Способ подготовки бактериальных клеток при постановке серологических реакций

 

Изобретение относится к микробиологии , в частности к серологической идентификации бактериальных культур. Целью изобретения является устранение неспецифической агглютинации. Поставленная цель достигается тем, что бактериальные клетки перед постановкой реакции обрабатывают химопсином. Эта обработка способствует повышению специфичности серологических реакций за счет устранения спонтанной и перекрестной агглютинации. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)з G 01 N 33/556

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 пт: ь .. Е г..,.

:"::::.1....Г,.ь. )

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4480654/13 (22) 07.09.88 (46) 23.11.91. Бюл, М 43 . (71) Ленинградский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток (72) А.П.Ходырев, М.Ф.Калакина, И.А.Васильева, В.В.Лебедева, М.M.Íåìèðîâè÷Данченко и Н.M.Øèøêoâà (53) 576.8.097.34(088.8) (56) Lemolne.A., Landreaud M., Езтечепоп

А.M. Groupage des streptocoques.—

Microbia, 1976, 2, М 1, suppl.

Изобретение относится к микробиологии, в частности к серологической идентификации бактериальных культур.

Целью изобретения является устранение неспецифической агглютинации. . П р и м. е р 1. Культуру стрептококка засевают в бульон Коникова рН 7,6 и инкубируют и ри 37 С в течение 24 ч. После этого культуру центрифугируют, отделяют микробную массу и разводят ее физраствором до концентрации 30 млрд кл/мл. В полученную взвесь добавляют 1 -ный раствор химопсина из расчета 0,15 мл этого раствора на 1 мл взвеси. Обработанную и контрольную взвеси инкубируют при 37 С в течение 1 ч при периодическом встряхивании. Взвеси конт. ролируют на наличие спонтанной агглютинации визуально по 4-крестовой системе. В контрольной взвеси наблюдается резко вы„„5iJ(, 1693553 А1 (54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КЛЕТОК ПРИ ПОСТАНОВКЕ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ (57) Изобретение относится к микробиологии, в частности к серологической идентификации бактериальных культур. Целью изобретения является устранение неспецифической агглютинации. Поставленная цель достигается тем, что бактериальные клетки перед постановкой реакции обрабатывают химопсином. Эта обработка способствует повышению специфичности серологических реакций эа счет устранения спонтанной и перекрестной агглютинации. 1 табл. раженная спонтанная агглютинация (4+), обработанная взвесь гомогенна, спонтан- 0 ная агглютинация не наблюдается. 0

Идентификацию группы стрептококка в (Д обработанной пробе проводят в реакции ко- (у} агглютинации с коагглютинационными пре- у паратами серогрупп стрептококка А, В, С.

Реакция коагглютинации с препаратом серогруппы А резко положительная (4»), а е );» препаратами серогрупп В и С отрицатель- д ная(-); Следовательно,стрептококкотносится к серогруппе А.

Пример 2. Культуру стрептококка выращивают как в примере 1, а затем разводят физраствором до концентрации 40 млрд кл./мл. Одну часть культуральной взвеси обрабатывают химопсином (0,2 мл

1 -ного раствора химопсина на 1 мл взвеси), а другую оставляют в качестве контроля.

1693553

Фермент

Химопсин

Трипсин

Химотрипсин

Панкреатин

Панкреатиновый экстракт

Комплеск протеоли ческих ферментов сд д

Взвеси инкубируют в течение 1 ч при 37 С и контролируют как в примере 1.

При этом опытный образец дает положительную реакцию коагглютинации с препаратом группы С (4+) и отрицательные реакции (-) с препаратами серогрупп А и В, тогда как.контрольный образец дает положительные реакции с препаратами серогруппы С (4+) и А (3+) при отрицательной реакции с препаратом серогруппы В (-). Следовательно, выделенный стрептококк относится к серогруппе С, что удается установить только в результате обработки микробных клеток химопсином, устранившим перекрестную реакцию с препаратом серогруппы А.

Пример 3. Культуру стрептококка подращивают и обрабатывают как в примере 1. При визуальном контроле отмечают отсутствие спонтанной агглютинации в опытном и контрольном образцах. Поэтому в них определяют групповую принадлежность.

В.данном примере образец, обработанный химопсином, дает резко положительную реакцию коагглютинации с препаратом группы B при отрицательных реакциях с препаратами серогрупп А и С. Контрольный образец резко положительно (4+) реагирует с препаратом серогруппы В и слабоположительно (2+) с препаратом серогруппы С при отрицательной реакции с препаратом серогруппы А.

В таблице представлен сравнительный анализ результатов использования различных ферментов (трипсин, химотрипсин, панкреатин), применяемых для повышения специфичности серологических реакций по сравнению с химопсином.

Пример 4. Культуру менингококка

Neisseria menlngitidis В-202, засевают в сывороточный бульон рН 7,6 и инкубируют при

37 С в течение 18 ч. После этого культуру центрифугируют, отделяют микробную массу и разводят ее физраствором до концент5 рации 10 млрд кл./мл. В полученную взвесь добавляют 10 -ный раствор химопсина из расчета 0,15 мл этого раствора на 1 мл взвеси. Обработанную и контрольную взвеси инкубируют при 37 С в течение 1 ч при

10 периодическом встряхивании, Взвеси контролируют на наличие спонтанной агглютинации по 4-крестовой системе. В контрольной взвеси наблюдается резко выраженная спонтанная агглютинация (4+).

15 Обработанная взвесь гомогенна, спонтанная агглютинация не наблюдается.

Далее проводят идентификацию менингококка в обработанной химопсином пробе в реакции агглютинации на стекле с груп20 поспецифическими сыворотками А, В, С, О, Х, Y. Положительная реакция {4+) наступает с сывороткой серогруппы В, с другими сыворотками реакция отрицательная {-). В реакции агглютинации с необработанной

25 культурой наблюдается спонтанная агглютинвция.

Таким образом, обработка химопсином бактериальных клеток устраняет неспецифическую агглютинацию (спонтанную и пе30 рекрестную) в серологических реакциях.

Формула изобретения

Способ подготовки бактериальных кле35 ток при постановке серологических реакций, включающий инкубирование бактериальных клеток с раствором фермента и последующее их отделение, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью устранения

40 неспецифической агглютинации, в качестве фермента используют химопсин.