Патент ссср 173897
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Советских
Социалистицеских
Республик
Зависимое от авт. свидетельства №
Заявлено 20.V.1964 (№ 901174131-16) с присоединением заявки №
Приоритет
Опубликовано 06.VIII.1965. Бюллетень ¹ 16
Дата опубликования описания 29.IX.19б5
Кл. 304, 14
ГосудаРственный комитет ло делам изобретений
ы открытий СССР
МПК А 61k
УД К 61: 543,865: 542.63 (088.8) Автор изобретения
Заявитель
С. С. Василейский
Научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии
Министерства здравоохранения СССР
СПОСОБ ИММУНОДИФФУЗИОННОГО АНАЛИЗА БЕЛКОВЪ|Х
СМЕСЕЙ
Предмет изобретения
Лоонаская группа Лгв 189
Известны способы иммунодиффузио нного анализа белковых смесей путем встречной диффузии в агаровом геле исследуемых белков и антисыворотки к ним. Однако они не применимы к биологическим объектам диа- 5 метром менее 150 микрон.
По предлагаемому способу антисыворотку вводят в клиновидный кусок агарового геля, который придвигают на нужное расстояние к исследуемому объекту. с помощью микро- 10 манипулятора под контролем микроскопа.
Тем самым создаются условия для осуществления анализа микроскопических объектов, например одиночных клеток.
Пример. Кусочек 2%-ного агарового геля размером 150 X 150 микрон, отрезанный с помощью микроманипулятора от пленки толщиной 0,1 мм и пропитанный сывороткой крови человека, помещают на сухое предмет- 20 ное стекло и быстро накрывают пластинкой агарового геля толщиной 0,6 — 0,8 лм, смазанной расплавленным агаром при 40 — 42 С.
Затем агаровую пластинку отслаивают от стекла, переворачивают,и помещают в поле 25 зрения микроскопа. Из смеси 3%-ного агара с антисывороткой (1: 2) готовят клиновидный кусочек, который накладывают на поверхность основной агаровой пластинки сбоку от контрольного объекта и при постоянном íà- 30 блюдении в микроскоп пододвигают к нему с помощью микроманипулятора. Расстояние между контрольным объектом и клиновидным кусочком агара с антисывороткой контролируется окулярным микрометром. Оптимальное расстояние составляет 200 микрон. После
15-часовой экспозиции во влажной камере, во время которой происходит встречная диффузия и образование иммунопреципитатов, производят отмывку и окраску амидо-черным, При микроскопии обнаруживается несколько преципитатов в форме характерных арок.
Предлагаемый способ может быть применен для анализа одиночных микроскопических оиологических объектов (яйцеклеток и т. п.).
Способ иммунодиффузиопного анализа белковых смесей путем встречной диффузии в агаровом геле исследуемых белков и антисыворотки к ним, отлича ои1иися тем, что, с целью осуществления анализа микроскопических объектов, например одиночных клеток, HHTHcbIB0p0TK) ВВодят в клиноВидный кусок агарового геля, который придвигают к исследуемому объекту с помощью микроманипулятора на нужное расстояние под контролем микроскопа.
