Штамм гриба fusarium solani (mart.) app. et wr., используемый в качестве тест-культуры для определения микологической стойкости алюминиевых сплавов

 

Использование: техническая микробиология, машиностроение. Сущность изобретения: предлагается использовать в качестве тест-культуры для определения микологической стойкости алюминиевых сплавов штамм гриба Fusarium solani (Mart. ) App. et Wr. BKMF-3185Д, выделенный из продуктов коррозии алюминиевого сплава. Штамм гриба Fusarium solani (Mart.) App. et Wr, BKMF-3185Д депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов ИБФМ АН СССР. 3 табл.

Изобретение относится к области технической микологии и представляет собой новый штамм микроскопического гриба, используемого для оценки грибостойкости алюминиевых сплавов типа АК-6, применяемых в тропическом климате, в лабораторных условиях. Известна группа микроскопических грибов Aspergillus niger van Tieghem, Aspergillus terreus Thom, Aureobasidium pullulans Arnaud, Paecilomyces varioti Bainier, Penicillium ochrochloron Biourge, Penicillium funiculosum Thom, Scopulariopsis Brevicaulis Bainier, Trichoderma virige Pers. ex Fr. используемых при лабораторных методах испытаний образцов, не имеющих деталей из дерева, бумаги и картона к воздействию микроцицетов. Недостатком этой группы микроорганизмов является патогенность некоторых штаммов, представляющих опасность для здоровья людей, а также незначительная активность к сплаву АК-6, применяемому в условиях тропиков. Известен штамм гриба Fusarium solani-68, предназначенный для получения ферментных препаратов, обладающих высокой леваназной активностью. Недостатком этого штамма является отсутствие его активности по отношению к алюминиевым сплавам. Он активно поражает злаковые. В качестве прототипа, наиболее близкого к предлагаемому штамму по назначению, является штамм Penicillium BKMF-3068Д, используемый в качестве тест-культуры для испытаний алюминиевых сплавов на грибостойкость. Недостаток этого штамма незначительно высокая активность по отношению к алюминиевым сплавам типа АК-6, предназначенным для использования в странах с тропическим климатом. Цель изобретения получение агрессивного изолята мицелиального гриба-деструктора алюминиевых сплавов типа АК-6, применяемых в условиях тропиков. Для получения штамма Fusarium solani (Mart.) App. et Wr. BKMF-3185Д была исследована микрофлора продуктов коррозии металлических образцов из алюминиевых сплавов как не защищенных, так и защищенных консервационными смазочными материалами, проходившими натурные испытания в течение 16 месяцев в тропических условиях Республики Куба. Из различных образцов алюминиевых сплавов, прокорродировавших в результате натурных испытаний в тропическом климате, были выделены различные микромицеты. Наиболее часто в продуктах коррозии алюминиевых сплавов различных марок встречался мицелиальный гриб Fusarium solani (Mart.) App. et Wr. Из 200 образцов алюминиевых сплавов указанный гриб был обнаружен в продуктах коррозии 160 образцов, преимущественно проходивших испытания на сельской станции Республики Куба. Наиболее жизнеспособным и агрессивным по отношению к сплаву АК-6 оказался предлагаемый штамм Fusarium solani (Mart.) App. et Wr. N 1. Этот штамм депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов ИБФМ АH СССР под номером ВКМF-3185Д. Культурально-морфологические особенности штамма. Штамм гриба через 7 сут роста на среде Чапека имеет диаметр колонии 4 см. Колонии пушистые, белого цвета. Обратная сторона колоний желтоватая с зеленой зоной. Макроконидии веретеновидные, некоторые слегка согнутые. Ширина макроконидий 5-6 мкм, длина 20-25 мкм. Макроконидии с 3-5 перегородками. Микроконидии продолговатые, цилиндрические, которые преобладают по сравнению с макроконидиями. Хламидоспоры интеркалярные, апикальные (верхушечные). Штамм хорошо растет на среде сусло-агар, на среде БСА (сусло-агар и МПБ в соотношении 1:1). Физиолого-биохимические свойства. Температурный оптимум роста 25-30^оС, минимум 10^оС, максимум 45^оС. Штамм способен расти на консервационных смазочных материалах, вызывать продуктами метаболизма коррозию алюминиевых сплавов и значительно сплава АК-6. В сообществе с бактериями рода Bacillus штамм способен вызывать коррозию алюминиевых сплавов. Штамм хорошо растет на среде сусло-агар, БСА, на среде Чапека, в минеральных маслах при диапазоне рН от 4 до 11. На различных консервационных материалах в тропических условиях Республики Куба Fusarium solani (Mart. ) App. et Wr. чаще всего развивается с грибами Fusarium sambucinum, Drechslera roctrata и бактериями Micrococcus roseus, Bacillus stearother- mophilus. Отношение к источникам углерода: хорошо усваивает минеральное масло, немного хуже глюкозу, маннит, сорбит; совсем плохо сахарозу, глицерин, крахмал; совсем не усваивает целлюлозу. Отношение к источникам азота: хорошо усваивает азотнокислый натрий и не усваивает DL-лейцин, L-аспарагин, DL-аспарагиновую кислоту, DL-α-аланин, L-глутамин, L-глутаминовую кислоту, мочевину, азотнокислый аммоний, сернокислый аммоний. Антагонические свойства по отношению к другим культурам, выделенным в тех же условиях, отсутствуют. Хранить штамм можно в лиофильновысушенном состоянии в стерильных ампулах. Непродолжительное время можно хранить в холодильнике в пробирках на скошенной агаризованной питательной среде Чапека или сусло-агар. Штамм хорошо хранится и сохраняет свою первоначальную активность в пробирках с минеральной средой (состав в г/л: КН₂РО₄ 1,0; MgSO₄ 0,5; NaNO₃ 3,0; KCl 2,0; вода водопроводная остальное) с минеральным маслом МК-8 в соотношении минеральная среда масло 3:2. Предлагаемый штамм не патогенен. Примеры конкретного использования предлагаемого штамма. П р и м е р 1. Выделение штамма. С пораженных коррозией металлических образцов сплава АК-6, экспонировавшегося в натурных условиях Республики Куба, соскабливали стерильным шпателем 0,1 г рыхлых гелеобразных продуктов коррозии сплава, переносили с соблюдением стерильности в ступку, затем измельчали и переносили в чашку Петри с застывшей средой сусло-агар. Помещенные на поверхность питательной среды продукты коррозии алюминиевого сплава тщательно растирали стерильным шпателем по всей поверхности среды сначала в первой чашке, а затем этим же шпателем протирали поверхность среды последовательно во 2-й, 3-й, 4-й, 5-й чашках. Чашки закрывали крышками и инкубировали в термостате при температуре 30^оС в течение 10-14 сут. По истечении инкубирования в первой чашке наблюдался рост смеси различных микроорганизмов, а в последней, преимущественно, уже изолированные колонии Fusarium solani (Mart.) App. et Wr. из которых небольшое количество спор перевивочной иглой переносили в чашки Петри с застывшей средой сусло-агар и также инкубировали при температуре 30^о в течение 10-14 сут. Чистую культуру гриба проверяли на чистоту, переносили в пробирки на скошенную питательную среду сусло-агар, инкубировали, а затем хранили в холодильнике. Полученную чистую культуру гриба Fusarium solani (Mart.) App. et Wr. применяли для испытания сплава АК-6 на грибостойкость. П р и м е р 2. Испытание алюминиевого сплава АК-6 на грибостойкость. Для испытания сплава АК-6 на грибостойкость нарезали из прутка алюминиевого сплава АК-6 образцы диаметром 50 мм и толщиной 4 мм, затем по диаметру каждый образец разрезали на 4 равные секторные части. Торцы образцов зачищали от заусенцев наждачной бумагой. Подготовленные таким образом образцы обезжиривали венской известью с помощью щеточки, промывали водопроводной водой, промокали фильтровальной бумагой и высушивали в сушильном шкафу при 80^оС в течение 15 мин. Высушенные образцы взвешивали на весах Sartorius, заворачивали в Крафт-бумагу и стерилизовали в сушильном шкафу HS61A при температуре 165^оС в течение 2 ч. Охлажденные простерилизованные образцы из сплава АК-6 подвергали испытаниям на грибостойкость по отношению к выделенному по примеру 1 штамму Fusarium solani (Mart.) App. et Wr. BKMF-3185Д. Исследование сплава АК-6 на грибостойкость осуществляли контактным методом, сущность которого заключается в выдерживании образцов из алюминиевого сплава АК-6 на поверхности газона гриба Fusarium solani (Mart.) App. et Wr. BKMF-3185Д, выросшего на агаризованной питательной среде сусло-агар в чашках Петри. На поверхность питательной среды сусло-агар в чашках Петри помещали одну бактериологическую петлю спор гриба Fusarium solani (Mart.) App. et Wr. BKMF-3185Д и растирали равномерно шпателем по всей поверхности питательной среды. Затем чашки Петри ставили в термостат при температуре 30^оС. После термостатирования, когда на поверхности среды наблюдался сплошной рост гриба, на его поверхность стерильным пинцетом размещали простерилизованные образцы из сплава АК-6. Количество испытанных образцов должно быть не менее 5 штук. Контролем служили те же образцы, но помещенные на поверхность стерильной питательной среды, не засеянной тест-культурой. Подготовленные к испытаниям чашки Петри с металлическими образцами помещали в эксикатор, на дно которого наливали стерильную дистиллированную воду, за счет чего в эксикаторе поддерживали влажность 96-98% Эксикаторы располагали в термостатной комнате при температуре 30^оС. Продолжительность экспозиции опытных и контрольных образцов 9 месяцев. Аналогичные испытания проводили со штаммом гриба Penicillium chrysogenum BKMF-3068Д, который использовали в качестве прототипа. После окончания испытаний чашки Петри с металлическими образцами подвергали стерилизации в автоклаве ВК-75 при давлении 2 атм и температуре 120^оС 2 ч. После убивки (стерилизации) образцы из сплава АК-6 очищали от мицелия, питательной среды и продуктов коррозии с помощью скальпеля. Окончательно продукты коррозии алюминиевого сплава АК-6 удаляли в растворе состава: Окись хрома (VI) 20 г/дм³ Кислота орто-фос- форная (пл. 1,59) 50 см³/дм³ Температура 80-95^оС Образцы пинцетом в вертикальном положении опускали в стакан с горячим раствором, выдерживали 1 мин, затем вынимали из раствора, промывали в воде, просушивали и взвешивали. Потерю массы образцов определяли по формуле K · 100% где Δm потеря массы испытуемого образца, г; Δm m_o m, где m_o масса образца до испытаний, г; m масса образца после испытаний и удаления продуктов коррозии, г. Площадь коррозионных поражений определяли наложением на оцениваемую поверхность металлического образца пластины из прозрачного материала с нанесенной на нее сеткой. По результатам измерения площади коррозионных очагов (количество клеток на пластине) вычисляли процент коррозионного поражения образцов из сплава АК-6 по формуле δ_i= · 100% где S₁ площадь коррозионного очага на лицевой стороне образца клетки; S₂ площадь коррозионного очага на оборотной стороне образца клетки; S_оцен площадь оцениваемой поверхности всего образца, клетки. Грибостойкость сплава АК-6 обратно пропорциональна площади пораженной поверхности образцов. Глубину коррозионных поражений сплава АК-6 измеряли с помощью микроскопа. Результаты сравнительных испытаний на грибостойкость образцов из алюминиевого сплава АК-6 с использованием в качестве тест-культуры штаммов Fusarium solani (Mary. ) App. et Wr. BKMF-3185Д и Penicillium chrysogenum Thom BKMF-3068Д представлены в табл.1-3. Из представленных результатов видно, что предлагаемый штамм гриба более чем в 2 раза увеличивает площадь пораженной поверхности образцов из сплава АК-6 после 9 месяцев испытаний по сравнению с прототипом (табл.1), более чем в 3,5 раза увеличивает потерю массы металла по сравнению со штаммом-прототипом (табл.2) и способствует более чем в 3 раза увеличению глубины коррозионных язв (табл.3) по сравнению со штаммом-прототипом. Следовательно, предлагаемый штамм Fusarium solani (Mart.) App. et Wr. BKMF-3185Д при использовании его в качестве тест-культуры для оценки микологической стойкости сплава АК-6 повышает достоверность испытаний этого сплава, применяемого в условиях тропиков, на грибостойкость по сравнению с известным штаммом Penicillium chrysogenum BKMF-3068Д. Это свидетельствует о возможности его применения для испытания устойчивости сплава АК-6, направляемого в конструкциях различных изделий для эксплуатации в условиях тропиков.

Формула изобретения

Штамм гриба Fusarium solani (mart.) App. et. wr. BKMF-3185Д, используемый в качестве тест-культуры для определения микологической стойкости алюминиевых сплавов.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Номер и год публикации бюллетеня: 11-2002

Извещение опубликовано: 20.04.2002        

---