Способ выявления зараженности клещей патогенными микроорганизмами

Авторы патента:

C12Q1 - Способы измерения или испытания, использующие ферменты или микроорганизмы (устройства для измерения или испытания при работе с ферментами или микроорганизмами, например счетчики колоний C12M 1/34); составы для них; способы получения подобных составов

Изобретение относится к паразитологии и может быть использовано для оценки зараженности клещей возбудителями болезней человека и животных. Целью изобретения является повышение чувствительности и достоверности способа. На предметное стекло наносят тонкий слой агара и вырезают три лунки. В левую лунку помещают каплю испытуемой гемолимфы, а в среднюю и правую лунки - по капле гемолимфы с гемоцитами из конечности заведомо не зараженного клеща лабораторной линии. Лунки накрывают покровным стеклом и оставляют на ночь при температуре 30°С, Микроскопически определяют миграцию гемоцитов из средней лунки При этом подсчитывают количество гемоцитов, мигрировавших и осевших на правой и левой стороне средней лунки. Значение индекса миграции рассчитывают по формуле В том случае, когда число гемоцитов, осевших на опытной (левой) стороне лунки вдвое или более превышает число гемоцитов. осевших на контрольной (правой) стороне, результат реакции рассматривают как достоверно положительный . При этом значение индекса миграц м больше или равно 33. Заявленный способ ю чувствитетын ости значительно превышает известный гемоцит-тест. 1 табл., 1 ил

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛ ИСТИФЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 С 12 0 1/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

@Ед )®ф

HkPч":ц

В (21) 4669908/13 (22) 30.03.89 (46) 30.12.91. Бюл. ЬЬ 48 (71) Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.

Н.Ф. Гамалеи (72) В. Н. Крючечников (53) 578.08(088.8) (56) Сб. Методы изучения природных очагов болезней человека. M.: 1964, 308 с, Acta virol, 15, 1971, с. 237 вЂ” 240, (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ЗАРАЖЕННОСТИ КЛЕЩЕЙ ПАТОГЕННЫМИ МИКРООРГАНИЗМАМИ (57) Изобретение относится к паразитологии и может быть использовано для оценки зараженности клещей возбудителями болезней человека и животных. Целью изобретения является повышение чувствительности и достоверности способа. На предметное стекло наносят тонкий слой агара и вырезают три лунки. В левую лунку помещают

Изобретение относится к общей и прикладной паразитологии и может быть использовано для оценки зараженности клещей возбудителями болезней человека и животных.

Известны способы определения зараженности клещей путем иньекции суспензий иэ растертых клещей или отдельных их тканей лабораторным животным с последующим определением антител «искомому возбудителю у этих животных с помощью различных серологических реакций; известны также способы инфицирования чувстви-. тельных к данному возбудителю культур

„, Ж„„1761748 А1 каплю испытуемой гемолимфы, а в среднюю и правую лунки вЂ” по капле гемолимфы с гемоцитами из конечности заведомо не зараженного клеща лабораторной линии. Лунки накрывают покровным стеклом и оставляют на ночь при температуре 30 С, Микроскопически определяют миграцию гемоцитов из средней лунки, При этом подсчитывают количество гемоцитов, мигрировавших и осевших на правой и левой стороне средней лунки. Значение индекса миграции рассчитывают по формуле. В том случае, когда число гемоцитов, осевших на опытной (левой) стороне лунки вдвое или более превышает число гемоцитов. осевших на контрольной (правой) стороне, результат реакции рассматривают как достоверно положительный. При этом значение индекса миграц:1и больше или равно ЗЗ. Заявленный способ по чувствительности значительно превышает известный гемоцит-тест, 1 табл., 1 ил, тканей суспензиями клсщей с последующим тестированием возбудителей в этих культурах.

Однако эти способь; выявления зараженности носят косвенный характер, т.е, не позволяют выявить возбудитель непосредственно в обьекте исследования, т,е. в клеще, требуют значительного расхода времени и средств на разведение лабораторных животных, подготовку культур тканей, получение имл .унных сывороток и постановку реакций. Кроме того, ввиду значительного количества промежуточных этапов индикации существенно возрастает

1701748 риск контаминации промежуточных обьекТоВ (животных, тканевых культур) и вследствие этого ошибки в индикации зара>кенности, ведущие к снижению достоверности результатов, неминуемы.

Наиболее близким по техническому решению и достигаемому положительному эффекту к изобретению относится гемоциттест, т.е. способ выявления зараженности клещей, включающий взятие гемолимфы из конечности клеща, приготовление из нее мазка с последующей фиксацией, окраской и просмотром полученного материала на наличие возбудителей путем микроскопии.

Однако данный способ имеет следующие недостатки; во-первых, воэможность выявления ограничена только теми возбудителями, которых можно визуально обнаружить в гемолимфе клещей, и, во-вторых, эта воэможность лимитируется также сравнительно низкой чувствительностью способа, так как микроскопия позволяет обнаружить лишь сравнительно высокие концентрации возбудителей, Кроме того, симбиотические микроорганизмы, в норме присутствующие в гемоцитах некоторых видов клещей и морфологически неотличимые от патогенных, делают иногда применение этого способа принципиально невозможным.

Целью изобретения является повышение чувствительности и достоверности способа за счет отсутствия необходимости визуального обнаружения возбудителя и использования каких-либо фиксаторов и красителей.

Это достигается исследованием содержащей гемоциты гемолимфы клещей íà покрытых агаровым слоем предметных стеклах с лунками, причем по различиям в способности гемоцитов к миграции в пределах лунки выявляется факт зараженности.

Способ иллюстрируется чертежом .

Предметное стекло, применяемое для предлагаемого теста, покрывают слоем в

0,5 мм 27 > агэоа с тремя квадратными лунками со стороной в 4 мм и расстоянием между ними в 1 мм, после чего в левую лунку (А) помещают каплю испытуемой гемолимфы непосредственно из конечности предположительно зараженного клеща, а в среднюю (В) и правую (C) лунки вЂ” по капле гемолимфы с гемоцлтами из конечности заведомо не зараженного клеща лабораторной линии, Лунки накрывают покровным стеклом (24 х 24 мм) и оставляют подготовленный таким образом препарат в чашке

Петри с увлажненной фильтровальной бумагой на ночь (14 вЂ” 16 ч) при температуре

300С.

45 Данные по определению зараженности сведены в таблицу. Сравнение результатов определения зараженности клещей по предлагаемому способу и известному гемсцит-тесту представлено в пооцентах от чис10

Затем среднюю лунку (B) препарата просматривают под обычным световым микроскопом и подсчитывают количество гемоцитов, мигрировавших и.осевших на левой (а-а) и на правой (с-с) стороне средней (В) лунки. Результат реакции учитывают по формуле: кг1 вЂ” кг х 00, где ИМ вЂ” индекс миграции;

КГ1 вЂ” количество гемоцитов, мигрировавших к левой стороне средней (В) лунки;

Кгг вЂ” количество гемоцитов, мигрировавших к правой стороне средней (В) лунки.

В том случае, когда число гемоцитов, осевших на опытной (левой, à-a) стороне лунки вдвое или более превышает число гемоцитов, осевших на контрольной (правой, с-с) стороне, результат реакции рассматривают как достоверно положительный (при этом ИМ 33).

Пример. Партию из 150 взрослых клещей вида Ornithodoros papillipes из лабораторной культуры, многократно исследованной на отсутствие возбудителей, разделили на 3 равных группы по 50особей.

Первая группа кормилась на морской свинке, зараженной патогенными риккетсиями (Rickettsia siblrica, штамм "Нецветаев") в период риккетсиемии, вторая вЂ” на морской свинке, зараженной патогенными спирохетами (Borrelia perslca, штамм "14"), а третьявЂ” на заведомо свободной от возбудителей, здоровой морской свинке (контроль). Через

10 дней всех клещей исследовали на зараженность следующим образом. Клещей из каждой партии проверяли индивидуально: известным способом гемоцит-теста; гредлагаемым способом. При этом в качестве тест-объекта использовали добавляемые в среднюю лунку (В) гемоциты свободной от инфекции лабораторной линии клещей

Alveonasus lahorensls. ла исследованных клещей; в скобках дано абсолютное количество выявленных зараженных клещей (в числителе дроби) от числа исследованных (в знаменателе). Кэк следует из таблицы, выявление зараженности клещей с помощью предлагаемого способа по чувствительности соответствует (s примере с риккетсиями) или сущсственно превышает(в примере со спирохетэми) известный гемоцит-тест.

1701748

Составитель В,Крючечников

Редактор Ji.Hàðoäíàÿ Техред М.Моргентал Корректор M.Øàðoøä

Заказ 4513 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35. Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Использование предлагаемого способа выявления зараженности клещей патоген- . ными микроорганизмами обеспечивает возможность выявления зараженности клещей разными видами возбудителей болезней 5 без использования дорогостоящих экспериментальных животных, дефицитного оборудования и реагентов; чувствительность реакции, равную или значительно превышающую известные способы выявления зара- 10 женности клещей, особенно в отношении тех возбудителей, которые не всегда можно обнаружить путем микроскопического исследования; быстрое, в сравнении с биопробными методами, получение реэуль- 15 татов реакции; возможность выявления зараженности клещей малоизвестными или новыми для науки патогенными микроорганизмами, в которых отсутствуют соответствующие тест-системы. 20

Формула изобретения

Способ выявления зараженности клещей патогенными микроорганизмами, включающий взятие гемолимфы исследуемого клеща, приготовление из нее препарата для микроскопии с последующей микроскопией гемоцитов и оценкой результатов, отличающийся тем,что,сцелью повышения чувствительности и достоверности способа, препарат готовят в агаровой камере с тремя лунками, при этом исследуемую гемолимфу помещают в левую лунку, в среднюю и правую вЂ” гемолимфу незараженных клещей лаборатооной линии, далее препарат инкубируют при ЗOОС в. течение

14 вЂ” 16 ч, микроскопически определяют миграцию гемоцитов из средней лунки, рассчитывают индекс миграции и при значении индекса больше ЗЗ выявляют зараженность клещей,

Способ управления периодическим процессом культивирования микроорганизмов // 1698294

Изобретение относится к биотехнологии , а именно к способам управления про-1 цессами культивирования микроорганизмов , и может быть использовано в производстве микробного белка, аминокислот, ферментов м других продуктов микробиологического синтеза

Способ дифференциации среднеазиатской расы туляремийного микроба // 1693063

Изобретение относится к микробиологии , а именно к дифференциации географических рас туляремийного микроба

Питательная среда для выявления тиолзависимых гемолизинов энтеробактерий // 1693062

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в практике бактериологических лабораторий для выявления штаммов энтеробактерий, способных продуцировать важный фактор патогенности - тиолзависимые гемолизины

Способ внутривидовой идентификации менингококков // 1693061

Изобретение относится к микробиологии , в частности к выделению, идентификации микроорганизмов Цель изобретения - повышение точности способа внутривидовой идентификации менингококков

Питательная среда для выявления sтарнylососсus aureus // 1693060

Изобретение относится к области медицины , в частности к микробиологии, и касается выявления Staphylococcus aureus

Способ определения чувствительности возбудителей мастита коров к антибиотикам // 1693059

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано при определении чувствительности основных возбудителей мастита коров к антибиотикам

Способ определения днказной активности микроорганизмов // 1693058

Изобретение относится к медицинской микробиологии и предназначено для ускоренного определения ДНКазной активности микроорганизмов

Способ дифференциации биоваров холерного вибриона // 1693039

Изобретение относится к микробиологии , в частности к дифференциации холерных вибрионов

Способ определения концентрации n-трибутилстаннил-4-хлор- фталимида в водной среде // 1689847

Изобретение относится к аналитической химии воды и охране окружающей среды и может быть использовано при определении низких концентраций бутильных производных триалкилолова в объектах окружающей среды

Способ неинвазивной диагностики хеликобактериоза ин виво // 2100010

Изобретение относится к области медицинских технологий: неинвазивной атравматичной диагностике гастродуоденальных заболеваний, вызываемых бактериями Helicobacter pylori, далее по тексту хеликобактер

Способ определения газообразующей способности хлебопекарных дрожжей // 2100432

Способ отбора иммуногенных штаммов и субкультур живых сибиреязвенных вакцин // 2101355

Изобретение относится к медицинской микробиологии и иммунологии, в частности, к разработке, производству и контролю качества живых сибиреязвенных вакцин

Способ индикации бактериальных антигенов // 2101356

Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для экспрессной индикации бактериальных средств при возникновении чрезвычайных ситуаций

Питательная среда для выделения и культивирования коклюшного микроба // 2101357

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике коклюша

Способ моделирования лепрозной инфекции // 2102482

Изобретение относится к медицине, а именно к лепрологии, и может быть, в частности, использовано для моделирования лепрозной инфекции на лабораторных животных

Комбинированная питательная среда для дифференциации mycobacterium tuberculosis и mycobacterium bovis // 2102483

Способ восстановления вирулентности штаммов сибиреязвенного микроба // 2102484

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности, к способам повышения вирулентности сибиреязвенного микроба

Способ индикации бактериальных антигенов // 2102761

Изобретение относится к области иммунологии и может быть использовано для экспрессной индикации бактериальных средств при возникновении очага бактериального заражения

Способ индикации бактериальных антигенов // 2102762