Способ определения т-лимфоцитов в крови у птиц

 

Изобретение относится к ветеринарии , в частности к иммунологии птиц, и касается количественной оценки Т-системы иммунитета. Цель изобретения - упрощение способа количественного определения Т-лимфоцитов в крови у птиц и повышение его точности. Исследуемую суспензию лимфоцитов крови птиц инкубируют с эритроцитами барана в присутствии 0,4-0,6% глютарового альдегида в течение 18-20 ч при 4-6°С, после чего готовят мазки и подсчитывают количество лимфоцитов, образующих спонтанные розетки. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)з G 01 N 33 48

ГОСУДАРСТВЕ Н-1ЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4120370/13 (22) 18.06.86 (46) 15.03.91. Бюл. N 10 (71) Всесоюзный научно-исследоватегьский ветеринарный институт птицеводства и Ленинградский государственный институт усовершенствования врачей им. С.М, Кирова (72) А,С, Алиев, А.А, Сухинин, Л.Ф. Шабанова и М.Н. Барклай-де-Толли (53) 616-078,73(088.8) (56) Болотников И,А., Соловьев Ю.В. Гематология птиц. Л.: Наука, 1986, с 16-18. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ Т-ЛИМФОЦИТОВ В КРОВИ У ПТИЦ

Изобретение относится к ветеринарии, я частности к иммунологии птиц,и касается количественной оценки Т-системы иммунитета.

Цель изобретения — упрощение способа количественного определения T-лимфоцитов в крови птиц и повышения его точности.

Способ осуществляют следующим образом.

Лимфоциты из гепаринизированной (25 ед/мл) крови птиц выделяют центрифугированием в градиенте плотности фиколл-верографина (d = 1,082) при 1500 об/мин в течение 35 мин, Собранные иэ интерфазы лимфоциты трижды отмывают средой 199 в течение 5 мин при 1500 об/мин и доводят концентрацию лимфоцитов до 2 — 3 млн/мл.

Для определения Т-лимфоцитов птиц к

0,1 мл суспензии лимфоцитов добавляют равный объем трижды отмытых средой 199 эритроцитов барана в соотношении 1:10. Ж 1635135 А1 (57) Изобретение относится к ветеринарии, в частности к иммунологии птиц, и касается количественной оценки Т-системы иммунитета. Цель изобретения— упрощение способа количественного определения Т-лимфоцитов в крови у птиц и повышение его точности. Исследуемую суспенэию лимфоцитов крови птиц инкубируют с эритроцитами барана в присутствии

0,4-0,6 глютарового альдегида в течение

18-20 ч при 4-6 С, после чего готовят мазки и подсчитывают количество лимфоцитов, образующих спонтанные розетки. 2 табл.

Смесь иHкубируют при 37 С в течение

20 мин в термостате, а затем центрифугируют при 800 об/мин в течение 5 мин, добавляют 0,1 мл 0,6 -ного глютарового альдегида и инкубируют при 4 — 6 С в течение 20 ч. Затем смесь отмывают от глютарового альдегида дистиллированной водой, а из осадка готовят мазки, которые высушивают, фиксируют метиловым спиртом в течение 5 мин и окрашивают по Романовскому-Гимза в течение 35 мин. Подсчитывают 200 — 300 лимфоцитов и вводят процент роэеткообраэующих клеток (POK).

При всех опытах лимфоцитов птицы с эритроцитами барана инкубируют при 37 С в течение 20 мин. В дальнейшем инкубацию смеси проводят при 4-6 С при разных экспозициях. Оптимальным условием для выявления спонтанного роэеткообразования является инкубация комплекса лимфоцитэротроцит при 4 — 6 С в присутствии 0,5 ного глютарового альдегида в течение 20 ч.

1635135

Таблица 1

Таблица 2

Составитель С.Светлышев

Техред М.Моргентал Корректор

Редактор А.Ревин

Заказ 754 Тираж 413 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035. Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Наибольшее число POK (53,5 +0,2 ) выявляют при добавлении к смеси 0,1 мл глютарового альдегида в концентрации

0,6, наименьшее(46,2 + 0,2 ) — при 0,2 $ной концентрации препарата.

В табл. 1 приведены данные, характеризующие количество реэеткоовраэующих клеток птиц в процентах в зависимости от

° времени инкубации при 4-6 С.

Результаты определения числа спонтанных POK у птиц в зависимости от концентрации глютарового альдегида приведены в табл, 2, Формула изобретения

Способ определения Т-лимфоцитов в крови у птиц. включающий взятие крови, получение суспенэии лимфоцитов, поста5 новку реакции идентификации Т-лимфоцитов и ее оценку, о тл и ч а ю щ ий с ятем, что, с целью упрощения и повышения точности, реакцию идентификации осуществляют путем инкубации суспенэии лимфоцитов

10 с эритроцитами барана в присутствии

0,4 — 0,6 -ного глютарового альдегида в течение 18 — 20 ч при 4-6 С, а оценку проводят по розеткообраэованию.