Штамм бактерий bacillus suвтilis, используемый для получения препарата для профилактики и лечения воспалительных процессов и аллергических заболеваний

 

Изобретение относится к биотехнологии , к средствам для профилактики и лечения патологических процессов, а именно гнойно-воспалительных заболеваний различной локализации и пищевой аллергии. Целью изобретения является штамм Bacillus subtilis 534, способный/проникать из желудочно-кишечного тракта и концентрироваться в тканях патологического очага, выделяя антибактериальные вещества, протеолитические ферменты, иммуномодуляторы, что позволяет повысить эффективность профилактики и лечения гнойно-воспалительных процессов различной локализации и пищевой аллергии. Штамм Bacillus subtilis 534 депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР под № 1666 D. Препарат из штамма обеспечивает усиление лечебного эффекта за счет проникновения бактерий в очаг повреждения, где они вырабатывают биологически активные вещества, тем самым подавляя развитие инфекции и способствуя очищению от некротизированных тканей.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

1723116 А1

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4426998/13 (22) 15.04.88 (46) 30.03.92. Бюл. ¹ 12 (71) Оренбургский государственный медицинский институт (72) B.È,Íèêèòåíêo и И.К.Никитенко (53) 619:616.9:616.084 (088.8) (56) Карпов В.М, Препарат Бактерин SL.—

Ветеринария, 1986, ¹ 7, с. 45. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ ВАС11Л 0$

SUBTILlS, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ

ПРОЦЕССОВ И АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ (57) Изобретение относится к биотехнологии, к средствам для профилактики и лечения патологических процессов, а именно гнойно-воспалительных заболеваний различной локализации и пищевой аллергии, Изобретение относится к биотехнологии, к средствам для профилактики и лечения патологических процессов, а именно гнойно-воспалительных заболеваний различной локализации и пищевой аллергии.

Целью изобретения является новый штамм Bacillus subtilis 534. Способность проникать из желудочно-кишечного тракта и концентрироваться в тканях патологического очага, выделяя антибактериальные вещества, протеолитические ферменты, иммуномодуляторы, позволяет повысить эффективность и лечение (и профилактику) гнойно-воспалительных процессов различ ной локализации и пищевой аллергии.

Штамм выделен из негнойной раны больно(st)s С 12 N 1/20, А 61 К 35/74//(С 12

N 1/20, С 12 R 1:125.) Целью изобретения является штамм

Васйоз subtilis 534, способный1проникать из желудочно-кишечного тракта и концентрироваться в тканях патологического очага, выделяя антибактериальные вещества, протеолитические ферменты, иммуномодуляторы, что позволяет повысить эффективность профилактики и лечения гнойно-воспалительных процессов различной локализации и пищевой аллергии, Штамм Bacillus subtilis

534 депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР под № 1666 D. Препарат из штамма обеспечивает усиление лечебного эффекта за счет проникновения бактерий в очаг повреждения, где они вырабатывают биологически активные вещества, тем самым подавляя развитие инфекции и способствуя очищению от некротизированных тканей. го и депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов под ¹ 1666

D, Штамм В. subtilis ВКМ N -В-1666D характеризуется следующими свойствами, Культурно-морфологические свойства.

Палочки, Величина клеток односуточной агаровой культуры (2 — 4) х (0,6-0,8) мкм. Бактерии подвидные. Споры образуют, капсулы не образуют. По Граму окрашиваются положительно. Колонии на мясо-пептонном агаре шероховатые, с фестончатыми краями, со слабым розовым оттенком, диаметром 2 — 12 мм. Штамм размножается при 15 — 50 С, оптимум роста 36 — 37 С, На мясо-пептонном

1723116 бульоне при 37 С через 18 — 24 ч образует белесоватую пленку на поверхности и небольшой придонный осадок, состоящий иэ пленок. На гретой среде Тароцци через 24—

48 ч инкубации при 37 С отмечается рост в виде нежной белесоватой пленки, растет при 7% хлорида натрия.

Биохимические свойства. Вызывает гидролиз крахмала, редукцию нитратов.

Расщепляет без выделения газа глюкозу, сахарозу маннит, мальтозу, дульцит, галактозу, ксилозу, лактозу. Рамнозу, лизин аргинин, орнитин не ферментирует.

Сероводород и индол не образует. Ацетилметилкарбинол и каталазу выделяет.

Чувствителен к бензилпенициллину, амнициллину, эритромицину, мономицину, линкомицину, тетрациклину, не чувствителен к полимиксину.

Штамм продуцирует антибиотик широкого спектра действия, подавляющий рост стафилококков, стрептококков, протея, синегнойной палочки, дрожжевых грибков, Выделяет протеолитические ферменты, расщепляющие белки.

B 200 бактериологических матрац разливают по 250 см 3%-ного стерильного мяз со-пептонного агара. В каждый из них с соблюдением асептики вносят по 10 см з взвеси производственного штамма В.

subtilis ВКМ М В-1666D, содержащей по

100 млн. клеток в 1 см 0,9%-ного раствора з натрия хлорида. Матрацы закрывают ватномарлевыми пробками и помещают в термостаты с температурой 36-37 C. Через 24 ч с соблюдением асептики выросшую культуру смывают стерильным раствором 0,9%-ного раствора натрия хлорида иэ расчета 100 см на 1 бактериологический матрац, Полученную взвесь разливают в 500 см стеклянные з флаконы. 24 ч при давлении 70 Па проводят лиофилизацию. Стабилизаторы при этом не оказывают существенно влияния на лечебный эффект. Они могут быть различными:

0,9%-ный раствор натрия хлорида, 5%-ная глюкоза, сахарозо-желатиновая смесь и др.

В 1 мг полученного препарата ("споробактерин") содержится 250 млн. живых клеток штамма В.subtilis ВКМ RL В-1666D.

Препарат подавляет рост золотистого стафилококка в зоне 30 мм, протея в зоне 28 мм, дрожжевого грибка в зоне 32 мм.

Препарат назначается людям внутрь по

5 — 10 млрд, клеток в течение 10 сут. Используется для профилактики и лечения гнойновоспалительных процессов различной локализации (гнойные раны, остеомиелит, сепсис, пневмония и др.), пищевой аллергии, дисбактериоза, 5

Пример 1. Больная А.,59лет. Диагноз: обострение хронического тонзиллита. Больна в течение двух суток. Отмечает непереносимость антибиотиков, сульфаниламидов.

При употреблении в пищу молока и моркови появлялись диаррея и крапивница (высыпания на коже). Внутрь назначен препарат на основе живой культуры штамма В. subtills

BKM М В-1666D в дозе 5 млрд. клеток один раз в сутки. Явление обострения тонзиллита купированы на 4 сут. Лечение продолжено еще в течение 6 дней. Осмотрена через 6 мес. Клинически здорова. Употребляет в пищу в умеренных количествах молоко и морковь, Пищевой аллергии не отмечает.

Пример 2. Больная М., 56 лет. Диагноз: костный панариций II пальца левой кисти, лимфаденит. Больна 2 мес. Дважды проводилось вскрытие гнойника, выполнялась операция секвестрэктомия. Получала антибиотики широкого спектра действия перевязки с антисептиками. Больной предложена ампутация пальца. Il палец резко отечен, цианотичен (синюшен). В области средней фаланги рана около 1 см в диаметре.. Грануляции бледные, покрыты фибрином. Отделяемое серозно-гнойное.

Увеличены и болезненны лимфоузлы в области локтевого сустава. При бактериологическом исследовании выделены золотистый стафилококк и бактерии рода Pseudomonas.

Внутрь назначен препарат на основе живой культуры штамма B. subtilis В КМ М В-1666D по 5 млрд. клеток в 2 раза в сутки. Производились перевязки с 10%-ным раствором натрия хлорида. Штамм В. subtilis ВКМ М

В-1666D выделен из крови и из раны через сутки, Через 3 дня рана очистилась, на 9 сут она заэпителизировалась.

Пример 3. Больная Г., 48 лет. Диагноз: хронический сепсис, воспалительный инфильтрат левого предплечья, сахарный диабет средней тяжести, дисбактериоз.

Больна в течение 1,5 лет. После микротравм и без видимых причин стали возникать фурункулы, абсцессы и флегмоны на конечностях и грудной клетки. Перенесла 9 операций вскрытия и дренирования гнойников. В результате длительного применения антибиотиков развился дисбактериоз, беспокоили чередование диарреи и запоров, метеоризм, Соблюдала диету и постоянно получала инсулин, Во время очередного обострения и формирования воспалительного инфильтрата осмотрена в клинике. Из крови выделен золотистый стафилококк. В течение 10 сут проведено лечение бактериальным препаратом на основе живой культуры штамма В. subtilis ВКМ hL В-1666D по

5 млрд. клеток два раза в сутки, Препарат

1723116

55 назначался внутрь. Другие антибактериальные препараты больше не получала. Через

2 сут воспалительный инфильтрат исчез. В посеве крови обнаружен только штамм В.

subtilis ВКМ N B-16660. Нормализован стул.

Пример 4. Для предупреждения гнойно-хирургической инфекции препарат давался внутрь по 1 капсуле (5 млрд. клеток) в сутки в течение 10 дней 9 больным с открытыми переломами конечностей, 7 — co случайными ранами мягких тканей, 12 — после плановых оперативных вмешательств (остеосинтеза). Для лечения "споробактерин" в дозе 1 — 4 капсулы в сутки внутрь в течение 10 дней применен у 14 больных с острым обострением хронического остеомиелита, у 14 — гнойными ранами, у 6 — с гнойно-воспалительными процессами в области спиц компрессионно-дистракционных аппаратов, у 1 — черепно-мозговой травмой, пневмонией, менингитом, пролежнями, у 1 — с хроническим сепсисом на фоне сахарного диабета, у 2 — с тонзилитом, у 1— с гайморитом. По показаниям у 12 больных с обширными нагноительными процессами курс лечения через 3 — 7 сут повторялся, У 9 больных, ранее длительно получавших антибиотики, были клинические проявления дисбактериоза: боли и вздутие живота, чередование запоров и жидкого стула, Кроме того, у 7 больных отмечена непереносимость одного или нескольких антибиотиков, сульфаниламидов, а у одной — пищевая аллергия на рыбу, цитрусовые, морковь, помидоры.

В периодлечения споробактерином все больные антибиотики и другие антисептические препараты не получают. Хирургическое лечение, дезинтоксикация, стимулирующую терапию проводят по показаниям и не отличаются от методов, принятых в клинике.

При профилактическом приеме спорбактерина по 1 капсуле внутрь нагноение раны отмечено у одного из 28 больных. У этого пострадавшего с открытым переломом голени вследствие некроза кожи образовался струп, который постепенно отторгся. Рана зажила вторичным натяжением. В то же время у больных, не получавших споробактерин, гнойно-воспалительные процессы встречались чаще (р

0,05), Так, в клинике нагноения открытых переломов наблюдались в 36, случайных ран мягких тканей — в 14, послеоперационных ран после остеосинтеза — в 7 наблюдений.

Штамм В. subtilis высеян из крови у 27 из 28 больных, а из раны у 26 из 28 больных, Осложнений при профилактическом применении споробактерина не отмечено, что подтвердили клинические наблюдения и данные анализов.

Из 36 больных с гнойными ранами (в том числе с остеомиелитом, хрониосепсисом) стафилококк в монокультуре и составе микробных ассоциаций высеян у 26, сине-гнойная палочка — 6, кишечная палочка — у 4, протей — у 3, прочие бактерии — у 8. К действию пяти и более антибиотиков были устойчивы 76 полученных штаммов. Через сутки после первого приема наблюдалось значительное увеличение количества гнойного отделяемого. Раны быстро очищались от некротизированных тканей. В последующем менялся характер раневого секрета, его количество уменьшалось из гнойного он постепенно становился серозно-гнойным с легкой примесью разложившейся крови, Через 1-3 сут после начала лечения появлялась ярко-розовая грануляционная ткань, исчезали отек, лимфаденит, лимфагоит, активизировалась эпителизация, Заживление гнойныхран наступилоу23 из 36 больных, стихание воспалительного процесса (нормализация температуры тела, очищение раны от некротизированных тканей, уменьшение количества гнойного отделяемого и др,) у 11, В последующем раны зажили и свищи закрылись у 9 из них. Только у 2 больных (с обострением хронического остеомиелита и с нагноением в области спицы аппарата Илизарова) лечение. "Споробактерином" было безуспешным. У последнего нагноение в области одной спицы стихло, но вновь возникло в области другой спицы. При лечении пневмоний, менингита, хрониосепсиса, тонзиллитов гайморита стойкое выздоровление получено у всех больных.

Аллергических реакций, несмотря на предрасположенность к ним ряда больных. не наблюдали, Клинические проявления дисбактериоза стихли у всех 9 больных через 1 — 4 сут, Учитывая, что до применения

"споробактерина" 21 больной в течение 642 дней без положительного эффекта лечился протеолитическими ферментами, антибиотиками и другими антисептиками, полученные результаты следует признать хорошими.

Препарат таким образом, на основе штамма В. subtilis BKM N - В-@1666D обладает выраженной лечебной активностью при гнойно-хирургической инфекции: подавляет рост возбудителей, способствует очищению ран от некротизированных тканей, ускоряет процессы заживления. Он может быть использован для лечения других

1723116

20

35

50

Составитель В,Романова

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор B.Ãèðíÿê

Редактор Н.Горват

Заказ 1042 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 воспалительных процессов, вызываемых бактериальной микрофлорой: пневмоний и тонзиллитов и др.

При профилактическом лечении препаратами уменьшается число нагноений ран и открытых переломов.

Осложнений при лечении препаратом не отмечено, клинические проявления пищевой аллергии и дисбактериоза купируются, Формула изобретения

Штамм бактерий Bacillus subtilis ВКМ

5 В-16660, используемый для получения препарата для профилактики и лечения воспалительных процессов и аллергических заболеваний.