Способ определения активности лектинов в почве

 

Изобретение относится к почвоведению и может быть использовано при изучении биохимических и химических процессов в почве . Цель изобретения - повышение достоверности определения. (пя этого предварительно определяют актуальную или обменную кислотность почвы общепринятыми методами, Яатем готовят фосфатную .буферную смесь с величиной РН, равной РН почвенной пыгяжки (содной или селевой). Путем дробного зтанольного фракционирования из образцов рочвы выделяют лектины и определяют их активность, проводя реакцию гемагглютинации в им унологических планшетах в течение 1 ч прч 5 С. Визуальную оценку гемагглютинирук ей активности проводят по пятибальной шкале. Преимущества способа заключаются в более высокой достоверности результатов определения активности лектинов в почве. 1 табл. §

СВОЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 C 01 N 33/24

ОПИСАНИЕ ИЗСБРЕ7ЕИКЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ! ъ

l.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНР Д ИЯД

ПРИ ННТ СССР

1 (21) 4756390/15 (22) 09,11,89 (46) 23.01 92, Бюл. < 3 (71) Полтавский сельскохозяйственный институт (72) С.В.flocnenoa, В..Ч.Муха, Е,Л,Голынская и В.Н.Саморолов (53) 63 1,427,2 (080.8) (56) Луцик Н..0. Панасюк Е.Н. и Луцик А,11. Лектины. - Львов; Вища школа. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ

ЛЕКТИНОВ В ПОЧВЕ (57) Изобретение относится к почвоведению и может быть использовано при изучении биохимических и химических процессов в почве. Цель изобретения - повышение достоверности

Изобретение относится к почвовелению и может быть использовано при изучении биохимических и химических процессов в почве.

Цель изобретения - повышение до. стоверности опрелеления.

Пример. Актуальную и обменную кислотность почвы опреаеляют общепринятыми методами. для этого навеску почвы зализывают соответственно дистиллированной водой или 1Н раствором КС1 в соотношении 1:2,5. После

5-минутного Вс гряхивания суспензии дают Отстоят ься и в ей сер:: ",еля 0Т рН потенциометрнческим методом. Затем готовится фосфатная буферная смесь с величиной рН, равной реакции почвен2 определения. Для этого предварит ель но определя ют а кт уал ьную или обменную кислотность почвы общепринятыми методами. Затем готовят фосфатную.буферную смесь с величиной РН, равной РН почвенной вытяжки (содной или солевой) . Путем дробного этанольного фракционлрования из образцов почвы выделяют лектины и определяют их активность, проводя реакцию гемагглютинации в иммунологических пгсаншетах в течение 1 ч пр". о

25 С. Визуальную оценку гемагглютиниру„ей активности прояорят по пятибальной шкаге, Преимущества способа заключаются B более высокой достоверности результатов определения активности лектинов в почве.

1 табл.

I ной вьггяжки (водной или солевой) . Путем дробного этанольного фракционирования из образцов почвы выделяют лектины и опререляют их активность. г1ля этого в лунки планшета для иммунологических реакций вносят по 0,05 мл приготовленного буфера, целают серйю двухкратных последовательных ра зведений лектинов, добавляют по 0,05 мл

2ь" ной суспензии трижды отмытых эритроцитов в каждую лунку и инкубируют

1 ч при 25 С. Визуальная оценка гемагглютиниру сщей активности проводит" ся по 5-6алльн.".й шкалс,,".ля Определения актив сот . лектинов в почве важно знание актуальной или ОбменнОй кислот ности пОч Вы, пО б

)О

4 чае, когда с „„0 t 0,01, сравниваемые результаты имеют существенные отличия и являются достоверными. Во всех изучаемых вариантах активность лектинов, спределяемая с учетом кислотности почвы, существенно выше по сравнению с прототипом („т) t 0,01).

Гемагглютинирующая способйост ь лектинов по прототипу низкая и практически не изменяется по вариантам (2,03,5 ед.).

При оценке по преплагаемому способу их активность меняется в широких

Пределах (5,5-11,0 ед. е буфере с рН волной вытяжки, 7,5-11,5 ед. в буфере с рН солевой вытяжки), что указывает на зависимость от почвенных характеристик.

Все это свидетельствует о более высокой достоверности предлагаемого способа по сравнению с прототипом.

Данный способ может быть легко реализован в практической работе, так как необходимые цля его осуществления реактивы и оборудование являются дешевыми и доступными.

Активность по прецлагэемому способу

Акти вност ь по прототипу (буФер с рН

7,4) Пбразцы почвы, взятые под:

0,05 уфео с t цк рН воцной вытяжки буфер рН солевой вытяжки

Залежью б. а ха - ой с ее клоЛ

Озимой пшеницей б

Кукурузой

4,60

4,60

4,60

4,60

9,0

10,90

5,45

2,0

10,90

9,3

8,57

12,46

9,0

9,0. у5

8,5

2,0

10,12

11,68

7,5

3,5

11,О

11,5

3 17075 скольку она является важнейшим фактором внешней срелы, влияющим на все биохимические процессы в почве, Путем дробного этанольного фракци они рова ния и э обра зцо в поч вы пол залежью и различными сельскохозяйственными культурами выцеляют лектины (фракция, выпадающая в осацок при

76 -ном насыщении эталоном по объему) 10 и определяют их активность, Реа к ци ю r ема г г лют и нэ ции проводят в иммунологических планшетах. По прототипу готовят фосфатный буфер рИ 7,4.

По предлагаемому способу рН буфера l5 соответствует зна ению актуальной или обменной кислотности исследуемых образцов почвы, которая определяется потенциометрически, В лунки планшета при помощи полуавтоматического доза- 20 тора вносят по 0,05 мл соответствующего буфера в смеси с физиологическим раствором (1:1). Лектины последовательно двукратно разводят в восьми. лунках рля каждого из вариантов. Пос- 25 ле добавления по 0,05 мл 22-ной суспензии трижды отмытых эритроцитов и инкубэции 1 ч при 25 С, интенсивность реакции гемэгглютинации оценивали по

5-балльной шкале. 30

В таблице представлены экспериментальные данные о эритроэгглютинирующей активности лектинов е почве (в условных единицэх) в зависимости от рН буфера. 35

Математическую обработку провоаили методом оценки существенности разности средних по t- ритерию Стьюцента.

При этом t, ра вное при 1 t- ном 40 уровне существенности 4,60, сравнивалось с уайет полученным при обработке экспериментальных данных, Р том слу- формула изобретения

Способ определения активности лектинов в почве, включающий их дробное этанольное фракционирование из почвы и определение эритроагглютинирующей способности в фосфатном буфере, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения достоверности определения, предварительно определяют актуальную или обменную кислотность почвенной вытяжки, а опрецеление эритроагглютинирующей способности ведут в фосфатном буФере при рН, равной рН почвенной вытяжки.