Матрица для обнаружения пестицидов, обладающих антиэстеразным действием
Изобретение относится к области аналитической химии, касается разработки простейших средств обнаружения пестицидов и может быть использовано для производства индивидуальных средств контроля за содержанием пестицидов в воде, пищевых продуктах, воздухе и пробах почвы. Целью изобретения является упрощение проведения анализа. Матрица индикаторного устройства выполнена на одной бумажной подложке, на которую нанесены все компоненты биохимической рецептуры: фермент, фосфатный буфер, субстрат и индикатор . При этом в качестве субстрата берут а-тмонафтмл ацетат, в качестве индикатора - дихлорфениликдофеколят натрия , в качестве фермента - ацетилхолпнэстеразу эритроцитов или зст-jpasy t. Чувствительность анализа до 1 мг/л. 1 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (sl)s С 12 Q 1/46
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
/ (21) 4719987/13 (22) 24.04.89 (46) 30.12.91. Бюл. М 48 (71) Государственный союзный научно-исследовательский химико-аналитический институт (72) В. А. Апухтин, И. Л. Беззубов, Ю.А,Мазин, M. П. Николаева, В. А. Самокиш, и
В.Я.Стацевич (53) 677.15.08(088.8) (56) Патент Румынии М 82028, кл. 6 01 N
31/22, 1983.
РСТ/SE М 85/00158, кл. С 12 Q 1/46, 1985, (54) МАТРИЦА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ПЕСТИЦИДОВ, ОБЛАДАЮЩИХ АНТИЭСТЕРАЗНЫМ ДЕЙСТВИЕМ (57) Изобретение относится к области аналитической химии, касается разработки
Изобретение относится к области аналитической химии, касается разработки простейших средств обнаружения пестицидов и может быть использовано для производства индивидуальных средств контроля за содержанием пестицидов в воде, пищевых продуктах, воздухе и пробах почвы.
Известно индикаторное устройство, включающее подложку с буфером, ферментом, индикатором крахмалом и глицерином.
Субстрат наносится в процессе анализа.
Недостатком является необходимость в проведении нескольких операций.
Наиболее близким по своей технической сущности к предлагаемому обьекту и взятым в качестве прототипа является инди-,. каторное средство для обнаружения.пестицидов.
„„. Ж„„1701749 А1 простейших средств обнаружения пестицидов и может быть использовано для производства индивидуальных средств контроля за содержанием пестицидов в воде, пищеBbIx продуктах, воздухе и пробах почвы.
Целью изобретения является упрощение проведения анализа, Матрица индикаторного устройства выполнена на одной бумажной подложке, на которую нанесены все
KoMflohåHòû биохимической рецептуры: фермент, фосфатный буфер, субстрат и индикатор. При этом в качестве субстрата берут а-тионафтилацетат, в качестве индикатора — дихлорфенилиндофенолят натрия, в качестве фермента — ацетилхолинзстеразу эритроцитов или зст.-разу
Чувствительность анализа до 1 мг/л, 1 табл.
Конструктивно инди .аторное средство выполнено в виде двух бумажных подло)кек, на одной из которых нанесены фермент и фосфатный буфер, а на другой подложке нанесен субстрат. Для удобства эксплуатации обе подложки соединены между собой, в частности выполненьl на одном носи еле.
В качестве фермента используется холинзстераза камбалы, иммобилизоьанная с помощью стабилизаторов: csxBp03bl и низкомолекулярногодекстрика Т10. В качестве субстрата служит 2,6-дихлориндофенилацетат. Бумагой служит хроматографическая бумага из целлюлозы типа Whatman ОЕ 81.
Процесс обнаружения пестицидов заключается в смачивании анализируемой водой ферментной подложки, инкубации ее в течение нормированног..з времени и после1701749 дующим контактировании субстратной подложки на ферментную путем подгиба обеих подложек.
Недостатком описанного средства является относительная сложность в проведении анализа, вызванная наличием нескольких операций, регламентированных во. времени, а именно необходимость использования специальной емкости с водой, (например, шприц-тюбик) для смачивания ферментной бумажной подложки, инкуба цию ее в течение нормированного времени ,и контактирования ее с субстратной бумажной подложкой путем их подгиба. Все это вызывает определенные неудобства в эксплуатации, требует точности проведения операций и определенного навыка.
Целью изобретения является упрощение проведения анализа.
Матрица (индикаторное средство) выполнена на одной бумажной подложке, на которую нанесены все компоненты биохимической рецептуры: фермент, фосфатный буфер, субстрат и индикатор. При этом в качестве субстрата берут а-тионафтилацетат, в качестве индикатора-дихлорфенилиндофенолят натрия, в качестве фермента— ацетилхолинэстераза эритроцитов крови человека или микробную зстеразу 1.
Пример 1, Процесс изготовления индикаторного средства.
Бумажную матрицу (подложку) пропитывают буферно-индикаторным раствором фермента, а именно сначала готовят раствор индикатора в буфере. Затем полученным раствором разбавляют сухую навеску фермента. Полученным раствором пропитывают бумажную подложку, после чего ее сушат на воздухе. Затем этот билет пропитывают бензольным раствором субстрата и повторно сушат на воздухе. Подложкой служит хроматографическая бумага.
По описанной технологии были изготовлены экспериментальные образцы индикаторных средств с содержанием ингредиентов, приведенных в таблице.
Затем индикаторные средства испытывались на чувствительность к пестицидам, обладающим антиэстеразним действием в воде. В качестве пестицидов использова5 лись хлорофос, ДДВФ и метафос. Чувствительность оценивалась по изменению окраски зараженного пестицидам индикаторного средства по сравнению с незараженным, а именно 2 индикаторных средства
10 параллельно погружались на 4-5 с соответственно в воду, содержащую пестицид и не содержащую его, и визуально наблюдали разницу в окраске обоих средств. При этом при погружении индикаторного средства в
15 чистую воду окраска индикаторного средства к 15 — 17 мин обесцвечивалась, в то время как при погружении в воду, содержащую пестицид, окраска индикаторного средства к этому времени сохранялась голубой, Чув20 ствительность индикаторного средства ко всем трем пестицидам практически одинаковая.
Результаты испытаний представлены в таблице.
25 Результаты испытаний показывают, что в диапазоне указанных в таблице концентраций хлорофоса, ДДВФ и метафоса индикатора средство обеспечивает надежную чувствительность к ним в воде в концентра30 ции 2 10 мг/мл и выше.
Формула изобретения
Матрица для обнаружения пестицидов, 35 обладающих антиэстеразным действием, включающая импрегнированную ферментом и фосфатным буфером бумажную матрицу, отличающееся тем,что,сцелью упрощения проведения анализа, бумажная 0 матрица дополнительно импрегнирована субстратом и индикатором, при этом в качестве субстрата берут а-тионафтилацетат, в качестве индикатора — дихлорфенилиндофенолят натрия и в качестве фермента—
45 ацетилхолинэстеразуэритроцитов кровичеловека или микробную эстеразу 1.
1701749
Субстрат, концентраЦня, 11
Индикатор, концентрация, И
Чувствительность к лестнцндан с концентрацне4! -10
5 10
2 10
Зстерааа концент1> Еlнл рация рН
+ +
+ + 4 +
+ +
+ +
+ +
+ . +
+ +
+ +
+ +
+ +
+ +
+ +
+ +
+
+
+ + +
+ + +
+ + +
+ + +
+ + +
+ +
+ +
+ + +
+ +
Составитель А.Семенов
Редактор Т.Пилипенко Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор М.Шэроши
Заказ 4513 Тираж. Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101
Ацетилхолннзсте
pssa>
E/ȑ
50000
40000
0,05
0,1
0,2
0,25
0 3
0,33
0 35
0,4
0,5
0,7
6,0
7,о
8,0
8,7
9,0
9,3
10,0
10,5
11,0
1.10
1,5 ° 10
2 ° 10
4 10
5 10
7 10
8 10
1>5 10
2 ° 10
0> 15
0,2
0>25
0,27
О ° 3
0>34
0,37
0,4
0,45
О ° 5
