществляется sa счет предварительного (эа 2-6 ч до забоя) внутрибрюшинного введения диоксипропиладенина с последующим (за 20 мин до забоя) внут- рибрюшинным введением L-метионина и

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНЯТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4447421/30-13 (22) 24.05.88 (46) 23.03.90. Бюп. N 11 (71) Всесоюзный онкологический научный центр АИН СССР (72) Е.Н.Орлов, Ю.В.Букин и В.А.Драудин-Крыленко (53) 547.85.04 (088.8) (56) Eloranta T.Î. — Biochem. J. 1977, v. 166 ) р. 521-529. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ S-АДЕНОЗИЛГОМОЦИСТЕИНА (57) Изобретение относится к биохимии и биотехнологии. Целью изобретения является увеличение выхода Sаденозилгомоцистеина на 1 г ткани печени и йолучение меченого радиоактивными изотопами S-аденозилгомоцистеина с высоким уровнем включения метки. Цель достигается через внутрибрюшинное инъецирование животным диоксипропиладенйна в дозе 150—

Изобретение относится к. биохимии, а именно к способам получения соединений, играющих ключевую роль в обмене серосодержащих клеточных компонентов и используемых в медицинской биохимии, экспериментальной онкологии и генной инженерии.

Целью изобретения является увеличение выхода S-аденоэилгомоцистеина на 1 r ткани печени и получение меченого радиоактивными изотопами Sаденозилгомоцистеина с высоким уровнем включения метки.

На фиг. 1 представлен график динамики изменения уровня содержания

„„SU„„1552072 А 1 глицина. В результате получают 10кратное увеличение с.одержания S-аденозилгомоцистеина (Ас!оНеу) на 1 г печени крыс по сравнению с известным способом. Повышение выхода меченого радиоактивными изотопами Баденозилгомоцистеина с высоким включением метки достигается путем вве дения животн BHYT!)HBeHHO эа 4-б H10 .до забоя 2,5-10,0 мКи/кг массы тела, 1 ,меченого радиоактивныии изотопамн

L-метионина .

Пример 1. Самцам белых беспородных крыс весом около 200 г эа

4 ч до забоя внутрибрюшинно вводят диоксипропиладенин в дозе 200 мг/кг массы тела в концентрации 200 мг/мл физиологического ра" òâîðà. Затем эа

20 мин до забоя внутрибрюшинно вводят Ь-метионин и глицин в дозе по

100 мг/кг каждый в физиологическом растворе. Животных забивают транслокацией шейного позвонка, извлекают печень и охлаждают в ледяном физиоло- 25 гическом растворе, гомогениэируют с !

7 Н О и 4V 50%-ной трихлоруксусной кислоты. Затем гомогенат центрифуги-. руют в течение 20 мин при б000 об/мин, супернатант трижды экстрагируют !V эфира, водную фазу фильтруют и наносят на колонку (! х 7 см} с Cellez-Р„ уравновешенную 1 иИ НСТ. Примеси отделяют пропусканием 100 мл 10 мЕ

НС1, AdoHcy элюируют с 20 мл 50 мЬ)

НС1 и определяют спектрофотометриЭ5 чески при 257 нм. Для длительного peHeHH)) элюат лиофилиэируит.

Содержание АйоНсу после указанных воздействий составляет в печени более 1 мкг/г ткани, что более чем в

10 раз превышает его значение при использовании известного способа. Чистота продукта при этом составляет более 95%.

Пример 2, Проводят аналогично примеру 1, но для получения АаоНсу, меченого радиоактивными иэотопами, допощ ительно за 5 мин до забоя животным внутривенно вводят 5 мКи/кг массы тела 1- r 5 SJ-метионина. При этом выделяют около 100 мкКи DL- (+ Sj -AdoHcy или 50 мкКи L- S)-AdoHcy с удельной. активностью около 20 мкКи/ммоль. Чистота продукта более 95%.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет в лабораторных условиях быстро и достаточна просто получать значительные количества S-аденоэилгомоцистеина — до 1 мкг/г тка- . ни печени, инъекция же меченого радиоактивными изотопами Ь-метионина обеспечивает выход 100 мкКи DL- (3 S)35

-AdoHcy с удельной активностью до

20 мкКи/ммоль. Чистота продукта при этом составляет более 95%.

Полученные предлагаемым способом препараты немеченого и меченого Sаденозилгомоцистеина по своим характеристикам удовлетворяют требованиям, предъявляемым к этому соединению в целях его использования для определения тестовых ферментативных активностей серосодержащих соединений клетки, в ингибиторном анализе сис- . тем переноса метильных групп. Кроме того, применение способа ускорит и упростит обеспечение работ в области экспериментальной онкологии, медицинской биохимии и генной инженерии таким важным клеточным интермедиатом, как S-аденозилгомоцистеин.

Формула изобретения

Способ получения S-аденозилгомоцистеина, включающий внутрибрюшинное введение L-метионина и глицина, забой животного,извлечение печени, ее гомогенизирование, экстракцию эфиром, хроматографию на фосфоцеллюлозе Cellex-Ð, лиофилизацию выделенного. продукта, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью увеличения выхода S-аденозилгомоцистеина на 1 r ткани печени, эа 2-б ч до забоя вводят диоксипропиладенин в дозе 150-250 мг/кг массы тела в концентрации 150-250 мг/мл физиологического раствора.

2. Способ по п. 1, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью получения меченого изотопами S-. àäåíîçèëгомоцистеина с высоким уровнем включения метки, за 4-.6 мин до забоя животным дополнительно внутривенно .вводят ?,5-10 мКи/кг массы тела L-метионина, меченого радиоактивными изотопами.

1552072

Составитель Н.Александрушкина

Редактор И.Дербак Техред М.Ходанич Корректор Т.Палий г, Заказ 325

Тирах 491

Подпис ное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ухгород, ул. Гагарина, 101. ъВ

2 4 д 8

Ярая, v

8реюя, пои

ФФ8. Я