Штамм стрептомицета sтrертомyсеs viridovulgaris - продуцент виридоцина

 

Использование: микробиологическая промышленность для получения штамма - продуцента антибиотического препарата, применяемого в сельском хозяйстве при лечении аскосфероза пчел. Культуру Strep.viridovulgaris BKM Ас-1294Д выращивают при 28°С в течение 5 сут на жидкой среде, содержащей, г/л: кукурузный экстракт 1,0, глюкозу 0,5, хлористый натрий 0,5, сернокислый аммоний 0,35, технический мел 0,5, крахмал 1,5. Виридоцин обеспечивает высокое фунгицидное действие в отношении Ascosphaera apis, превышающее аналогичное действие нистатина более чем в 2 раза. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 С 12 N 1/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛ6СТВУ (21) 4775807/13 (22) 29,12.89 (46) 23.06.92. Бюл. %23 (71) Институт микробиологии АН СССР и

Всесоюзный научно-исследовательский институт ветеринарной энтомологии и арахнологии (72) В.Д.Кузнецов, С,Н.Филиппова, В.В.Куз- . нецов, 3.Г,Карпов, В.А,Скосырских, В.И.Мгнатьев, В.Д.Бобов и T.Â.Õðàìîâà (53) 547.94 (088,8) (56) 1.. Полтев В.И. и Нешатаева Е,В. Болез.ни и вредители пчел. — M. Колос,.1984, 175 с;

2. Временное наставление по применению нистатина при аскоферозе пчел, — Госагропром СССР, 1986 r, Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к получению штамма — продуцента антибиотического препарата, предназначенного для использования в сельском хозяйстве при лечении аскосфероза пчел.

Известен антибиотик — нистатин, получаемый в результате жизнедеятельности стрептомицета Streptomyces rIoursei, который находит применение для лечения пчел от аскосфероза (1 и 23.

Однако возможность его применения ограничена ввиду того, что он является антибиотиком медицинского назначения, ис пользование которого в пчеловодстве крайне нежелательно. Кроме того, недостатком нистатина является его сравнительно низкая эффективность: применение нистатина для лечения аскосфероза обеспечивает Ы, 1742319 A l (54) ШТАММ СТРЕПТОМИЦЕТА STREPT0MYCES Ч! Я! 00 1/ОЕОАВЮ вЂ” ПРОДУЦЕНТ

ВИРИДОЦИНА (57) Использование: микробиологическая промышленность для получения штамма— продуцента антибиотического препарата, . применяемого в сельском хозяйстве при лечении аскосфероэа пчел. Культуру

Strep.vlridovulgaris В КМ Ас-1294Д выращивают при 28 С в течение 5 сут на жидкой среде, содержащей, г/л: кукурузный экстракт 1,0, глюкозу 0,5, хлористый натрий 0,5. сернокислый аммоний 0,35, технический мел 0,5; крахмал 1,5. Виридоцин обеспечивает высокое фунгицидное действие в отношении Ascosphaera apis, превышающее аналогичное действие нистатина более чем в 2 раза. 1 табл, оздоровление только 60 — 70% пчелосемей из числа подвергнутых обработке.

Цель изобретения —. получение нового штамма — продуцента антибиотического препарата виридоцина, обладающего высоким фун гицидн ым действием на

Ascosphaera apis — возбудителя аскосфероза пчел, не токсичного по отношению к теплокровным животным, медоносным пчелам и экологически чистого.

Для достижения цели предложен штамм Streptomyces viridovulgaris N ВКМ

Ас-1294Д, полученный путем селекции из; популяции исходной культуры актиномицета, выделенной из почвенного образца, Предлагаемый штамм образует вещество, обладающее фунгицидным действием в отношении Ascosphaera apis — возбудителя аскосфероза пчел. Виридоцином назван су1

1742319 хой остаток (после отгонки растворителя) хлороформенного экстракта лиофильно высушенной культуральной жидкости, полученной при выращивании S,vlridovulgarls

ВКМ Ас-1294Д при 28 С в течение 5 сут на 5 жидкой среде, содержащей, г/л: кукурузный экстракт 1,0, глюкозу 0,5, хлористый натрий

0,5, сернокислый аммоний 0,35, технический мел 0,5, крахмал 1,5. Виридоцин обеспечивает высокое фунгицидное действие в 10 отношении Ascosphaera apis, превышающее аналогичное действие нистатина более чем в 2 раза.

Полученный штамм Streptomyces

virldovulgaris 8KM Ас-1294Д имеет следую- 15 щие культурально-морфологические и физиолого-биохимические характеристики, Морфологические признаки:

Спороносцы прямые, длинные, расположены моноподиально. Споры овальные с 20 гладкой оболочкой, Культуральные признаки.

UàåT воздушного мицелия на средах:

СР1 с глюкозой, Гаузе 1 — беловатый, на срецах кукурузной N. 2, овсяной, картофель- 25 ном. агаре, сусло-агаре — желтовато-серый; цвет субстратного мицелия. на СР1 с глюкозой, Гауэе 1 — бледно-песочный, на кукурузной N.2,,овсяной от коричневого до темнокоричневого; на картофельном агаре — каш- 30 тановый; на сусло-агаре — желтовато-буроватый до темно-коричневого, растворимый пигмент на СР1 с глюкозой и Гаузе 1 — бледнопесочный; кукурузной 1Ф 2 — коричневый, овсяной — желтовато-бурый, на картофельном 35 агаре — бледно-малиновый, на сусло-arape растворимый пигмент не образуется, Физиолого-биохимические признаки;

Крахмал гидролизует,желатину разжижает, молоко пептонизирует. Потребляет: 40 глюкозу, врабинозу, сахароэу, галактозу, маннит, рамноэу; не усваивает раффинозу, иноэит. Мвланоидного пигмента не образует. Обладает антагонистическими свойствами по отношению к дрожжам, грибам, в том 45 числе и Ascosphaera apis, Штамм получают следующим образом.

В конические колбы емкостью 250 мл вносят по 50 мл посевной среды следующего состава, г/л: кукурузный экстракт 1,0, 50 глюкоза 0,05, хлористый натрий 0,5, сернокислый аммоний 0,35, технический мел 0,5, крахмал 1,5, вода водопроводная, рН 7,0.

После стерилизации среды при 0,8 атм в течение 30 мин производят засев ее агаровым блоком двухнедельной культуры

S.viridovuigaris. Колбы помещают на круговые качалки, скорость вращения которых

200 об/мин, и инкубируют 48 ч при 28 С.

Затем 50 мл выращенного вегетативного мицелия используют для инокуляции 500 мл ферментационной среды аналогичного состава.в 2-литровых колбах, которые помещают на круговые качалки (200 об/мин) и,. инкубируют в течение 5 сут при 28 С. Полученную культуральную жидкость высушивают в сублимационной камере, антибиотик экстрагируют хлороформом. После отгонки хлороформа антибиотическую активность препарата определяют методом диффузии в агар. На поверхность питательного агара в чашках Петри, содержащего суспензию спор тест-культуры А.api s, расставляют металлические цилиндры (с внешним диаметром 8 мм, внутренним — 6 мм и высотой 10 мм), в которые вносят в объеме 0,1 мл испытуемых растворов экстракта в концентрациях 1,0; 0,1 и 0,01%. Для сравнения в качестве положительного контроля используют нистатин (4000 ед/мг) в этих же концентрациях. После инкубации при 28- 30 С через 72—

96ч при наличии выраженного развития мицелия А.apis измеряют зоны задержки роста тест-культуры в опытных и контрольных чашках, Величина зон задержки роста представлена в таблице.

Предлагаемый .штамм Streptomyces

vlridovulgaris образует высокоэффективный антибиотический препарат "Виридоцин", который обладает фунгицидным действием в отношении Ascosphaera apis, превышающим действие нистатина более чем в 2 раза, Отсутствие токсического и инфекционного действия по отношению к теплокровным животным и медоносным пчелам позволит использовать виридоцин в условиях пчеловодческих хозяйств без специальных ограничений, Формула изобретения

Штамм стрептомицета Streptomyces

viridovulgaris ВКМ Ас-1294Д вЂ” продуцент виридоцина.