Способ получения производных катехина

 

Изобретение касается производных катехина и, в частности, получения соединений общей формулы 3-ОН, 4-ОН, 5-Х- CeH2-C(0)-NRiR2, где NRifa- п-бензоилпиперидиниевая группа или при RI - Н Ra - бензил, низший гидроксиалкмл, адамантил; X - N02 или CN, проявляющих ингибйрование против фермента катехин-0-метилтрансферазы специфического действия, что может найти применение в медицине и биологии . Цель изобретения - создание новых более активных веществ указанного класса. Синтез ведут обработкой соответствующим амином защищенного по гидр оксилу галоидангидрида бензойной кислоты с последующим гидролизом для снятия защитных групп по гидроксилу. Новые соединения практически не блокируют биосинтез жизненно важных катехинаминов, обеспечивают перенос метильной группы от 5-аденозил-Ьметионина (известные вещества проникают через барьер кровь - мозг и блокируют биосинтез катехинаминов), в малой степени проникают через барьер кровь - мозг. 1 табл. (/ с

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (s1)s С 07 С 235/66

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ пО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

С вЂ” 2

Il 2 R

0 CrCH) @Ч

НО

Н0

1 (21) 4613317/04 (62) 4203731/04 (22) 23.01.89 (23) 27.11.87 (31) 86475 (32) 28.11.86 (33) Fl (46) 23.04.92. Бюл. N 15 (71) Орион-Ихтюмя Ой (Fl) (72) Оейе Йоханнес Бякстрем, Калеви Эверт

Хейнола, Эркки Юхани Хонканен, Сеппо Калеви Кааккола, Пекка Юхани Кайрисало, Ивонне Инге-Бритт Линден, Пекка Топиас

Мяннисте, Эркки Арне Олави Ниссинен

Пентти Похто, Аино Кюлликки Пиппури и

Ярмо Йохан Пюстюнен (Fl) (53) 547.27,07 (088.8) (56) The j ournal of Pharmacolody Experimental

Therapentics, 156, ¹ 2, р.201 — 205. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ КАТЕХИНА (57) Изобретение касается производных катехина и, в частности, получения соединеИзобретение относится к новым производным катехина общей формулы

НО где NR1R; — n-бензоилпиперидиниевая группа или при К1 — Н К2 — бензил, проявляющим ингибирующую активность против фермента катехин-0-метилтрэнсферазы (СОМТ) специфического действия.

„„5U „„1729291 АЗ ний общей формулы З-ОН, 4-ОН, 5-XCGH2 — Ñ(0)-NR1R2, где NR1R2 — n áåíçîèëïèперидиниевая группа или при R1 — Н R2— бензил, низший гидроксиалкил, адамантил;

Х вЂ” N02 или CN, проявляющих ингибирование против фермента катехин-0-метилтрансферазы специфического действия, что может найти применение в медицине и биологии. Цель изобретения — создание новых более активных веществ указанного класса.

Синтез ведут обработкой соответствующим амином защищенного по гидроксилу галоидангидрида бензойной кислоты с последую-щим гидролизом для снятия защитных групп по гидроксилу. Новые соединения практически не блокируют биосинтез жизненно важных катехинаминов, обеспечивают перенос метильной группы от

S-аденозил-L-метионина (известные вещества проникают через барьер кровь — мозг и блокируют биосинтез катехинаминов), в малой степени проникают через барьер кровь — мозг, 1 табл.

Известно использование для ингибировэния COMT 3,4 -дианурокси-2-метилфеноформулы . Н0

Однако активность его не очень высока.

Целью изобретения является разработка способа получения новых производных катехина, обладающих более высокой активностью по сравнению с известным.

1729291

Пример 1. N-(1-Адамантил)-3,4-диацетокси-5-нитробензамид.

Раствор, содержащий 0,85 г 3,4-диацетокси-5-нитробензойной кислоты и 0,32 мл тионилхлорида и каталитическое количество N,N-диметилформамида в 10 мл толуола, нагревают 1 ч при 80 С. Растворитель выпаривают в вакууме, растворяют остаток в 5 мл дихлорметана и прибавляют к смеси, содержащей 0,56 г 1-аминоадамантана солянокислого и 0,94 мл тризтиламина в 10 мл дихлорметана, перемешивают 15 мин при

0 С, а затем 15 мин при 20 С, К реакцион- ной смеси прибавляют воду и отделяют дихлорметановую фазу. Растворитель отгоняют в вакууме, получают 1,2 г (100 ) желтого вязкого масла.

Пример 2, N-(1-Адамантил)-3,4-диокси-5-нитробензамид.

Раствор, содержащий 1,2 r продукта, полученного в примере 1 и каталитическое количество серной кислоты в 10 мл метанола, кипятят с обратным холодильником в течение 3 ч. Прибавляют 20 мл воды и охлаждают, кристаллизуется 0,85 г (89,5 ) целевого продукта, т.пл. 207 — 208 С.

Вычислено, : С 61,43; Н 6,07; N 8,43, Найдено, : С 61,39; Н 6.31; N 8,61.

Пример 3. 4-Циклогексилкарбонил-1(3,4-диацетокси-5-нитробензоил)-пиперид ин, Работают по методике примера 1, используя 0,58 г циклогексилкарбонилпиперидина и 0,38 мл 2,6-лутидина вместо солянокислого 1-эминоадамантанэ и триэтиламина соответственно. Выход 1,2 г (87 / ), вязкое желтое масло.

Пример 4. 4-Циклогексилкарбонил-1(3,4-диокси-5-нитробензолил)-пиперидин.

Работают по методике примера 2, используя 1,2 г продукта, полученного в примере 3. В ыход 0,5 r (50 p), т.пл. 155-165 С.

Вычислено,, С 60,62; Н 6,43; N 7,44.

Найдено, : С 60,48, Н 6,31; N 7,54, Пример 5. N-Бензил-3,4-диацетокси5-нитробензамид, Превращают 0,75 г 3,4-диацетокси-5нитробензойной кислоты в соответствующий хлорангидрид кислоты, как описано в примере 1. Его растворяют в 5 мл дихлорметана и прибавляют к раствору, содержащему 0,27 мл бензиламина и 0,5 мл

2,6-лутидина в 7 мл дихлорметана, Выход

0,95 r (96 ), вязкое масло.

Пример 6. N-Бензил-3,4-диокси-5-нитробензам, Работают по методике примера 2, используя 0,95 г продукта, полученного в примере 5. Выход 0,5 г (60,), т.пл. 185 — 189 С.

Вычислено, : С 58,74; Н 3,52; N 9,79, Найдено, ; С 58,94; H 3,59; N 9,59.

Пример 7. N-(1-Адамантил)-3,4-диацетокси-5-цианобензамид, Превращают 0,6 г 3,4-диацетокси-5-ци5 анобензойной кислоты в соответствующий хлорангидрид и далее работают по методике примера 1, Выход 0,75 г (88 ), вязкое масло.

Пример 8. N-(1-Адамантил)-3,4-диок10 си-5-цианобензамид.

Деацетилируют 0,75 г полученного продукта по методике примера 2. Выход 0,5 г (89 ), т.пл. 253 — 255 С.

Вычислено, : С 69,21; Н 6,45; N 8,97, 15 Найдено, : С 69,50; Н 6,61; N 9,01, Пример 9, N-(3-Оксипропил )-3,4-диокси-5-нитробензамид.

Процесс проводят аналогично примерам

1 и 2, используя 3,4-диацетокси-5-нитробен20 зойную кислоту и 3-аминопропан-1-ол. Выход

85, т,пл. 160 — 163 С.

Вычислено, д. С 46,88; Н 4,72; Й 10,93.

Найдено, : С 47,03; Н 4,92; N 11,10.

Эффективность ингибирования COMT c

25 использованием полученных соединений.

СОМТ катализирует перенос метильной группы от S-аденоаил- =метионина в ряду соединений катехиновой структуры.

Определение активности CQMT in vitro.

30 Активность in vitro для СОМТ была определена для препаратов ферментов, выделенных из мозга и печени крыс Kan:WIST, весящих около 100 г, Крысы были умерщвлены диоксидом углерода, а ткани были удале35 ны и сохранены при -80 С до определения ферментативной активности.

Препарат фермента. был приготовлен путем гомогенизации тканей в 10 мМ фосфатном буфере, рН 7,4 (1:1О г/мл), который

40 содержит 0,5 мМ дитиотрейтола. Гомогенат центрифугируют при 15000xG в течение 20 мин, Супернатант повторно центрифугируют в течение 60 мин при 100000xG, Все процедуры были проведены при +4 С, Су45 пернатант от последнего центрифугирования (100000xG) используют для определения растворимого СОМТ фермента, Определение И К осуществляли путем

50 измерения СОМТ активности для нескольких концентраций лекарства в реакционной смеси, которая содержит препарат фермента, 0,4 мМ диоксибензойной кислоты (субстрат), 5 мМ хлорида магния, 0,2. мМ

55 S-аденозил- =метионина и ингибитор СОМТ в 0,1 Мфосфатном буфере,,рН 7,4. В контроль не добавляли ингибитор СОМТ. Смесь инкубируют в течение 30 мин при 37 С, после чего реакцию останавливают хлорной кислотой и удаляют центрифугированием

1729291

20

НО, N R1

В

0-7 и

0 выпавшие в осадок белки (4000xG в течение

10 мин). Активность фермента была измерена путем определения концентрации 3-метокси-4-оксибензойной кислоты, образовавшейся из субстрата СОМТ (диоксибензойной кислоты) с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием электрохимического детектора. Хроматографию проводят путем инжектирования 20 мкл образца в колонку

4,6х150 мм Сферисорб ODS (размер частиц

5 мкм), Продукты реакции элюируют из колонки 20 -ным метанолом, содержащим

0,1 М фосфата, 20 мМ лимонной кислоты и

0,15 мМ ЭДТУК, рН 3,2, при скорости потока

1,5 мл/мин. Электрохимический детектор был установлен на 0,9 В против Ag/ÀgÑ! электрода. Кон центра цию реа кцион ного продукта — 3-метокси-4-оксибензойной кислоты сравнивают с контрольными образцами и образцами, содержащими СОМТ ингибитор. Величина ИКпо является концентрацией, которая вызывает снижение активности COMT на 50 .

Действие ингибиторов СОМТ in vivo.

В эксперименте были использованы самцы крыс Han, WIST весящие 200-250 г.

Контрольная группа получила 50 мг/кг карбидофы за 30 мин до леводофы (50 мг/кг).

Испытуемой группе также давали 50 мг/кг карбидофы за 30 мин до леводофы и ингибитор СОМТ. Лекарства вводили орально.

Отбор образцов, Около 0,5 мл крови было отобрано из хвостовой артерии. Образцу дали скоагулировать на льду. После этого образец центрифугировали и отделили сыворотку.

Сыворотку хранили при — 80 С до тех пор, пока не было проведено определение концентраций леводофы и ее метаболита 3ОМД.

Определение концентрации леводофы и 3-ОМД в сыворотке.

Прибавляют к примерно 100 мкл сыворотки равный объем 0,4 М хлорной кислоты, 0,1 сульфата натрия, 0,01 ЭДТУК, который содержит диоксибензиламин в качестве внутреннего стандарта. Образец перемешивают и хранят на льду, после чего белки удаляют центрифугированием (4000xG в течение 10 мин) и определяют концентрации леводофы и 3-ОМД с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с электрохимическим детектором. Соединения разделяют на колонке

4,6х150 мм с Ультрасферой 0DS с помощью элюента, содержащего 4 .ацетонитрила, 0,1 М фосфатного буфера, 20 мМ лимонной кислоты, 0,15 мМ ЭДТУК,2 мМ октилсульфоновой кислоты и 0,2 . тетрагидрофолана, рН 2,8. Скорость потока 2 мл/мин. Электрохимический детектор был установлен на

+0,8 В против Ag/ÀäCI электрода. Концентрации испытуемых соединений были определены сравнением высоты пиков с высотой пика внутреннего стандарта. Соотношение было использовано для расчета концентрации леводофы и 3-ОМД в сыворотке у контрольных крыс и у крыс, получивших ингибитор СОМТ.

Полученные результаты приведены в таблице.

Как видно из таблицы, полученные соединения более активны, чем известное, кроме того, известное соединение проникает через барьер кровь — мозг и блокирует биосинтез жизненно важных катехинаминов, в то время как предложенное не проникает через барьер кровь — мозг.

Формула изобретения

Способ получения производных катехина общей формулы.. Нп где NR1Rz — n-бензоилпиперидиниевая группа или при R1 — Н йг — бензил, низший гидрокси-алкил, адамантил;

Х вЂ” ИОг, CN, отл и ча ю щи йс я тем,чтосоединение общей формулы R0 где R — низший алканоил;

Х вЂ” циано-, нитрогруппа;

V— - HaI, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы где R1 и Й имеют указанные значения, с последующим снятием 0-защиты гидролизом, 1729291

Составитель С.Полякова

Редактор О,Юрковецкая Техред М.Моргентал Корректор Л,Бескид

Заказ 1416 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101