Способ отбора жизнеспособных спор фитопатогенных грибов

 

Изобретение относится к фитопатологии и может найти применение для оценки биологической разнокачественности спор фитопатогенных грибов. Цель - упрощение процесса и повышение выхода жизнеспособных спор. Способ предусматривает концентрацию суспензии спор облигатных паразитов злаковых культур, используя безградиентный раствор сахарозы концентрацией 40 или 50% , и фактор разделения не более 850 g при продолжительности центрифугирования в пределах 10-15 мин. 3 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (st>s А 01 N 63/04,С 12 N 1/02

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4381105/13 (22) 22.12.87 (46) 15.01.91. Бюл. М 2 (71) Северо-Кавказский научно-исследовательский институт фитопатологии (72) О.А.Монастрыский, В.Т.Садковский, Л,M. Бессмельцева и Н.Ф,Мажара (53) 576.8 (088.8) (56) Воронина Э.Г. и др. Физиолого-биохимическая характеристика покоящихся спор гриба Е. thaxteriana, Докл. ВАСХНИЛ, 1984, М 5, 23 — 26.

Изобретение относится к фитопатологии и может быть использовано для оценки биологической разнокачественности спор фитопатогенных грибов, Цель изобретения — упрощение процесса и повышение выхода жизнеспособных спор, Способ осуществляют следующим образом.

В центрифужную пробирку наливают раствор сахарозы с концентрацией 40 или

507, сверху осторожно вносят небольшое количество суспензии спор в буферном растворе, например фосфатном или трис-фосфатном. Пробирку помещают в угловой ротор центрифуги и центрифугируют при факторе разделения 850 g в течение 10-15 мин. Это обеспечивает разделение спор на фракции — легкую в верхней части и тяжелую на дне пробирки, Жизнеспособные споры, сосредоточенные в легкой (верхней) фракции отбирают пипеткой, наносят на фильтровальную бумагу и отмывают от сахарозы дистиллированной водой.

5U 1620073 А1 (54) СПОСОБ ОТБОРА ЖИЗНЕСПОСОБНЫХ СПОР ФИТОПАТОГЕННЫХ ГРИБОВ (57) Изобретение относится к фитопатологии и может найти применение для оценки биологической разнокачественности спор фитопатогенных грибов. Цель — упрощение процесса и повышение выхода жизнеспособных спор. Способ предусматривает концентрацию суспензии спор облигатных паразитов злаковых культур, используя безградиентный раствор сахарозы концентрацией 40 или 50, и фактор разделения не более 850 g при продолжительности центрифугирования в пределах 10 — 15 мин. 3 табл.

Пример 1. Из трех образцов уредоспор возбудителя желтой ржавчины пшеницы, имеющих исходное значение прорастаемости 73, 78 и 74, отбирают по

50 мг и суспензируют каждую пробу в 1 мл

0.05 M фосфатного буфера рН 6,9. В центрифужную пробирку наливают 6 мл 40 или

50 g,-ного раствора сахарозы, сверху наслаивают суспензию уредоспор, Центрифугирование проводят при +5 С на центрифуге

ОПН-8 с угловым ротором при 3000 об,/мин (фактор разделения = 850 g) в течение

15 мин. После центрифугирования отбирают образовавшиеся фракции, отмывают от сахарозы и проводят оценку прорастаемости на 1 (, агар-агаре путем инкубации агаровых блоков с напыленными спорами в термостате при 10+ 2 С в течение 18 ч.

В табл. 1 представлена прорастаемость фракций уредоспор возбудителя желтой ржавчины пшеницы после фракционирования известным и предлагаемым способами.

Пример 2. Из трех образцов конидий возбудителя пирикуляриоэа риса с исход1620673

Таблица 1

Таблица 2 ными значениями прорастаемости 74, 34 и

29 отбирают по 50 мг и суспендируют в

1 мл 0,05 M трис-фосфатного буфера рН 6,0.

Режим центрифугирования и определение прорастаемости аналогично указанным, за исключением температуры инкубации, которая составляет 25+ 2 С.

8 табл. 2 приведены данные прорастаемости фракций конидий пирикуляции после фракционирования известным и предлагаемым способами, Как видно из табл. 1 и 2, в первой фракции концентрируется биологически активный материал; во второй фракции — менее жизнеспособный и другие примеси.

Пример 3, 50 мг уредоспор возбудителя бурой ржавчины пшеницы суспендируют в 1 мл 0,05 M фосфатного буфера рН 6,9.

В центрифужную пробирку наливают 6 мл

407-ного раствора сахарозы, сверху наслаивают суспензию уредоспор и центрифугируют по режиму, указанному в примере 1.

Пример 4.. 50 мг уредоспор возбудителя стеблевой ржавчины пшеницы суспендируют в 1 мл 0,05 M фосфатного буфера рН

6.9. 8 центрифужную пробирку наливают

6 мл 50 -ного раствора сахарозы, сверху наслаивают суспензию уредоспор и центрифугируют по режиму, указанному в примере 1.

В табл, 3 представлены данные прорастаемости уредоспор возбудителей бурой и стеблевой ржавчины пшеницы после фракционирования в растворе сахарозы.

5 Как видно из таблиц, в большинстве опытов прорастаемость спор I фракции по предлагаемому способу существенно различаются (при Р = 0,95) как между контролем, так и II фракцией.

10 Таким образом, предлагаемый способ позволяет значительно упростить и повысить выход жизнеспособных спор облигатных паразитов злаковых культур.

Формула изобретения

15 Способ отбора жизнеспособных спор фитопатогенных грибов, предусматривающий концентрирование суспензии спор в поле действия центробежных сил в центрифужных пробирках в растворе сахарозы с

20 последующим разделением полученных фракций на легкую и тяжелую,о т л и ч а юшийся тем, что, с целью упрощения процесса и повышения выхода жизнеспособных спор, концентрированию подверга25 ют суспензию спор облигатных паразитов злаковых культур в растворе сахарозы 40 или 50";(,-ной концентрации и факторе разделения не более 850 g, а жизнеспособные споры отбирают из легкой фракции.

ЗО

1620073

Таблица 3

Составитель И.Привалова

Редактор Т.Парфенова Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор М.Шароши, Заказ 4201 Тираж Подписное

8НИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Рэушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101