Способ определения тиопентала натрия в крови

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения тиопентала натрия в крови. Цель изобретения - повышение чувствительности способа - достигается за счет использования йодо-азидной смеси в качестве реагента на тиопентал натрия . 8 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦЧАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГННТ СССР

1 (21) 4775734/14 (22) 20. 11. 89 (46) 15.03.92. Бюл. Р 10 (71) Винницкий медицинский институт им. Н.И.Пирогова (72) P.À.Мусин, А.А.Пеитюк, А.И.Дацюк, Н.Б.Луцюк и В.И.Богомаз (53) 612.015 (088.8) (56) Anal. letters, 1971, 4(2), 61.

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимическим методам исследований, и может быть использовано для количественного определения тио- . пентала натрия (TH) в биологическом материале.

Цель изобретения — повышение чувствительности способа °

Сущность метода заключается в том, что к йодо-азидному реактиву добавляют пробу с ТН и измеряют падение экстинкции (ЬД) через 1 мин на фотоэлектроколориметре (ф = 340 нм).

Додо-азидная реакция чувствительна уже к 1 нг тиопентала. Линейная зависимость изменения (g,g) от количества ТН в пробе находится в пределах 5 — 100 нг.

В табл. 1 приведена зависимость изменения оптической плотности (ЬД) от количества ТН (средние величины из трех измерений).

Воспроизводимость результатов определения ТН оценивают по результатам восьми опытов (табл. 2) „„SU„„1719974 А1

С 01 N 33/48//А 61 К 31/515

2 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИОПЕНТАЛА

НАТРИЯ В КРОВИ (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения тиопентала натрия в крови.

Цель изобретения — повышение чувствительности способа — достигается за счет использования йодо-азидной смеси в качестве реагента на тиопентал натрия. 8 табл.

В табл. 2 показана воспроизводимость результатов определения тиопентала натрия (в пробах содержится по

10 нг вещества).

Специфичность способа определения

ТН проверена на лекарственных препаратах, применение которых у больных совместно с ТН наиболее вероятно (табл. 3) °

В табл. 3 показана специфичность метода определения ТН.

Прямое определение ТН в плазме крови невозможно, так как плазма содержит вещества, способные давать йодо-азидную реакцию (табл, 4), пав этому необходимо предварительное извлечение ТН из плазмы крови.

В табл. 4 показано изменение оптической плотности после прибавления плазмы крови, не содержащей ТН.

Способ экстракции ТН заключается в извлечении его хлороформом из кислой среды. К 0,5 мл плазмы крови, содержащей ТН, добавляют 0,1 мл 0,1 M раствора соляной кислоты и встряхивают с 8 мл хлороформа в течение

1719974!

Таблица 1

Количество Д вЂ” Д ХОЛОСТОТН, нг.

Дза60с го опыта (ЬД) 2

О (холостой опыт) 0,040

О, 122

0,082

5 мин. После центрифугирования при

3000 об/мин в течение 30 мин отбирают 2 мл хлоро@ормного экстракта и выпаривают на водяной бане при 40- 60С

5 досуха. В пробирку к сухому экстракту добавляют 2 мл воды, размешивают и отбирают 0,02 мл для определения ТН.

В табл. 5 показана характеристика способа экстракции ТН.

Таким образом, предлагаемый способ экстракции обеспечивает практически полное извлечение ТН, добавленного к плазме крови.

Для проверки специфичности способа 15 экстракции, проводят экстракцию хлороформом из плазмы крови, не содержащей ТН (табл. 6).

В табл. 6 показано определение специфичности экстракции ТН. 20

Из данных таблицы видно, что хлороформный экстракт такой плазмы не содержит соединений, способных давать йодо-азидную реакцию.

Определение ТН в крови больных во

25 время наркоза по данному методу показало, что через 15 мин после внутривенного введения 600 мг препарата в,.". крови обнаружено 12 мкгlмл ТН, что близко к концентрациям ТН в крови 30 больных, определенных другими методами.

В табл. 7 приведены результаты определения концентрации ТН в крови больных. 35

В табл. 8 приведено сравнение флуориметрического и предлагаемого способов определения тиопентала.

П. р и м е р. Реактивы: хлороформ (очищен перегонкой) ° йодо-азидный . реактив содержащий 0,6 M раствор азиУ да натрия, 0,0025 И раствор йода и

О 1 И раствОр сОляной кислоты (ace 45 реактивы приготовлены на бидистиллированной воде).

Ход определения.

К пробе плазмы крови прибавляют

0,1 И раствор соляной кислоты и хлороформ (соотношение 0,5:0, 1:0,0). Пробу интенсивно встряхивают в колбе с притертой пробкой в течение 5 мин, а затем содержимое центрифугируют 30 мин при 3000 об/мин. Сухой пипеткой отбирают аликвоту хлороформного экстракта и на водяной бане выпаривают досуха при 40 — 60 С. К сухому экстракту доо бавляют 2 мл бидистиллированной воды, встряхивают и отбирают 0,02 мл для анализа. В кювету помещают йодо-азидный реактив в составе, мл: 0,6 M раствор азида натрия О, 15; О, 1 И раствор соляной кислоты О, 1, 0,0025 И раствор йода 0,15.

Измерение экстинкции йодо-азидной смеси проводят при 340 нм в кювете объемом 0,5 мл и длиной светового пути 10 мм. После этого к йодо-азидной смеси в кювете добавляют 0,02 мл пробы и через 60 с проводят повторное измерение экстинкции и рассчитывают изменение оптической плотности.

При определении тиопентала в пробах плазмы, содержащих нанограммовые количества препарата, соответственно уменьшают количество воды, прибавляемой к сухому экстракту.

Формула изобретения

Способ определения тиопентала натрия в крови путем экстракции препарата, Обработкн реактивом с последующим измерением оптической плотности смеси, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, экстракт суспендируют в воде, водную суспензию обрабатывают йодо-азидной смесью при их соотношении 1:25 с последующим измерением величины ойтической плотности через

1 мин при 340 нм.

1719974

Продолжение табл, 1

О, 136

0,403

0,684

0, 176

0,443

0,724

100

1000

Т а блица 2

Л Статистические параметры

0,171 б =«+0,0275 - среднее квадратичное отклонение отдельных результатов

О, 161 Х = О, 156 — среднее арифметическое

0,156 $ = 0,00972 — средняя квадратичная ошибка

0,150

0,153 Ч = 3,263 — коэффициент вариации

0,149

О, 157

0,153

Таблица 3

0,0

0,0

200

Димедрол

200

Атрофии

Калипсол

0,0

200

П р и м е ч а н и е. Проба содержит

О, 15 мл 0,6 И раствора аэида натрия, О, 1 мл О, 1 И раствора соляной кислоты и О, 15 мл 0,0025 И раствора йода.

К пробе прибавляют раствор ТН объемом

0,02 мл (в холостом опыте 0,02 мл воды)..Фотометрирование проводят в кювете с длиной светового пути, см, при Ъ = 340 нм.

1719974

Продолжение табл.3

0,0

200

Дитилин

Реланиум

0,0

200

П р и м е ч а н и е. Количество препаратов в 20 раз превьппает количество ТН, вызывающее полное обесцвечивание йодо-азидной смеси.

Таблица 4

Объем плазмы, прибав- Изменение онтиленной к йодо-азидной ческой плотноссмеси ти Д

1,201

1,152

1, 176

0,02

0,02

0,02

l 1

Таблица 5

Количество

ТН, добавленного к

Д иэ четырех измерений стандарта

Процент экстракции плазме крови, мкг

0,137 99,2

100

1,0

0,137 97,1

О, 157 96,9

500

5,0 °

5000

50 0

П р и м е ч а н и е. Раствор плазмы, содержащей ТН, готовят следующим образом. К 0,25 мл плазмы крови добавляют О ° 25 мл раствора с известным содержанием ТН и проводят экстракцию по описанной схеме, Стандартный раствор сравнения готовят следующим образом. К 0,25 мл воды добавляют 0,25 мл раствора ТН той же концентрации и разводят в 100, 500,и 5000 раз.

Ко эффициен т разведения при экстракции и отборе проб для измерений

О, 138

О, 141

О, 162

Д четырех измерений экстракта плазмы

1719974

Таблица 6

Количество Ълазмы

ОПЬ та

0,0

1,0

0,0

1,0

0,0

1,0

Таблица 7

Проба, взятая на анализ, мл

Д,р

С, мкг К С, мкг

0,5

0,542 0,15 80 0,15= 12

0,5

0,5

0,548

П р и м е ч а н и .е. С вЂ” концентрация ТН по графику, К вЂ” коэффициент разведения.

Т а блица 8

Количество тио- Флуоримет-. пентала в пробе, рический нг способ,Ф»-Ф„

5,0

10,0

100,0

4,02Х

3,367

П р и м е ч а н и е. Ф,„ — флуоресценция пробы, Ф„ — флуоресценция контроля; Д» — оптическая плотность пробы, Д вЂ” оптическая плотность контроля.

Составитель С.Рыбалкин

Редактор H.Ïåòðoâà Техред М,Дидык Корректор Л.Пилипенко

Заказ 768

Тираж

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101

0,537

0,541

Точность определения при р

=095 n-=8

0,040

0,398

Предлагаемый способ, Д „-Л к

0,082

О, 136

О, 403