Способ выявления вирулентности эшерихий
Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается выявления вирулентности эшерихий. Цель изобретения - повышение точности способа Выделенные штаммы патогенных эшерихий засевают секторами по 6-8 штаммов на одну чашку с мясопептонным агаром, инкубируют в термостате при 37 ± 0,2°С в течение 16-20 ч. На выросшие культуры вносят пипеткой 4-5 см раствора азурэозина по Романовскому , дополнительно разведенного V10 дистиллированной водой. Через 1-2 мин краску сливают и учитывают наличие темно-синего или черного окрашивания роста вирулентных штаммов. Способ дает совпадающие результаты со способами Н1у, CFA, ККП (соответственно гемолиз в среде с 5% эритроцитов, d-маннозорезистентная гемаглютмнзция, кератоконьюнктивальная проба). 1 табл
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (51)s С 12 0 1/04
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4693788/13 (22) 22.05.89 (46) 15,05,91, Бюл. М 18 (71) Республиканский научный гигиенический центр Минздрава УССР (72) Л.В.Григорьева и Л.А.Малахова (53) 576,8,093. 1 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР
М 1393849, кл . С 12 0 1/04, 1986. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИРУЛЕНТНОСТИ ЭШЕРИХИЙ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается выявления вирулентности эшерихий. Цель изобретения— повышение точности способа. Выделенные штаммы патогенных эшерихий засевают
Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается выявления вирулентности эшерихий.
Цель изобретения — повышение точности способа, Способ осуществляется следующим образом.
Выделенные штаммы патогенных эшерихий различных серогрупп засевают секторами по 6-8 штаммов нэ одну чашку с мясопептонным агэром (МПА), Для получения более четкого результата МПА осветляют путем фильтрации в горячем виде через ватно-марлевый фильтр, последующего отстаивания и декантирования.
Посевы в чашках-инкубируют в термостате при 37+. 0,2 С в течение 16 — 20 ч, т,е. до получения четкого роста по штриху. На выросшие культуры осторожно, не касаясь штриха посева и поверхности питательной среды, вносят пипеткой 4-5 см раствора
3 азурэозина по Романовскому, разведенного
„,!Ж„„1648978 Al секторами по 6-8 штаммов на одну чашку с мясопептонным агаром, инкубируют в термостате при 37 +. 0,2"С в течение 16-20 ч.
На выросшие культуры вносят пипеткой 4-5 см раствора азурэозина по Рома3 новскому, дополнительно разведенного
1:10 дистиллированной водой. Через 1-2 мин краску сливают и учитывают наличие темно-синего или черного скрашивания роста вирулентных LUTBMM08. Способ дает совпадающие результаты со способами Hiy, CFA, ККП (соответственно гемолиз в среде с 5 эритроцитов, d-маннозорезистентная гемаглютинация, кератоконьюнктивальная проба). 1 табл.
1:10 дистиллированной водой. Через 1-2 мин краску сливают и при наличии темносинего (или черного) окрашивания колоний культуру относят к вирулентной.
Колонии и штриховой рост невирулентных штаммов патогенных эшерихий остаются бесцветными или окрашенными лишь по краям в светло-зеленоватый или голубова- + тый оттенок.
Для учета степени выраженности виру- "О лентности используют следующую систему:
4+ — черное окрэшивание (резко выра- Q) женная реакция);
3+ — темно-синее окрашивание (выраженная реакция);.
2+ — синее окрашивание (положительная реакция);
1+ — зеленовато-голубоватое окрашивание всего штриха или колонии (слабо выраженная реакция;
" — слабое окрашивание по краю штриха или колонии (сомнительная реакция);
1648978
Составитель А, Завадская
Ю
Редактор Л. Веселовская Техред М,Маргентал Корректор О. Кравцова
Заказ 1499 Тираж 370 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035. Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101
"—" отсутствие окрашивания роста (отрицательная реакция), Вирулентными штаммами считают лишь те, которые дают реакцию не менее
98M HB 2 плюса. 5
Данным способом изучена вирулентность 167 штаммов патогенных эшерихий, выделенных из различных источников. Положительйый результат выявлен в
26,9 -3,2 (культур. 10
В таблице приведены сравнительные данные по выявлению вирулентности эшерихий предлагаемым способом и тремя другими: Hly, CFA u ККП. 15
Как видно из приведенных данных, предлагаемый способ дал совпадающие рефльтаты со статистически несущественными различиями (t = 0,8-1,8), 20
Совпадающие результаты предлагаемого метода с тремя другими достигают
46,77;, а при сравнении с шестью другими способами (культур клеток и др) — до 77,78 .
У 60 штаммов совпадение положительных результатов наблюдают по 3 — 4 способам, а в 18 — no 5-6. У остальных 22 было совпадение по 2 способам или вообще не выявлено такового.
Преимущества предлагаемого способа заключаются в его экспрессности (3-5 мин), простоте, экономичности, четкости результатов, высокой чувствительности, воспроизводимости на простой питательной среде (МПА), доступной для любой бактериологической лаборатории.
Формула изобретения
Способ. определения вирулентности эшерихий, включающий выращивание чистой культуры на плотной питательной среде, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, на выросшую культуру наносят стандартный раствор азурзозина по Романовскому в разведении
1:10 дистиллированной водой на 1-2 мин, затем краску удаляют и при наличии черного или темно-синего окрашивания колоний культуру относят к вирулентной.
