Штамм дрожжей hansenula роlyмоrрна -биотрансформатор метанола в формальдегид

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается штамма , трансформирующего метанол в формальдегид. Цель изобретения - получение штамма, обеспечивающего повышение выхода формальдегида. Новый штамм представляет собой штамм дрожжей Hansenula polymorpha АЗ-24, полученный из дикого штамма Hansenula polymorpha DL 1 путем направленного многостадийного мутагенеза под действием УФ-лучей. Штамм Hansenula polymorpha АЗ-24 депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) под № У-705. Штамм в среде с метанолом накапливает 0,6 М формальдегида. 1 ил.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (Cd

° Ь 4

О

0 (21) 4331266/13 (22) 23.11.87 (46) 15.03.91. Бюл, № 10 (71) Львовское отделение Института биохимии им. А.В,Палладина (72) А,А.Сибирный и Г.П.Кшеминская (53) 663.18(088.8) (56) Couderc R, I.Baratti. Biotechnoi. Bioeng, 1980, ч. 22, р. 1155-1173.

Tanl G.,Sakai J,,Jamada Н. Agric. Biol.

Chem, 1985, v. 49, р, 2699-2706. (54) ШТАММ ДРОЖЖЕЙ HANSENULA

POLYMORPHA — БИОТРАНСФОРМАТОР

МЕТАНОЛА В ФОРМАЛЬДЕГИД

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается штамма, трансформирующего метанол в формальдегид.

Цель изобретения — получение штамма, обеспечивающего повышение выхода формальдегида.

Новый штамм Hansenula polymorpha

АЗ вЂ” 24 получен из дикого штамма типа

Hansenula polymorpha DL.1, который хранится в музее Института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, r. Пущино, путем направленного микростадийного мутагенеза под воздействием УФлучей.

При мутагенезе используют дозу УФ-лучей, обеспечивающую 10 выживания клеток. Вначале отбирают мутанты из штамма, резистентные при росте в среде с глюкозой к 0,1 MM аллиловому спирту, Один из полученных мутантов впоследствии подвергают УФ-индуцированному мутагенезу и отби, Ж Ä 1634709 А1

I (я)ю С 12 N 1/16, С 12 P 7/24 (57) Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается штамма, трансформирующего метанол в формал ьдегид. Цель изобретения — получение штамма, обеспечивающего повышение выхода формальдегида. Новый штамм представляет собой штамм дрожжей Hansenula

polymorpha АЗ вЂ” 24, полученный из дикого штамма Hansenula polymorpha 01 1 путем направленного многостадийного мутагенеза под действием УФ-лучей. Штамм

Hansenula polymorpha АЗ вЂ” 24 депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) под № У-705.

Штамм в среде с метанолом накапливает 0,6 М формальдегида. 1 ил. рают штаммы, проявляющие повышенную резистентность при росте в среде с метанолом к повышеннь(м концентрациям формальдегида (последовательно 6, 10. 12 мМ).

Полученный штамм дрожжей Hansenula

polymorpha АЗ вЂ” 24 депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) под ¹ У вЂ” 705, Штамм Hansenula polymorpha ВКПМ № У-705хэрактеризуется следующими культурально-морфологическими и физиологическими признаками.

Культурально-морфологические признаки, Вегетативные клетки при выращивании на сусло-агаре плотностью 8 Б при 370С в течение 2-3 сут имеют круглую или овальную форму размером (1,5 — 4,6) X (1.9 — 5,3) мкм, Клетки одиночные, редко встречаются небольшие скопления из 2 — 3 клеток. Размножение почкованием, В основном расположение почек апикальное. Мицелий или

1634709 псевдомицелий культура не образует, капсула отсутствует, Включения при просмотре в световом микроскопе выражены слабо.

Реакция с диазонием синим отрицательная, Вегетативные споры не образует. Культура не способна к спариванию, При длительном культивировании на сусло-агаре (более 2-х недель) около 0,5-1 клеток содержат споры, На сусло-агаре после 2 — 4 сут культивирования при 27, 30 и 37 С колонии и штрих светлокремовые, выпуклые, блестящие, с ровными краями, сметанообразной консистенции, легко снимается петлей.

B жидкой среде при выращивании на солодовом сусле плотностью 8 Á при 37 С в статических условиях на 2 — 3 сут образуется кольцо и островки очень тонкой пленки, а затем осадок клеток слегка кремового цвета. При выращивании культуры в указанных условиях на качалке рост отмечается в виде помутнения среды.

Физиолого-биохимические признаки, Аэроб. Температурный диапазон роста 1042 С, оптимальная температура 37 С. Оптимум рН для роста 5,5. Культура растет в присутствии 1 M сорбита. В среде с 10 ным NaCI рост слабый.

Чувствителен к циклогексимиду, антимицину П, нистатину, резистентен к ампицилину, тетрациклину.

Отношение к источникам углерода: хорошо утилизирует глюкозу, мальтозу, трегалоэу, рибоэу, эритрол, рибитол, маннит, глицерин, этанол, метанол, плохо утилизирует ксилоэу, сахарозу, рамнозу, лимонную кислоту, янтарную кислоту, не утилизирует галактозу, лактоэу, раффиноэу, L-арабинозу, крахмал.

В качестве источников азота хорошо усваиват соли аммония и нитраты, Рост штамма в синтетических средах абсолютно зависит от наличия биотина, тиамин частично стимулирует рост.

При росте в .среде с глюкозой штамм характеризуется отсутствием алкогольоксидаэной и формальдегидредуктаэной активностей.

10

15 вания штамма Hansenula polymorpha ВКПМ . N У вЂ” 705.

Пример 1, Штамм выращивают до

После выращивания в среде с метанолом клетки обладают активностью алкогольоксидазы, формал ьдегидредуктазная активность отсутствует.

П рототроф.

Клетки штамма не содержат плазмид, ГЦ пар составляет 487ь.

Штамм нетоксичен в опытах на белых мышах, Штамм хранится на скошенном суслоагаре при 4 С, пересевы следует производить через 3-4 мес.

Сущность изобретения поясняется следующим конкретным примером использосередины экспоненциальной фазы в среде следующего состава (иэ расчета на 1 л среды): метанол 4 мл, (NH4)ISO< 3 г. КН2РО4 1 г, MgS04 7Н20 0,5 г, СаС!р 0,1 г, дрожжевой экстракт 0,5 r. Культивирование ведут на качалке (200 об/мин) при 28 С в течение

24 ч. Затем клетки осаждают центрифугированием и переносят в свежую ростовую среду, содержащую клетки (10 мг сухого веса/мл), 0,1 М фосфатный буфер с рН 6,0 и метанол (10 по объему). После инкубации на качалке (200 об/мин) при 28 С в течение

24 ч клетки осаждают центрифугированием. Формальдегид идентифицируют по специфической реакции Нэша с ацетилацетоном. В указанных условиях штамм накапливает в среде 0,5 м формальдегида, На чертеже приведена калибровочная кривая. Концентрации фомальдегида в среде, где кривая 1 — спектр поглощения продукта реакции стандартного 2,1 мМ раствора формальдегида с ацетилацетатом, кривая 2 — то же, для формальдегида, полученного биотрансформацией 1,03 мМ метанола (культуральная жидкость, содержащая 0,618 М формальдегида, разбавлена в 600 раз).

Формула изобретения

Штамм дрожжей Hansenula polymorpha

ВКПМ М У-750 — биотрансформатор метанола в формальдегид.

1634709

° Э

Я з чшаоншоиц ЬПтэипшоу

Составитель Г.Голева

Редактор M,Íåäoëóæåíêî Техред М.Моргентал Корректор О.Кравцова

Заказ 733 Тираж 372 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101