Двуслойная питательная среда для родовой идентификации энтеробактерий

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается родовой идентификации энтеробактерий. Цель изобретения - повышение дифференцирующих свойств среды. Навеску вещества нижнего слоя, включающего, г: ЭКД 0,1-0,25, пептон 2,5-3,5, глюкоза 1,0-1,5, тиосульфат натрия 1,9-2,2, микробиологический агар 1-2, обезвоженный динатрийфосфат 2,0-2,5, феноловый красный 0,02-0,03, бриллиан товый зеленый 0,001-0,0015 вносят в 300 мл дистиллированной воды, кипятят 2-3 мик, охлаждают до и прибавляют 1,1-1,4 г 50%-ного водного раствора мочевины, выдерживают 2- 3 сут, разливают по 2 мл в виде столбиксг Навеску вещества верхнего слоя, состоящую из 0,2-0,5 г ЭКД, 8-10 г лактозы,5,8-7 г микробиологического агараs 4s5-5,5 г обезвоженного динатрийфосфата 0,49-0,6 г солк Мора, 0,056-0,6 г фен ттового красного, 0,4-0,7 алкипбензрдсу-тьфата натрия, вносят в 700 мл дистиллированной воды , кипятят 2-3 мин, охлаждают до 50°С и разливают по 4,5 мл поверх застывшего нижнего слоя и скашивают, - оставляя столбик в 2 см. О ферментации лактозы судят по изменению цвета агара в скошенной части, о ферментации глюкозы - в нижнем столбике, в котором при газообразовании появляются пузырьки, об образовании сероводорода - -по почернению верхнего столбика средьь При гидролизе мочевины скошенная часть среды приобретает ярко-малиновый цвет,, а при росте протея - вся среда окрашивается в ярко-малиновый цвет,, s s DO

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

r1O ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЬ ТИЯМ

ПРИ ГННТ СССР (21) 4669224/1 3 (22) 02. 01 ° 89 (46) 28.02.91. Бюл. Р 8 (71) Научно-производственное объединение "Питательные среды" (72) В.С. Балаклеец и Т.Д. Иеломинская (53) 576.8.093.1(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Р 737452, кл. С 12 N 1/20, 1976.

Авторское свидетельство СССР

У 688518, кл. С 12 0 1/04, 1978. (54) ДВУСЛОЙНАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА

ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается родовой идентификации энтеробактерий. Цель изобретения — повышение дифференцирующих свойств среды. Навеску .вещества нижнего слоя, включающего, r: ЭКД

0,1-0,25, пептон 2,5-3,5, глюкоза

1,0-1,5, тиосульфат натрия 1,9-2,2, микробиологический агар 1-2, обезвоженный динатрийфосфат.. 2,0-2,5, феноловый красный 0,02-0,03, бриллиантовый зеленый 0,001-0 0015 вносят в 300 мл дистиллированной воды, киИзобретение относится к медицинской микробиологии и касается родовой идентификации энтеробактерий.

Цель изобретения — повышение дифференцирующих свойств среды.

Среду готовят следующим образом.

Навески веществ (нижний слой) вносят в 300 мл дистиллированной воды, о кипятят 2-3 мин., охлаждают до 50 С и прибавляют стерильно 2,4 мл 507.-ной мочевины (1,2 г), выдержанной 2-3 сут д) С 12 Q 1/04, С 12 N 1/20

2 пятят 2-3 мин, охлаждают до 50 С и

d, прибавляют 1,1-1,4 r 50K-ного вопного раствора мочевины, выдерживают 23 сут, разливают по 2 мл в виде столбика. Навеску вещества верхнего слоя, состоящую из 0,2-0,5 г ЭКД, 8-10 г лактозы,5,8-7 г микробиологйческого агара, 4,5-5,5 г обезвоженного динатрийфосфата 0,49-0,6 г соли Мора, 0,056-0,6 г фенолового красного, 0,4-0,7 алкилбензолсульфата натрия, вносят в 700 мл ди."."иллированной воды, кипятят 2-3 мин, охлаждают до

5G C и разливают по 4,5 мл поверх застывшего нижнего слоя и скашивают, оставляя столбик в 2 см. О фермента- .) ции лактозы судят по изменению цвета агара в скошенной части, о ферментации глюкозы — в нижнем столбике, в котором при газообразовании появляются пузырьки, об образовании сероводорода — по почернению верхнего столбика среды. При гидролизе мочевины скошенная часть среды приобретает ярко-малиновый цвет,,а при росте протея — вся среда окрашивается в ярко-малиновый цвет. для самостерилизации, разливают по

2 мл и охлаждают в виде столбика.

Навеску веществ верхнего слоя вносят в 700 мл дистиллированной воды, кипятят 2-3 мин, охлаждают до 50 C и разливают по 4,5 мл поверх застывшего нижнегб слоя и скашивают, оставляя столбик в 2 см.

Подготовка тест-штаммов к посеву.

Тест-штаммы энтеробактерий сохраняют в лиофилизированном состоянии или

1631090 на питательной среде следующего состава, г/л;

Питательный бульон сухой 1,5

Натрий хлористый 5 0

Микробиологический агар рН 7,2+0,2

Культуры тест-штаммов, со среды хранения пересевают на скошенный питательный агар и выращивают 18-24 ч при 37оС. Далее по 1 бактериологичес10 кой петле диаметром 2 мм культуры каждого тест-штамма энтеробактерий вносят в 3 пробирки с испытуемой средой. Посев проводят вначале по скошенной части в виде прямой линии, f5 затем в толщу агарового столбика и заканчивают по скошенному агару штрихом. Причем угол в толщу агарового столбика не должен достигать дна с тем, чтобы не нарушались условия для сбраживания глюкозы в относительно анаэробных условиях. Контрольную пробирку оставляют незасеянной.

Примеры использования среды.

Пример 1 ° Приготовление нижнего слоя среды.

0,1 г экстракта кормовых дрожжей, 25 r пептона, 1,0 г глюкозы, 1,9 г тиосульфата натрия, 1,0 r агара, 2,0 r обезвоженного динатрийФосфата, 30

0,02 фенолового красного, 0,001 бриллиантового зеленого растворяют в

300 мл дистйллированной воды, доводят до полного растворения при кипячении в водяной бане в течение 2-3 мин, ох- 35 лаждают до 50 С. Прибавляют 2,2 мл

507-ного водного раствора мочевины .(1,1 r) приготовленной за три и более дней до использования, среду тщательно размешивают, стерильно раз- 40 ливают по 2 мл в пробирки, остуживают столбиком поверх которого наливается верхний слой данной среды.

Приготовление верхнего слоя срецы. 45

0,2 r экстракта кормовых дрожжей, 8,0 г лактозы, 5,8 r микробиологического arapa, 4,5 r обезвоженного динатрийфосфата, 0,49 r соли Мора, 0,056 г фенолового красного, 0,4 r алкилбен золсульфат натрия растворяют в 700 мл дистиллированной воды. Устанавливают рН 7,4 0,3. Сфеду кипятят 3-5 мин, охлаждают до 50 С, разливают асептично в пробирки по 4 5 мл поверх заФ 5 стывшего нижнего слоя среды и скашивают оставив столбик высотой до 2 см.

Э

Готовую среду можно хранить при 4 С до тр ех н ед ель .

Через 19 ч инкубации при 37 С определяют наличие роста культур, стабильность их биологических свойств, дифференцирующие свойства среды.

О ферментации.лактозы на разработанной среде судят по изменению цвета агара в скошенной части, а î Аерментации глюкозы — в нижнем столбике, в котором при газообразовании появляются пузырьки (разрывы среды или ее отслоение от стенок пробирки).

Образование сероводорода устанавливают по почернению верхнего столбика среды (в виде кольца). При росте культуры, гидролизующей мочевину, скошенная часть среды приобретает ярко малиновый цвет.

Исключение составляют протеи.

В этом случае вся среда приобретает ярко-малиновый цвет за счет интенсивного расщепления мочевины.

Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что в 300 мл дистиллированной воды вносят для приготовления нижнего слоя среды 0,15 г экстракта кормовых дрожжей, 3,0 r пептона, 1,2 г глюкозы, 2,04 r тиосульфата натрия, 1,5 г агара, 2,1 обезноженного динатрий фосфата, 0,02 r фенолового красного, 0,001 г бриллиантового зеленого, 2,4 мл 507.-ного водного раствора мочевины (1,2 r). Для приготовления верхнего слоя в 700 мл дистиллированной воды растворяют 0,35 г экстракта кормовых дрожжей, 9,52 г лактозы, 6,3 r агара, 4,9 обезвоженного динатрийфосфата, 0,56 r соли

Мора, 0,056 r фенолового красного, 0,42 алкилбензолсульфата натрия,.

Пример 3. Отличается от примера 1 и 2 тем, что для приготовления aaKHего csroa cp ephor a 300 wz дистиллированной воды вносят 0,25 г экстракта кормовых дрожжей, 3,5 пептона, 1,5 r глюкозы, 2,2 r тиосульфата натрия, 2,0 агара, 2,5 г обезвоженного динатрийфосфата, 0,03 фенолового красного, 0,0015 r, бриллиантового зеленого, 2,8 мл 5hZ-ного водного раствора мочевины (1,4 г).

Для приготовления верхнего слоя среды вносят 0 5 г экстракта кормовых дрожжей, 10,0 лактозы, 7,0 агара, 5,5.г обезвоженного динатрийфосфа- та, 0,06 соли Мора, 0,06 г фенолового красного, 0,7 г алкилбензолсульфата натрия.

163

Приготовление сухой среды.

Пример 4. Для приготовления нижнего слоя среды в шаровую мельницу емкостью 5 кг загружают

0,48 г экстракта кормовых дрожжей, 0,958 r пептона, 0,383 r глюкозы, 0,652 г тиосульфата натрия, 0,674 r обезвоженного динатрийфосфата, 0,008 r фенолового красного, 0,0003 г бриллиантового зеленого, 0,479 г микробиологического arapa.

Смесь перемешивают в течение 1 ч.

Выход 3,120 кг.

Для приготовления верхнего слоя в шаровую мельницу емкостью 10 кг загружают 0,112 г экстракта кормовых дрожжей, 3,036 r лактозы, 1,562 обезвоженного динатрийфосфата,, 0,178 г соли Мора, 0,018 г фенолового красного, 0,134 г алкилбензолсульфат натрия, 2,009 r микробиологического агара. Смесь перемешивают в течение 1 ч. Выход 6,800 кг. Общий вес среды 10 кг.

При сравнении дифференцирующих свойств сред установлено, что на средах ДУКС и Олькеницкого отсутствует или имеется очень незначительное се" роводородообразование у культур:

Salmonella typhi Н Р 901, Proteus

vulgaris НХ19 Р 222, Citrobacter

Р 33/61. !

На среде ДУСК при интенсивном образовании сероводорода культурами группы протея некоторых сальмонелл (S.typhimurium, S.paratyphi В Р 506), наблюдается полное почернение верхнего и нижнего столбиков. среды, что затрудняет учет ферментации глюкозы.

Среда ДУКС не дифференцирует микроорганизмы Klebsiella pneumonia u Entегоbacter aегоgenes по тесту утилизации мочевины, Модифицированная среда обладает более выраженными дифференцирующими свойствами, не требует стерилизации, при приготовлении ее не используется пищевое сырье. В готовом виде среда может храниться длительное время.

Формула изобретения

Двуслойная питательная среда для родовой идентификации энтеробактерий, содержащая в верхнем слое агар, лактозу, источник железа,. соль фосфорной

4,5-5,5

0,49-0„6

0,056-0,06

598 ?

0,10-0,25

0,25-3,5

1,0-1 ü5

1,9-2,2

2,0-2,5

0,.02-0,03

О, 001-0,0015 вода

0,3 а

6 кислоты, феноловый красный, селективный агент и дистиллированную воду, а в нижнем слое — агар, глюкозу, соль фосфорной кислоты, тиосульфат натрия, феноловый красный, 50Х-ный водный раствор мочевины, селективный агент и дистиллированную воду, о т л и ч аю щ а я с я тем, что, с целью повышения дифференцирующих свойств среды, она в верхнем слое дополнительно ео-, держит экстракт кормовых дрожжей, в качестве агара — микробиологический агар, в качестве источника железа — соль Мора, в качестве соли фосфорной кислоть. — обезвоженный динатрийфосфат, в качестве селективного .агента — алкилбензолсульфат натрия, а в нижнем слое она дополнительно

20 содержит экстракт кормовых дрожжей и пептон, в качестве агара — микробиологический агар, в качестве соли фосфорной кислоты — обезвоженный динатрийфосфат, в качестве селективного агента — бриллиантовый зеленый при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:

Верхний слой:

Экстракт кормовых зо О, 2-0,5

Лактоза 8-10

Обезвоженный динат1-.ийфосфат

Соль Мора

Феноловый красный

Алкилбензолсульфат натрия 0,4-0,7

Микробиологический агар

Дистиллированная воде 0.7 л, Нижний слой:

Экстракт кормовых дрожжей

Пептон

Глюкоза

Тиосульфат натрия

Микробиологический агар . 1,0-2,0

Обезвоженный динатрийфосфат

Феноловый красный

50Х-ный водный раствор мбчевины 1,1-1,4

Бриллиантовый зелен и

Дистиллированная