Способ получения гиалуроновой кислоты

 

Изобретение относится к химии природных соединений - к получению гиалуроновой кислоты, которая применяется в качестве субстрата при количественном определении ферментов гиалуронидазного действия - лидазы и ронидазы, а также в медицине в качестве ранозаживляющего средства и пролонгатора действия различных лекарственных средств. Изобретение позволяет повысить качество целевого продукта (снизить содержание балластных белков и повысить срок хранения), увеличить его выход и исключить использование органического растворителя за счет того, что петушиные гребни обескровливают, измельчают, экстрагируют водой, экстракт термообрабатывают 1-2 мин при 90-100°С, охлаждают до 4-6 °С в течение 2-4 ч. Отделяют липиды, фильтруют, отделяют осадок сырья, в фильтрат вводят активированный уголь в количестве 1-2 % от массы исходного сырья и перемешивают 1-2 ч. Смесь фильтруют. Полученный фильтрат смешивают с осадком сырья и проводят двухстадийную экстракцию водой в течение 18-24 ч при 20-22°С в присутствии пенициллина в количестве 0,05-0,07% от массы исходного сырья с последующей сушкой экстракта. 1 табл.

СООЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

Щ)5 С 08 В 37/08

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А STOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4684654/23-05 (22) 24. 03.89 (46) 30. 12. 90. Бюл. У 48 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт текстильно-галантерейной промышленности (72) Л.И.Стекольников, В,В.Рыльцев, Т.Е.Игнатюк, Н.Ю.Плеханова, З.И.Мухтаров и Г.Б.Тулупова (53) 547.458.5 (088 ° 8)

I (56) Заявка Лпонии У 59-166504, кл. С 08 В 37/08, опублик. 1984.

Временная фармакопейная статья

"Лицаза" 11 42-182-72. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИАЛУРОНОВОЦ

КИСЛОТЫ (57) Изобретение относится к химии природных соединений, а именно к получению гиалуроновой кислоты, которая применяется в качестве субстрата при количественном определении фер" ментов гиалуронидазного действия— лидазы и ронидаэы, а также в медициИзобретение относится к химии природных соединений, а именно к способу получения гиалуроновой кислоты (ГУК), которая может быть применена в качестве субстрата при количественном определении ферментов гиалуронидазного действия — лидаэы и ронидаэы, в также в медицине в качестве ранозаживляющего средства и пролонгатора действия различных лекарственных средств.

„.80„„1616926 А 1 не в качестве ранозахивляющего сред.,ства и пролонгатора действия различных лекарственных срецств, Изобретение позволяет повысить качество целевого продукта (снизить содержание балластных белков и повысить срок хранения), увеличить его выход и исключить использование органического растворителя за счет того, что петушиные гребни обескровливают, измельчают, экстрагируют водой, экстракт термообрабатывают 1-2 мин при 90100 С, охлаждают до 4-6 С в течение о 0

2-4 ч. Отделяют липиды, фильтруют, отделяют осадок сырья, в фильтрат вводят активированный уголь в количестве 1-2% от массы исходного сырья и перемешивают 1-2 ч. Смесь фильтруют

Полученный фильтрат смешивают с осадком сырья и проводят двухстадийную экстракцию водой в течение 18-24 ч при 20-22 С в присутствии пенициллина в количестве 0,05-0,07% от массы исходного сырья с последующей сушкой экстракта ° 1 табл, Цель изобретения — повышение качества целевого продукта и упрощение способа °

Пример 1. Петухов в возрасте от б мес до 1 r. с крупными гребнями полностью обескровливают путем вскрытия сонной артерии, гребни срезают у основания, промывают водой, концы гребней, пропитанные кровью, срезают и отбрасывают.

1616926

° О

2О

5О

1 кг отпрепарированных гребней измельчают дважды на мясорубке, разбав ляют 2 кг воды (соотношение 1:2) и нагревают при 90 C в течение 1 мин,, О затем охлаждают при 4 С в течение

-2 ч, всплывший на поверхность слой липидов тщательно снимают и отбрасывают, остаток фильтруют через марлю, к фильтрату добавляют 10 г (1Ж к массе исходного сырья} активированного угля и перемешивают в течение 1 ч. CM8cb фильтруют, осадОк б ел к ов отбрасывают, а филь трат «рНсоединяют к Осадку сырья, который предварительно разбавляют 2 кг воды (соотношение 1:2), содержащей 0,5 г пенициллина (0,053 к массе исходнсгс сырья), и проводят зкстракцию при

20 С в течение 18 ч, Эк=тракт фильто руют через марлю, осадок сырья снова заливают 2 кг воды (соотношение 1:2), содержащей 0,5 г пенициллина, и экстрагируют при 20 С в течен å 18 ч, Экстракт фильтруют, фильтраты От первой и второй экстракции соединяют и сушат сублимацией. Получают 38 г (выход З,P7. к массе исходного -..ырья) ГУК с содержанием белка 0Ä57, растворы которой не теряют свсей вязкости при хранении порошка в ".".ечение 1 r.

П р. и м е р 2. 1 кг отпрепарированных, как указано в примере 1, петушиных гребней измельчают. дважды на мясорубке, разбавляют 2,5 кг воды (соотношение 1:2,5),и нагревают при

95 С в течение 1,5 мин, затем охлажо дают при 5 С в течение 3 ч, всплывший на поверхность слой липидсв "màтельно снимают и отбрасывают, остаток фильтруют через марлю, к фильтрату добавляют 15 г (1,5Х к массе исходного сырья) активированнсго угля и перемешивают в течение „5 ч, Смесь фильтруют„ осадок белков отl брасывают, а фильтрат присоединяют к осадку, который предварительно разбавляют 2.,5 кг воды (соотношение 1: 2, 5), содержащей О, 6 г е нициллина (0,06Х к массе исходного сырья), и проводят экстракцию при

21ОC в течение 21 ч, Экстракт фильтруют через марлю, осадок сырья снова заливают 2,5 кг воды (соотношение

1:2,5), содержащей 0,6 -, пенициллина, и экстрагируют при 21 С в течение 21 ч. Экстракт фильтруют, фильтраты от первой и второй экстракцин соединяют и сушат сублимацией. Получают 39 г (выход 3,9Е к кассе исходного сырья),"УК с содержанием белка

0,457,, растяп-,-ы которой нг теряют своей вязкости при хранении порошка в течение 1 г, Пример 3. 1 кг отпрепарированных, как указано в примере 1, петушиных гребней измельчают дважды на мясорубке, разбавляют 3 кг воды (соотношение 1."3) и нагревают при 100 С в течение 2 мин, антек Охлаждают при

rq

6 С в течение 4 ч, всплывший На поверхнсс .-ь слой липидсв тщательно снимают и Отбрасывают. Остаток фильтруют через марли,. к фн.—.ьтрату добавляют

/щ

20 г:., Х к массе исхсднс ro сырья) активирснанногс угля и перемешивают в течение 2 ч, Смесь фильтруют„ Осадок белков Отбрасывают,, а фильтра,; присоединяют к осадку, ксторый предварительно разбавляют 3 кг воды (состношение 1:3), содержащей 0,7 r пенициллина (0,077 к массе исходного сырья), и проводят экстракцию при

О

22 С в течение 24 ч, Экстракт фильтр) ют. "ер" 3 марлю Осадок сырья снова заливают 3 кг воды (соотношение i: 3j,. содержащей 0.7 г пг..-.ипиллина. и экстрагируют при 22 С в течение 24

Экстракт фильтруют, фильтраты от первой и Вт >рой экстрахitHvi соединяют и сушат сублимацией„Получают 40 Г (выход 4Х к массе исходного сырья)

ГУК с содержанием белка 0,4Е„растворы которой не теряют своей вязкости при хранении порошка в течение 1 г.

Сопоставительный -"нализ предлагаемого и известнсгс способов привсден в таблипг.

Ф О р и ул а и з o u p e т е н и я

Способ получения гиалуронсвой кислоты, включающий Обескровливание сырья, измельчение, экстракцию водой, термООбр2бОтку экстрЯ.кта при 9 О

100 С в течение 1-2 мин и его.фильт- àöHþ, с т л и -: а ю шийся тем, что, с целью повышения качества целевсго продукта и упрощения спсс.оба, в качестве сырья используют петушиные гребни, после термосбработкч экстракциснную массу схлаж@ают до 4-6 С в течьние 2-4 ч, от0 деляют липиды, массу фильтпуют, отделлют осадок сырья,:3 в фильтрат

Сро..< xpa- Содержание кения белка, Ж

Способ Выход ГУК, Ж к исходной массе сырья

1,5-1,7

3,8-4,0

2-3 сут

2,5-2,7

0,4-0,5

Не менее ! r.

Составитель О.Рокачевская

Редактор Н.Киштулинец Техред М.Моргентал Корректор М.Самборская

Заказ 4094 Тираж 437 Подписное

ВНИИПИ -Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Ужгород, ул. Гагарина, 101

5 16 ,вводят активированный уголь в количестве 1-2Х от массы исходного сырья, перемешивают 1-2 ч, смесь фильтруют, полученный фильтрат смешивают с осадf ком сырья и проводят двухстадийную

Известный

Предлагаемый

16926 6 экстракцню водой в течение 18-24 ч при 20-22оС в присутствии пенициллина в количестве 0,05-0,073 от массы исходного сырья с последующей сушкой экстракта.