Способ выявления grероnема раlliduм

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике сифилиса. Цель изобретения - повышение точности способа: Для выявления возбудителя сифилиса исследуемый материал помещают в камеру, выполненную из полиакриламиднсго геля и обеспечивающую анаэробные условия, в которую затем вводят питательную среду, содержащую в равных объемных соотношениях плазмол и 1-2%-ный раствор биологически активного концентрата сыворотки молока, полученного путем ферментативного гидролиза молочной сыворотки смесью микроорганизмов Streptococcus lactis 121/4, Streptococcus cremorls 244 хб/1, Lactobacterlum casei 18, Acetobacter aceti РД-10, Lactobacterium bulgaricum в пропорциях 1:1:2:2:1. Камеры инкубируют в течение 48 часов при 37°С с постоянным микроскопическим контролем посевом. Способ позволяет выявлять возбудитель в тех случаях, когда серологический и микроскопический методы исследования не эффективны .

союз советских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (s1)s С 12 Q 1/04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4338724/13 (22) 16.12.87 (46) 15.10.92. Бюл. М 38 (71) Киевский медицинский институт им. акад. А. А, Богомольца (72) В. Г. Коляденко, В. И. Степаненко, В. Н.

Беднова, В. Ф. Майдайюк, В. П. Широбоков, В. В. Гашинский, В. Г: Войцеховский, Н. Н, .

Марченко и Н, Н. Романская (56) Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования под ред. М. О. Биргера, М., 1982, стр. 299304. (54)СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ТЙЕРОМЕМА

РАШ00М (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике сифилиса. Цель изобретения — повышение точности способа: Для выявления возбудителя сифилиса

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике сифилиса.

Цель изобретения — повышение точности способа, Способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Больной К, поступил в стационар с подозрением на сифилис. В стационаре больной всесторонне обследован: общий анализ крови и мочи беэ патологии, серологические реакции (реакция Вассермана, РИФ, РИБТ) отрицательные. Общепринятые, ежедневные исследования (в течение 6 дней) тканевой жидкости из эрозии на половом члене на бледную трепонему в тем но полевом микроскопе не исследуемый материал помещают в камеру, выполненную из полиакриламидного геля и обеспечивающую анаэробные условия, в которую затем вводят питательную среду, содержащую в равных обьемных соотношениях плазмол и 1 2%-ный раствор биологически активного концентрата сыворотки молока, полученного путем ферментативного гидролиза молочной сыворотки смесью микроорганизмов Streptococcus

lactls l21/4, Streptococcus cremorls 244 хб/1, Lactobacterlum easel 18, Acetobacter

aceti РД- f0, 1 астоЬас1егй«т«bulgarlcum в пропорциях 1;1:2:2:1. Камеры инкубируют в течение 48 часов при 37 С с постоянным микроскопическим контролем посевом.

Способ позволяет выявлять возбудитель в тех случаях, когда серологический и микроскопический методы исследования не эффективны. ай пОзволили обнаружить возбудителя сифилиса. Исследования пчнктата увеличенного пахового лимфоузла также не позволили обнаружить бледные трепоне«лы. На 7-й день Ю обследования у больного параллельно с ис- О следованием тканевой жидкости из эрозии фь. под микроскопом в темном поле зрения а проведена инокуляция исследуемого материала в углубление камеры из полиакриламидного геля

° и

Для изготовления микрокамер используют предметные и покровные стекла, гелевые блоки и герметизирующая замазка. С этой целью на предметное стекло кладут заранее приготовленный гелевый блок размером 5х5 — 10х10 мм с углублением 2х2—

6х6 мм. В углубление гелевого блока микро1768641 пипеткой вносят материалы для исследования на бледные трепонемы и накрывают блок покровным стеклом, Покровное стекло скрепляют с предметным стеклом герметизирующей замазкой, оставляя лишь небольшое отверстие (.; 3-4 мм) для заполнения камеры питательной средой. Затем в камеру микропипеткой вводят жидкую питательную среду, в состав которой входит смесь. в объемном соотношении 1:1 плазмола и 1%ный раствор биологически активного концентрата сыворотки молока, полученного путем ферментативного гидролиэа молочной сыворотки смесью микроорганизмов

Streptococcus lactls 121/4, Streptococcus

cremorls 244 х б/1, Lactobacterlum easel 18, Acetobacter acetl РД-10, Lactobacterlum

buIgarIcum в пропорции 1;1:2,2. 1, после чего закрывают герметизирующей замазкой отверстие, через которое вводится питательная среда. Таким образом в камере создаются анаэробные условия. Камеру помещают в термостат при температуре +35 — 37 С и периодически проводят диагностический контроль в течение 48 часов содержимого микрокамеры под микроскопом в темном поле зрения или в фаэовоконтрастном микроскопе на наличие возбудителя сифилиса. Для удобства наблюдения камеру можно помещать в термостатный столик, который устанавливают на креплении предметного столика микроскопа. Диагностическое бактериоскопическое исследование посева микрокамер необходимо проводить периодически в течение двух дней, т,к, тканевые бледные трепонемы делятся через каждые 30-33 часа, Вместе с тем необходимо проводить тщательное бактериоскопическое исследование содержимого микрокамер и в первые часы после посева, поскольку труднодиагностируемые формы устойчивого выживания трепонем-а-формы, цисты — в созданных благоприятных условиях могут реверсировать в обычные спиралевидные формы, которые возможно обнаружить при микроскопическом исследовании в темном поле, Через 36 часов от момента посева исследуемого материала при микроскопии выявлены обычные спиралевидные бледные трепонемы с характерными для них видами движений, равномерными завитками и другими морфологическими свойствами, характерными для бледных трепонем. Больному поставлен диагноз; сифилис 1 серонегативный и назначено специфическое лечение.

П р и м в р 2, Больной А. обратился к врачу по повому эрозии на половом члене.

Диагноз — эрозивный баланопостит. Стандартные серологические реакции на сифи10 вания и помещением микрокамер в термо15 стат при +37 C. Проведенный микроскопический диагностический конт30

55 лис на момент обследования отрицательные. В отделяемом из эрозии и пунктатв лимфоузла при обычной темнополевой микроскопии бледные трепонемы не обнаружены в течение 3-х дней исследования, Начиная с 4-ro дня обследования больному параллельно с общепринятым методом исследования проведена инокуляция исследувмого материала из эрозии в микрокамеру, заполненную питательной средой в соответствии с примером 1, но с использованием 2%-ro гидролизата с последующим созданием анаэробных условий инкубирорОль позволил через 6 ч после проведенного посева обнаружить в посевном материале типичные бледные трепонемы с характерными для них морфологическими свойствами и поставить больному диагноз:

Сифилис 1 серонегативный и назначить специфическое лечение.

Таким образом, использование способа позволяет повысить способ диагностики сифилиса в тех случаях, когда бактериоскопический и серологический методы дают отрицательные результаты.

Данный способ может также использоваться для исследования цикла развития бледных трепонем, стадийности образования их форм, условий, при которых они возникают, и изучения действия антибиотикотерапии в системе In vlvo, Пример 3. B отмытые в физиологическом растворе камеры, размером 1 см х 1 см х 0,3 см из полиакриламидного геля через шприц или пастеровской пипеткой вводят в имеющиеся одну или более полостей путем прокола исследуемый материал, содержащий бледные трепонемы. Затем камеры имплантируют внутрибрюшинно лабораторным животным (кроликам, белым мишам), а через определенное время извлекают иэ организма и подвергают микроскопированию. При необходимости из полостей камеры пастеровской пипеткой можно извлекать пробы для микроскопии под покровным стеклом или других целей, а камеру повторно имплантировать s органиэм лабораторного животного.

Формула изобретения

Способ выявления Treponema раИЫца в исследуемом клиническом материале, о т личающийся тем,что,сцельюповышения точности способа, исследуемый материал инокулируют в жидкую питательную среду, содержащую в равных обьемных соотношениях плазмол и 1-2%-ный раствор биологически активного концентрата сыво1768641

Составитель Г. Смирнова

Редактор В. Трубченко Техред M,Moðråíòàï Корректор И. Шмакова

Заказ 3622 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 ротки молока, полученного путем ферментативного гидролиза молочной сыворотки смесью микроорганизмов Зтгертососсоз

tactts 121/4, Streptococcus cremorts 244 хб/1, 1.actobacterlum easel 18, Acetobacter

acetl РД-10, Luctobacterlum buigarlcum в соотношении 1:1:2:2:1, и инкубацию посевов проводят в аназробных условиях s микрокамере, выполненной из полиакриламидного геля.