Способ получения вещества, обладающего утеротоническим действием

 

Изобретение касается простагландинсодержащих вещее гв, в частности вещества на основе 3-цис-9-оксо13-транс-15-о:-окси- 17 (2-фурил)-18,19,20-тринор-а -гомопростеновой кислоты, обработанной сапониномо мыльного корня Acanthophyilum Gypsophiloides Rgl, обладающей утеротонической активностью. Цель - повышение активности и устойчивости вещества. Синтез ведут обработкой раствора простагландина в этаноле раствором сапонина мыльного корня Acanthophylium Gypsophiloides Rgl в диметилсульфока.де при массовом соотношении 4:1, перемешивании при комнатной температуре. Соединение проявляет изотопный эффект в 1.5-2 раза выше, чем указанная кислота при эффективной дозе 23 мг/кг, что в 2 раза ниже, чем у кислоты. 2 табл. XI О 00 О1 ю ю

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

K АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4788533/04 (22) 05,02.90 (46) 15.10.92, Бюл, № 38 (71) Институт химии Башкирского научного центра Уральского отделения АН СССР (72) Г,А,Толстиков, Л.А.Балтина, Ю,И,Муринов, M.Þ.Ñaèòîâà, Ж.М.Путиева, Н.К,Абубакиров, М.Э,Адлер и Ф.С,Зарудий (56) Roberts S.M., Scheinman F, Chemistry, Biochemistry алб Pharmacoiogical Activity of

Prostanoids. New York, Permagon Press, 1979.

Атжихин И,С, Простагландины. M.: Медицина, 1978, 415 с.

$гамау C„Nova R,t, Syrithesls of

Prostag tandins. Bydapest. Akademta Kiado, 1978.

Вепдег M„Komijama. Cyclodextrin

Chemistró. Speinger — Verlag Berlin, Heidelberg, New York, 1978, Szejtei J, Cyclodextrin and their Inclusion

Comptexes. Akademia Ktado, Budapest, 1982.

Inclusion Compounds. V. 3. Phystcal

Properties and ApptIpatIons, Ed, Atwood ЗЛ., Davis J.Е.0., MacNicol 0.0. Academic Press, London, Orlando, New York, 1984, Путиева Ж.M„Мжельская Л.Г., Кондратенко Е.С. Абубакиров Н.К. Тритерпеновые гликозиды Acanthophylium Gypsophiiodies.—

Хим. Прир. соед, 1970, N 4, с. 486-487,.

Путиева Ж.М., Мжельская Л.Г., Горобиц

Т.Т., Кондратенко E.Ñ. Тритерпеновые гликозиды Acanthophyllum gypsophitoides. И1, Строение О-гликозидной углеводной цепи акантофиллозидов В и С. — Хим. прир. саед.

1975, К- 2, с, 177-183, Путиева Ж,М„Мжельская Л,Г„Горобиц

Т,Т., Кондратенко E.Ñ., Абубакиров Н.К.

Тритерпеновые гликозиды Acanthophyttum

Gypsophllotdes. IV, Строение акантофилло Ы 1768592 Al (st)s С 07 С 405/00, С 07 J 71/00 зидов В и С.— Хим, прир, саед. 1975, N. 6, с, 728-734, Путиева Ж.М., Мжельская Л.Г„ Горобиц

Т.Т., Кондратенко Е.С.; Абубакиров Н,К, Тритерпеновые гликозиды Acanthophyltum

Gypsophitoides V. Д вЂ” хиновоза в акантофиллозидах В и С, — хим. прир. соед, 1977, ¹ 6, с.

806-809.

Путиева Ж.М., ГоробицТ.Т., Кондратенко Е,С., Абубакиров Н,К. Тритерпеновые гликозиды Acanthophyltum Gypsophttoides, И. Строе ние а ка нтофиллозида Д.— Х им. прир. соед., 1979, ¹ 22, с. 176 — 180.

Авторское свидетельство СССР № 1702642, кл. С 07 С 405/00, 1989. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО УТЕРОТОНИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ (57) Изобретение касается простагландинсодержащих вещес гв, в частности вещества на основе 3-цис-9-оксо13-транс-15-а -окси17 (2-фурил)-18,19,20-тринор-а -гомопростеновой кислоты, обработанной сапониномо ф . мыльного корня Acanthophyllum

Gypsophitoides Rgl, обладающей утеротонической активностью. Цель — повышение активности и устойчивости вещества, Синтез 4 ведут обработкой раствора простагландина в (Ь этаноле раствором сапонина мыльного корня QQ

Acanthophytlum Gypsophtloldes Rgl âдиметил- { Я сульфоксиде при массовом соотношении 4:1, перемешивании при комнатной температуре.

Соединение проявляет изотопный эффект в

1,5-2 раза выше, чем укаэанная кислота при эффективной дозе 23 мг/кг, что в 2 раза ниже, 4 чем у кислоты. 2 табл, аваева

Мзабрете!!ие относится к области органической химии, в частности к способу получения вещества, облада!ощего уретротонической активностью на принтере синтетического аналога

11-дезакси-П ГЕ 3-цит-9-оксо-13-тра!ьс-15а- окси-17(2-фурил)- 10,19,20- ри! ар-П! Е,, Основным недостатком прастагла!!Ди новых препаратов являет.я быстрый метаболизм B жйвьЫтканях, что ограничивает их применение в медицине.

С Целью повышения устой-!ивасти простагла>!дийдвых препаратов их модифициру!от, получая различные синтетические

-аналоги или применяют в виде более устойчивых лекарственных форм, в часг! !оспл, комплексов включения с цикладекстрпнами (цд).

Применение синтетических модифицированных аналогов ограничивается их высокой токсичностью и нерастворимостыо в водных средах, а также малой стабильна стью.

Ограничения второго пути использования простагландинов в медицине путем клатратоабразования с цикладекстринами связаны с высокой токсичностью последних, вследствие чего возможно только оральнае, ректальное и наружное применение комплексов вкл!очения ЦД, Комплексообразавание с ЦД не приводит к повышени.о биологической активности простагландинов, способ не дает возможность сйизить эфс1>ектив!!у!о дозу простагландиновых препаратов, Целью изот!. етеиия 51вляется изыска ние !1авого способа повышения устойчивости простагландиновь!х препаратов с одновременным повышением утератонической активности и снижением эффективной дозы, . Цель даст!лгается тем, что аналог простаглай ина в растворе этанола обрабатывают сапонином мыльного корня (Acanthophyllum

gypsophiloides Rg1 — (акантофиллозид) в диметилсульфоксиде при массовом соотношении

1;4 и комнатной температуре.

Сущность способа заключается в том, что лспользуемый аналог ПГ, 3-цис-9-оксо-13транс-15 -а-окси-17(2-фурил)-18,19,20-тринор-ПГЕ1 в растворе этанала обрабатывают сапонином из мыльного корня, растворенным в диметилсульфоксиде, при весовом соотношении реагентов1:4 при комнатной температуре, получая нову!о лекарственну!а форму ПГ в виде комплексных соединений с акантофиллазидам.

Для достижения рабочей концентрации

ПГ смесь разбавляется фосфатным буферам.

Получение сапонина (акантофиллозида) из мь!льного корня (Acanthophylium

gypsophiloides Rgl,).

1,0 кг воздушно-сухих измельченных

5 корней заливают 3,5 л метанола и экстрагируют 2 часа при 70 С. Делают 10 сливов.

Сапонин, выпавший из экстракта при остывании, отделяют фильтрованием на воронке

Бюхнера или Шотта, маточник убирают, а

10 осадок промывают ацетоном (100 мл х 2) и высушивают при комнатной температуре, . заточник концентрируют на роторном испарителе при 40 С до 1/2 объема, выпавший осадок обрабатывают аналогично.

15 Вторичный маточник снова упаривают в тех же условиях до 1/2-1/3 объема и повторяют операци!о обработки осадка, Биологические испытания ПГ в виде комплексов с сапонинам из мыль!!ого корня

20 бь!ли проведены в лаборатории новых лекарственных средств Института химии БНЦ

УрО АН СССР. Обнаружен эффект йавышения утеротропной акт!лвности !!сходного ПГ при испальзовани!л его в виде новой лекар25 ственной формы с сапонином из мыльного кор" O

С02Н

ОН (1)

Утеротоническую активность i!i (l) в виде новой лекарственной формы изучали по методу Var>!yea (in vitro) на изолированной

35 матке крыс и морских свинок в концентрации 1.10 г/мл, а также методом In situ на наркотизированных-беременных и небеременных морских свинках при внутривенном введении в дозах 10, 50 и 100 мкг/кг. Об

40 утеротонической активности судили па из-!.ленению амплитуды и тонуса маточных сокращений в процентах к исходной амплитуде, В качестве референс-препаратов ис45 пользовали синтетический ПГ (i) в фосфатном буфере (Na — соль) и известный утерастимулирующий препарат — и ростенон (ПГЕ2, Таллинн), применяемый в акушерско-гинекологической практике для

50 родостимулирования, а также комплекс ПГ (l) с Р -глицирризиновой кислотой, Острую токсичность определяли по Литчфильду и Уилкоксону на белых беспородных мышах при внутривенном введении.

55 В результате изучения утеротанической активности ПГ (l) в комплексе с сапонином и ПГ в буфере методами in vitro v in situ было выявлено, что сапонин повышает утеростимулирующий эффект простагландина, Так, в опытах на изолированной матке крыс и мор1768592 ских свинок ПГ (I) в буфере увеличивает амплитуду сокращений на 76,8-.85%, а в комплексе с сапонином тот же ПГ вызывает инотропный эффект на 128 — 150%, т.е. сапонин увеличивает инотропный эффект ПГ(!) в

1,5-2 раза. Простенон в том же разведении повышает СДМ крыс и морских свинок на

55,8-83,8% соответственно (табл. 1).

Как видно из данных табл. 1, синтетический простагландин (I) в виде комплекса с сапонином из мыльного корня обладает более выраженной утеротропной активностью (изменение амплитуды и тОнуса матки) ln

vitro как на крысах, так и на морских свинках при равной концентрации (1x10 г/мл). Ток-7 сичность комплексов одинакова.

В опытах in situ при внутривенном введении наркотизированным небеременным морским свинкам в дозах 10, 50 и 100 мкг/кг

ПГ в буфере увеличивал амплитуду маточных сокращений на 50-65% в дозах 50 и 100 мкг/кг, а в комплексе с сапонинЬм ПГ про,являл утеротропный эффект вдозе 10мкг/кг — на 20,0 «+ 1,9%, в дозах 50 и 100 мкг/кг— на 100% и 120% соответственно; Простенон вызывал инотропный эффект в дозах 50 и

100 мкг/кг на 63,5 — 70,8% (табл. 2). ЕД5п ПГ в буфере составила 50 (60-41,8) мгlкг, ЕД5в комплекса ПГ с сапонином — 23 (27,6-19,9) мг/кг.

В опытах in situ на беременных морских свинках ПГ в буфере увеличивал амплитуду маточных сокращений на 75-85%, а в комплексе с сапонином —. на 105 — 285 . Простенон вызывал инотропный эффект в тех же дозах 50 и 100 мкг/кг на 89,0 — 105,0%, соответственно.

Токсичность ПГ (I) не меняется при. использовании его в виде новой лекарственной формы — комплекса с сапонином из мыльного корня, LDsp ПГ (1) в буфере и в комплексе с сапонином составила 240 (264—

218) мг/кг, LDsp и ростенона 40 (36.7-44,0) мг/кг, ПГ в виде комплекса с сапонином обладает в 2-3 раза более высокой утеротонической активностью, чем известный утеростимулирующий препарат простенон (ПГЕ2) (табл, 1 и 2).

Таким образом, комплексообразование с акантофиллозидом (сапонином из корней

AcanthophyIIurn gyp.) позволяет, не изменяя токсичности, повысить инотропный эффект простагландина в опытах in vitro в 1,5-2,0 раза, а опытах in situ — в 2-4 раза, а также снизить эффективную дозу (Egsp) ПГ в сравнении с ПГ в буфере в 2 раза.

Одновременно повышается устойчивость простагландина, поскольку раствор

ПГ в присутствии сапонина можно хранить

6 при комнатной температуре продолжительное время без потери активности (6 мес.).

Сущность изобретения демонстрируется следующими примерами.

5 . Пример 1. Получение простагландина (i) с сапонином из мыльного корня.

К раствору 10 мг простагландина в 10 мл этанола добавляют раствор 10 — 40 мг сапонина (акантофиллозида) из мыльного корня

10 (Acanthophyllurn gypsophlloides) в 40 мл перегнанного диметилсульфоксида и смесь перемешивали 1 час, Полученный раствор комплексов ПГ разбавляли фосфатным буфером до необходимой концентрации ПГ, 15 Для приготовления фосфатного буфера растворяют 8 г NaCI. 800 мг NaHzP04.Н20, 12 r NazHPO4,7Hz0 в 1 л бидистиллята.

Пример 2.. Методика исследования утеротонической активности веществ мето20 дом in vitro.

Утеротоническую активность синтетичепсг го аналога 11-дезокси-П Г Е1 3-цис-9-оксо-13транс-15 -а-окси-17(2-фурил)-18,19,20-тринор-а-простеновой кислоты (!) в буфере и в комплек-

25 се с сапонином изучали в оптимальном разведении 1-10 г/мл на изолированном по Магнусу отрезке рога матки небеременных крыс и морских свинок, Рог матки помещали в аэрируемый термостатируемый раствор Рингер-Локка (со30 став: NaC1 — 9 г, KCI — 400 мг, CaCIz — 240 мг, йаНСОз — 150 мг, глюкоза — 1 г, дистиллированная вода — до 1 л; t=37 С). Об утеротонической активности судили по проценту изменения тонуса (тонотропный эффект) и амплитуды (инотроп35 ный аффект) маточного сокращения.

Эффективность аналога ПГ в буфере и в комплексе с сапонином сравнивали с утеротропным эффек ом простенона (ПГЕ2

Таллинн), применяемого в акушерско-гине40 кологической практике в качестве средства, для родостимуляции.

В результате изучения утеротонической активности ПГ в комплексе с сапонином и

ПГ в буфере методом in vitro было выявлено, 45 что сапонин йовышает утеростимулирующий эффект ПГ. Так ПГ в буфере увеличивает амплитуду сокращений матки крыс и морских свинок на 76,8-85,0%, а тонус — на

35,9-50,0%, соответственно. Аналогичный

50 утеротропный эффект вызывает простенон, увеличивая амплитуду сокращений матки крыс и морских свинок на 55,8-.83,8%, соот-. ветственно. Синтетический аналог 11-дезокси- ПГЕ1 в комплексе с 6апонином вызывал инотропный эффект на 128-150%, 55 т.е. в 1,5-2. раза больший (табл. 1).

П ри м е р 3. Методика изучения утеротонической активности препаратов in situ.

1768592

Та бл и цэ 1

Влияние препаратов на СЦМ небеременных крыс и морских свинок,в концентрации 1 10 г/мл .

4 утеротроплую активность синтетического аналога 11-дезокси-ПГЕ (I) в буфере и в комплексе с сапанином изучали методом

In situ на бара; енных и небеременных морbKHx свинках, Y лабораторных животных, находящихся под ypÎTÇÐÎÂûì наркозом (1 г/кг, внутрибрюшинно),. Послойно OCKpb183ли брюшную полость, выводили петлю рога

Матки в стаканчик с нагретым физиологиче=, ским раствором (0,9 > р-р NaCI, т,=-37"С) и фиксйровали лигатурой к подвижной системе датчика механотрона 6Мх1С. Выходной . сигнал механотрона подавали нэ вход усилителя ВЗВС вЂ” 4M, выход усилителя соеди и со ходом осциллограФа С1-В8, регистрацию сократительнои деятельности матки осуществляли с помощью потенциометра КСП-4. Об утеротонической активности ПГ в буфере и в комплексе с сэпонином судили по увеличению амплитуды и тонуса сокращений матки в j к исходной амплитуде. Эффективность ПГ в комплексе с сэпонином сравнивали с утеротропной активностью простенона. Препараты вводили внутривенно в дозах 10, 50 и 100 мкг/кг, Ь опытах in situ на небеременных морских свинках синтетический аналог ПГ (I) в буфе*ре увеличивал амплитуду маточных сокращений на 50-G5% в дозах 50 и 100 мкг/кг (табл. 2), в комплексе с сапонином ПГ (I) проявил утеротонические свойства и в дозе

100 мкг/кг — на 20,0 + 1,9%, а в дозах 50 и

100 мкг/кг — на 100 и 120 /, соответствен io, ЕД о ПГ в буфере составила 50(60-41 8) мг/кг, ЕД5о ПГ в комплексе с сапонином23 (27,6 — 19,9) мг/кг.

В опытах in situ на беременных Йорских свинках ПГ(I) в буфере увеличивал амплитуду сокращений матки на 75 — 85, а в комплексе с сапонином — на 105 — 285%. Простенон в тех же дозах 50 и 100 мкг/кг вызывал инотропный эффект на 89,0-105 соответственно, Следовательйо, комплексообраэо5 вание ПГ (!) с акантофиллозидьм — сапонином из мыльного корня увеличйвает утеротропнйй эффект ПГ на небеременных животных в 1,5-2 раза, на беременййх"- в

3-4 раза.

10 Пример 4, Методика определения острой токсичности, Острую токсичность препаратов определяли на беспородных белых мйшах весом

15- 18 r при внутрйвеннбм введений. Пафа15 метры токсичности оценивали по Литчфиль. ду и УилкокСону. ЛДва П Г в" буфере составила 240(264-218) мкг/кг. Токсичность

ПГ (I) в комплексе с сапонином была аналогична ЛД5о ПГ в буфере. ЛД5о простенона

20 составила 40 (36,7-44,0) мг/кг.

Формула изобретения

Способ получения вещества, обладающего утеротоническим действием"путем об25 работки аналога: простагландина

3-цис-9-оксо-13-транс-15 -й-окси-17(2- фурил)-18,19,20-тринор- -a -гомопростеновой кислоты химич"еск им реагенто"м ;"а т л и Ч э.ю шийся тем, чть, c цель|о повышенйя

30 устойчивости вещества "и актйвнбсти Йри сни кении эффективно дозы аналог простагландина обрабатывают""сэпонином мыльного корня AcantIIojihyllum

GypsophiIoldes RgI при маСсовой соотнойе35 нии 4 1, причем раСтвор сапгонина в" диметил сул ьфоксиде доба ел я ют" к раствору аналога простаглэндина в этаноле и г1еремешивают при комнатной температуре."

1768592

Продолжение табл.1

Твблица2

Влияние на СДМ беременных и небеременных морских свинок Insltu при внутренном введении

* достоверность различии при р < 0,05;

*+ достоверность различий при р < 0,002;

***достоверность различий при р < 0,001.

Составитель T.Òoëñòèêîâ

Техред М.Моргентал Корректор И Шмакова

Редактор

Заказ 3620 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101