Способ идентификации генотипов африканского проса

 

Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству, а именно к селекции и семеноводству, биохимической генетике , и может быть использовано научными учреждениями при создании, изучении и паспортизации сортообразцов и гибридов африканского проса. Целью изобретения является повышение точности и информативности исследования. Способ состоит в том. что спирторастворимые белки извлекают изопропанолом при нагревании с последующим восстановлением дисульфидных связей, и идентификацию проводят по белковым формулам, располагая компоненты спектра относительно реперного компонента Bsu. 1 табл.

союз советских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5!)5 А 01 Н 1/00, 1/04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4762354/13 (22) 27.11.89 (46) 30.10,91. Бюл. N 40 (71) Казахский научно-исследовательский институт земледелия им, В.P.Âèëüÿìñà (72) Ю.В.Перуанский и И.М.Савич (53) 631.054.23,11 (088.8) (56) Kokarev Ч, Y. et а!. Biochemlcat

identification of varieties. -materials III

Intern. Sump. 1988. (54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ГЕНОТИПОВ АФРИКАНСКОГО ПРОСА (57) Изобретение относится к биотехноло. гии и сельскому хозяйству, а именно к селекИзобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству, а именно к селекции и семеноводству биохимической генетики, и может быть использовано научными учреждениями при создании, изучении и паспортизации сортообразцов и гибридов африканского проса.

Цель изобретения — повышение точности и.информативности исследования.

Способ состоит в том, что спирторастворимый белок семян-пенисетин извлекается изопропиловым спиртом при нагревании и разделяется электрофорезом в пластинчаТоМ полиакриламидном геле с последующим проявлением пенисетиновых компонентов трихлоруксусной кислотой и окрашиванием кумасси R - 250, определением мобильности каждого компонента, составлением белковых (пенисетиновых) формул линий и сортообразцов африканского npoca.... SU 1687138 А1 ции и семеноводству, биохимической генетике, и может быть использовано научными учреждениями при создании, изучении и паспортизации сортообразцов и гибридов африканского проса. Целью изобретения является повышение точности.и информативности исследования. Способ состоит в том. что спирторастворимые белки извлекают изопропанолом при нагревании с последующим восстановлением дисульфидных связей. и идентификацию проводят по белковым формулам, располагая компоненты спектра относительно реперного компонента ВБо. 1 табл.

Способ иллюстрируется следующими. примерами.

Пример 1. Зерна африканского проса размалывают до тонкого порошка, отвешивают 200 мг муки и заливают 600 мкл 65 изопропанола, перемешивают и помещают, в водяную баню на I ч при 60 С. После центрифугирования при 7000 g в течение 15 мин надосадочную жидкость собирают и упаривают досуха под феном. Полученный осадок растворяют в 100 мкл раствора, содержащего 8 M мочевины, 10 сахарозы, 57; 2-меркаптоэтанола и О,бф, уксусной кислоты и. оставляют на 0,5 ч при комнатной температуре, Затем раствор белка нагревают на кипящей водяной бане в течение 5 мин и наносят в 1-сантиметровый "карман" геля 40 — 50 мкл.

Электрофорез проводят в пластинках полиакриламидного геля (ПААГ) размером

110х110х1 мм, содержащего 107ь акриламида, 8 M мочевины в качестве катализирую1687138 щей системы используют аскорбиновую кислоту, сернокислое закисное железо, ТЕМЕД и персульфат аммония. Электрофорез ведут 30 мин при постоянном напряжении

250 В, а затем еще 4,5ч при напряжении 400 5

В, После окончания электрофореза гели фиксируют в течение 1 ч в 12,5 раствора трихлоруксусной кислоты, затем окрашивают в течение 2 — 3 ч при покачивании в

0,001 g,-ном растворе кумасси R-250, приго- 10 товленном на 12,57-ном растворе трихлоруксусной кислоты. Затем гели заливают дистиллированной водой и замеряют относительнуюю электрофоретическую подвижность(ОЭП) всех окрашенных белковых зон. 15

За реперный принимают характерный, встречающийся во всех образцах мощный компонент в средней части геля, ОЭП которого условно принимают эа 50, ОЭП остальных измеряют на специальном устройстве. 20 приняв за точку отсчета верхнюю границу геля. Компоненты группируют по подвижности: А — субфракция от 0 до 35; В— субфракция от 36 до 59 и С-субфракция от

60 до 100 и составляют пенисетиновые фор- 25 мулы для каждого генотипа {см.таблицу 1).

Il р и м е р 2. Зерна африканского проса размалывают до тонкого порошка. Отвешивают 2ОО мг муки и заливают 600 мкл 60 30 изопропанола, перемешивают и помещают в водяную баню на 1 ч 15 мин при 60 С.

Остальную процедуру осуществляют по примеру 1, Пример 3. Зерна африканского проса размалывают до тонкого порошка. Отвешивают 200 мг муки и заливают 600 мкл 707ь изопропанола, перемешивают и помешают в водяную баню на 45 мин при 60 С, Осталь-, ную процедуру осуществляют по примеру 1, Пенисетиновая формула характеризует каждый сортообразец африканского проса, на ее основе цифровые и буквенные (паспортные) данные можно хранить в памяти

ЭВМ.

Предлагаемый способ биохимической идентификации генотипов африканского проса отличается объективностью, надежностью, экспрессностью при распознава; ни и сорта образцов, возможностью хранения информации в памяти ЭВМ..

Формула изобретения

Способ идентификации генотипов африканского проса, включающий экстракцию спирторастворимых белков из семян,.их электрофоретическое разделение с получением белковых спектров и идентификацию генотипов путем анализа компонентного состава полученных спектров, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности и информативности исследования, экстракцию проводят изопропанолом при нагревании с последующим восстановлением дисульфидных связей и при анализе компонентного состава определяют относительную электрофоретическую подвижность каждого компонента, принимая за реперный компонент Bso.

16аТ13В

Обратен

Стбйрвеция

92

50

25 32

25 32 34

25 32 34

43

45 50

45 50

68 - 78

57

43

63 65 68 - 78

63 - 65 68 — 78.

К-146

19

19 25 32

92

92

92

K-39

43

25 32

25 32

50

57

19

19 25 32

43

43

92 100

97.

59

50!

K-513

K-2

43

65 68 - 78 92 100

65 68 - 78 92 100

45 50

19

50 53

К 10

43

K-105е

К-537

Остнстое 1 с2

92

65 68

57

43

65 68 — 78

50

19

68 - 78 — г-- ——

59 63

Составитель В. Демкин

Редактор М. Недолуженко Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор С.Черни

Заказ 3654 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул,Гагарина, 101

K-51 2

Остистое 11

К 125

К-215

K-123

25 32

25 32

32

25 32 34

25 32

25 32

25 32 34

25 32

65 68 - 78

65 68 72 78

65 68 72 78

68 - 78

65 - - 78

68 — 78