Способ выделения мононуклеаров из крови человека

 

Изобретение касается иммунологии и может быть использовано при исследованиях клеток крови. Цель изобретения - повышение чистоты целевого продукта за счет снижения примеси тромбоцитов. Способ осуществляют посредством разведения клеточной фракции крови изотоническим раствором с добавлением гепарина и разделения клеток в градиенте плотности с добавлением того |же количества гепарина. Достигается примерно 10-кратное снижение примеси клеток тромбоцитов по сравнению с известным способом, что существенно повышает точность иммунологических тестов целевого продукта.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИМИСТИЧЕСНИХ

КСПУБЛИН (51 ) 5 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ тестов целевого продуктл.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4436116/1 4 (22) 06.06.88 (46) 15.02.91, Бюл, Р 6 (71) Донецкий медицинский инсти-.ут им. И.Горького (72) А,С,Прилуцкий, А.В.Ходлковский и 3.А,райлян (53) 612,119(088.8) (56) Новиков Д.К °, Новикова В,И, Клеточн методы иммунодилгностики, Минск, 1979, r.,221. (54) СПОСОБ ВЬДЕЛЕНИЯ НОНОНУКЛЕАРОВ

И3 КРОВИ ЧЕЛОВЕКА (57) Изобретение касается иммунологии

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано при лабораторных исследованиях для определения характеристик фракций крс ви, Цель изобретения — повн . ние чистоты целевого продукта зл счет снижения примеси тромбоцитов.

Пример 1, Кровь смешивают с антикоа улянтом, центрифугируют !

О мин при 180g, отбирают плазму.

Оставшийся клеточный осадок разводят в 2-5 раз изотоническим раствором, содержашим гепарин в количестве

100 ед/мл>и наслаивают на градиент плотности d 1,077 г/см (1 объем градиента на 2-4 объема суспензии), в который также вносят гепарин в том же соотношении, после чего клеточную: суспенэию центрифугируют. Центрифуги рование осуществляют при 400g в те„„SU„„1627989 А 1

2 и может быть использовано при исследованиях клеток крови. Цель изобретения-повышение чистоты целевого продукга

3л счет снижения примеси тромбопитов.

Способ осуществляют посредством разведения клеточной фракции крови изотоническим раствором с добавлением геплрина и разделения клеток в градиенте плотности с добавлением того же количества геплринл. Достигается примерно IО-крлтное снижение примеси клеток тромбоцитов по сравнению с извес.тным способом, что существенно повышлет точность иммунологических

I чение 14 мин. Полученну» фракцию (кольцо") мононуклелров отсасывают в другую пробирку и отмывают фосфатным буфером или раствором Хенкса, .Пример 2. Донор Il A Н,, 1961 r р. Из двух пр rl крови объемом { ф

0,3 мл выделяют в градиенте плотности с добавлением 25 ед/мл гепарина при длительности центрифугирования

l2, 18 мин 2,4 и 2,2 млн мононуклеа- (р ров. Примесь эритроцитов, тромбоцитов, полиморфоядерных лейкоцитов в отобранной фракции составила 14/250/0,3 и

16 /220/О, 5 на 1 00 мононуклеаров.

Пример 3, Донор Н,A.À., 1960 г.р. Из пробы крови объемом

0,2 мл выделено 2,91 млн мононуклеаров.

Примесь эритроцитов, тромбоцитов и полиморфоядерных лейкоцитов составляет 17/250/0,3 на 100 мононуклеа1627989

Формула изобретения

Составитель С.Мельникова

Техред Л.Олийнык Корректор А,Осауленк6

Редактор А.Огар

Заказ 338 Тираж 406 Подпис ное

ВНИЙПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям прн ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Рвуыская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101 ров. Полученная взвесь моионуклеаров была использована в микролимфоцитотоксическом тесте. Определены

HL А А2 19; В 7,12; С бланк.

5

При использовании в этом,же тесте взвеси мононукле аров, полученных известным способом, определены НЬ А.

А 2, 19; В 7,)21 С бланк. В двух иэ девяти лунок с антисыворотками против 10 антигена А2 при использовании мононуклеаров, содержащих большые количества примеси тромбоцитов (2000 на

100 мононуклеаров), зарегистрировано нижение интенсивности цитотоксичесой реакции (с 4х + до 2х +). Приесь тромбоцитов в полученных предлагаемым способом взвесях мононуклеаров составляет. 220-250 на 100 мононуклеаров, в полученных известным спо- 20 собом — 1800+200.

Способ выделения мононуклеаров иэ крови человека путем забора пробы крови, разведения ее изотоническим раствором и выделения продукта в градиенте плотности центрифугироввнием, отличающийся тем, что, с целью повышения чистоты целевого продукта эа счет снижения примеси тромбоцитов, иэ пробы крови отделяют плазу центрифугнрованием, разведение изотоныческим раствором с добавлением 25-100 ед/мл гепарина применяют для клеточной фракции, такое же количество гепарына добавляют в градиент плотности, а центрифугирование осуществляют в течение !218 мин.