Способ определения реперфузионного повреждения миокарда после ишемии

 

Изобретение относится к экспериментальной биологии, преимущественно кардиологии, и может быть использовано для скрининга веществ, предупреждающих реперфузионные и ишемические нарушения в миокарде. Цель изобретения - повышение точности. Для достижения указанной цели в период реперфузии миокарда после 30-минутной тотальной ишемии измеряют активность эктоаденозинтрифосфатазы (экто-АТФазы) сердца следующим образом: после 20 мин реперфузии, когда выход внутриклеточных АТФазы прекращается, через сердце пропускают раствор, содержащий 150 мкМ АТФ. В оттекающем перфузате определяют концентрацию АТФ и рассчитывают скорость гидролиза АТФ в сердце. Точность повышается за счет исследования на целом сердце.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

„„80„„1570707 (ц) 5 А 61 В 5/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

r10 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ П<НТ СССР

1 (21) 4444408/28-14 (22) 12.05.88 (46) 15.06.90. Бюл. Р 22 (71) Воронежский государственный медицинский институт им . Н,Н .Бурденко (72) В.В.Алабовский, О.Д.Олейников и В.В.Рябова (53) 612. 172 (088.8) (56) Защита миокарда от ишемии в экспериментальной и клинической кардиохирургии: обзорная информация./ Под ред. Е.В.Безлипова. M.: ВНИИМИ, 1984, -73С-. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕПЕРФУЗИОННОГО ПОВРЕЖДЕНИЯ МИОКАРДА ПОСЛЕ ИШЕМИИ.(57) Изобретение относится к экспериИзобретение относится к экспериментальной биологии, преимущественно кардиологии, и может быть использовано для скрининга веществ, предуг; реждающих реперфузионные повреждения миокарда после ишемии, Цель изобретения — повышение точности, Способ осуществляется следующим образом.

В период реперфузии миокарда после 30-минутной. тотальной ишемии измеряют активность эктоаденозинтрифосфатазы (экто-АТФазы) сердца следующим образом: после 20 мин реперфузии, когда выход внутриклеточных АТФаз

2 ментальной биологии, преимущественно кардиологии, и может быть использовано для скрининга веществ „предупреждающих реперфузионные и ишемические нарушения в миокарде. Цель изобрете ния - повышение точности. Для достижения указанной цели в период реперфузии миокарда после 30-минутной тотальной ишемии измеряют активность эктоаденозинтрифосфатаэы (эктоАТФазы) сердца следующим образом: после 20 мин реперфузии, когда выход внутриклеточных АТФаз прекращается, через сердце пропускают раствор, содержащий 150 мкМ АТФ. В оттекающем перфузате определяют концентрацию

АТФ и рассчитывают скорость гидролиза АТФ в сердце. Точность повышается за счет исследования на целом сердце, прекращается, через сердце пропускают раствор, содержащий 150 мкМ АТФ.

В оттекающем перфузате определяют концентрацию АТФ и рассчитывают скорость гидролиза АТФ в сердце.

Пример 1, Спонтанно сокращающееся сердце белой крысы (Macca сердца 1 г), извлеченное у наркотизированного эфиром животного, перфузируют через аорту раствором Рингера-Локка, насыщенным кислородом при рН 7,4 и

О температуре 37 С. Скорость перфузии устанавливают постоянной с помощьюперистальтическогонасоса (10мл /млн.г) .

После перфузии сердца в этих ус ловлях в течение 20 мин — времени, несбхсди.мого для стабилизации параметров сок—

1570707 ращения — в перфузат вводят АТФ до конечной концентрации в растворе

100-200 мкм/л. (150 — 37) 10

1000. 1

Составитель В.Кобры

Редактор В, Ковтун Техред A.Êðàâ÷óê Корректор С.Черни

Заказ 1469

Тираж 554

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при.ГКНТ СССР

1 l3035, Москва, Ж-35., Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Ужгород, ул. Гагарина, 101

Затем, в оттекающем от сердца растворе определяют содержание АТФ, которое по измерениям составляет 37мкм/л.

Рассчитывают количество распавшейся

АТФ (150 — 37 = 113 мкм/л) и скорость гидролиза экзогенной АТФ по формуле мкмоль/мин . г: (А-Б) П

1000 N где А — концентрация АТФ в перфузате до пропускания era через сердце, мкм/л;

Б — концентрация АТФ в оттекающем от сердца перфузате мкм/л;

П вЂ” коронарный проток,мл/мин;

М вЂ” масса сердца, Скорость гидропиза АТФ в данном примере составляет, мкмоль/мин г:

После 30 мин ишемии и 20 мин реперфузии содержание АТФ в оттекающем

30 перфузате составило 47 мкм/л. Отсюда, скорость гидролиза экзогенной АТФ равна 1,03 мкмоль/мин,ь . Различие достоверное, р (0,001, Измерение ак-. тивности фермента и измерение сократительной активности сердца в гериод 35 реперфузии позволило установить одновременное уменьшение этих параметров по сравнению с их значениями до ишемии.

Использование предлагаемого способа оценки реперфузионного повреждения миокарда по сле ишемии дае т возможность, не прибегая к разрушению ткани сердца, максимально точно оценить состояние мембраннЬ|х ферментов клеток при ишемии и реперфузии, кроме того, наличие связи между би-. охимическим и физиологическим параметрами позволяет использовать данный метод как маркер состояния электромеханического сопряжения миокарда при патологии, а также изучать состояние мембранных ферментов сердца при длительных сроках проведения эксперимента.

Формула изо бре тен ия

Способ определения реперфузионного повреждечия миокарда после ишемии путем измерения активности ферментов в работающем сердце, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения точности, измеряют -".:;-ивность 3Kтоаденозинтрифосфатазы путем пропускания через сердце раствора, содержащего 100-200 мкм/л аценозинтрифосфорной кислоты, а в оттекающем перфузате определяют концентрацию оставшейся аденозинтрифосфорной кислоты и по разнице концентрации определя( ют активность мембранной эктоаденозинтрифосфатазы„и при уменьшении ее активности в сравнении с нормой определяют реперфузионное повреждение миокарда.