Способ очистки аллергена

Авторы патента:

Использование: изобретение относится к медицине и может быть использовано в производстве пыльцевых аллергенов для 2 диагностики и лечения поллинозов и касается способа очистки аллергена. Целью изобретения является повышение степени очистки целевого продукта от пигментов. Сущность изобретения заключается в отделении примесей от пыльцы, ее обезжиривании эфиром, отмывании водой, центрифугировании и стерилизующей фильтрации надосадочной жидкости. Положительный эффект заключается а практически полном исчезновении цветности целевого продукта. 3 табл.

СО!ОЗ СО8ЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 А 61 К 39/36

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4864281/14

{22) 06.09.90 (46) 30.10.92. Бюл. N. 40 (71) Научно-производственное объединение

"Аллерген" (72) Б.Н..Райкис и Н.А. Иллютович

{56)Регламент производства М 67-87 на ал. лергены пыльцевые. (54) СПОСОБ ОЧИСТКИ АЛЛЕРГЕНА (57) Использование; изобретение относится к медицине и может быть использовано в производстве пыльцевых аллергенов для

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в производстве пыльцевых аллергенов для диагностики и лечения поллинозов.

Известен способ получения пыльцевых аллергенов, включающий механическую очистку пыльцы от примесей, обезжиривание в эфире с последующим экстрагированием. центрифугированием и стерилизующей фильтрацией.

Чистота препарата, получаемого при использовании этого способа, зависит от степени удаления примесей из пыльцы и ее обезжиривания.

Однако данный способ не обеспечивает очистку целевого продукта от пигментов (цветность 0,75 вЂ” 1,3 ед. экстинции). Это приводит к появлению ложноположительных реакций и снижает специфичность иммунотерапевтического действия.

Цель изобретения вЂ” повышение степени очистки целевого продукта от пигментов. диагностики и лечения поллинозов и касается способа очистки аллергена; Целью изобретения является повышение степени очистки целевого продукта от пигментов.

Сущность изобретения заключается в отделении примесей от пыльцы, ее обезжиривании эфиром, отмывании водой, центрифугировании и стерилизующей фильтрации надосадочной жидкости. Положительный эффект заключается а практически полном исчезновении цветности целевого продукта. 3 табл.

Указанная цель достигается тем, что в предлагаемом способе пыльцевые зерна после обеэжириваиия отмывают водой.

Существенным отличием предлагаемого способа получения от известного является то, что предлагаемое изобретение почти полностью исключает цветность в готовом препарате (0,02-0.05 ед. экст.) за счет отмывки пыльцевых зерен после обезжиривания водой до визуального отсутствия в ней пигментов, Пример. 10 г пыльцы (например, амбрОзии) очищенной от механических примесей, помещают в емкость, обезжиривают этиловым эфиром; высушивают при комнатной температуре, затем заливают дистиллированной водой в соотношении г/мл 1:100 и отмывают пыльцу до визуального отсутствия пигментов в промывной жидкости. Затем пыльцу вновь высушивают и из расчета на 3 r пыльцы добавляют 100 мл раствора

Эванса-Кокка, и экстрагируют в течение 72 часов на магнитной мешалке при 4-60С..1771749

Таблица 1

Требования фармакопейной статьи

Показатель, единица измерения известном и е лагаемом

Белковый азот мгlмл

Цветность ед. экст, 0,1 от светло-желтого до коричневого стерилен специфичен не токсичен

0,1

0,75 вЂ” 1,3

0,1

0,02 вЂ” 0,05

Стерильность

Специфичность

Токсичность стерилен специфичен не токсичен стерилен специфичен не токсичен

Полученную взвесь центрифугируют при 5000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость фильтруют через бумажный фильтр, а затем через стерилизующие мембраны, стандартизи- 5 руют до О, t 00 0,020 мгlмл азота белка по

Кьельдалю, разливают во флаконы и укупоривают.

Контроль полученного аллергена осуществляют на стерильность, токсичность, 10 специфичность и цветцость, Токсичность препарату проверяют в опытах на белых мышах и свинках. Стерильность определяют посевом на питательную среду, Специфическую активность аллерге- 15 на проверяют в кожных тестах на больных сенсибилизированных пыльцой поллииозов. Цветность определяют визуально.

При этом получают прозрачный, бесцветный препарат (цветность вЂ” 0,03 ед. экс- 20 тинции), содержащий 0,1 мг/мл азота белка по Кьen ьдэл ю.

Сравнительная характеристика препаратов,полученных по известному и предлагаемому способам,представлена втабл, 1-3. 25 (Средние данные 10 серий).

Из табл.1 видно, что предложенный способ получения пыльцевых аллергенов позволяет почти полностью удалить пигменты, Об этом свидетельствует, низкая сте- 30 пень цветности (0,02 вЂ” 0,05 ед. экстинции) у очищенных аллергенов по сравнению с цветностыо (0,75 вЂ” 1,3 ед, экстинции) у неочищенных. 8 то же время очистка препарата не изменяет показателей специфичности, 35 токсичности, стерильности, содержания белкового азота, которые. соответствуют. требованиям фармакопеи., Как видно из табл.2, при кожном тестировании.(прик-тест) аллергенами, полученными по известному и предлагаемому способам, активность реакций це отличается.

Как видно из табл.3, уровень содержания антител у животных, иммунизированных аллергеном, приготовленным по предлагаемому способу на уровне, а в некоторых случаях и выше, чем кроликов иммунизированных коммерческим аллергенам.

Предлагаемый способ, по сравнению с известным, Обеспечивает следующие преимущества: дает возможность получить стандартный препарат очищенный от пигментов (цветность 0,0?-0,05 ед, экстинций, lro в конечном итоге повышает эффективность диагностики: достоверность анализа, уменьшается показатель ложных реакций и лечение поллинозов; более специфическая стимуляция иммунной системы).

В настоящее время в НПО "Аллерген" нарабатываются серил аллергена для оформления изменения к регламенту производ.ства на ныльцевые аллергены.

Формула изобретения

Способ очистки аллергена, включаю-. щий механическое отделение примесей от пыльцы. ее обезжиривание эфиром, центрифугирование, стерилизующую фильтрацию надосадочной жидкости, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения степени очистки целевого продукта от пигментов, пыльцу после обезжиривания отмывают водой.

Аллерген (амброзийный} полученный по способ:

1771749

Таблица 2

Сравнительная характеристика кожных реакций аллергенов

Рез льтаты кожных еак ийалле генов амб оэийных и иготовленныхпо способам: известном и е лагаемом средний диаметр волактивность (в крестах)

ы я,мм средний диаметр волактивность (в крестах)

ы я,мм

Таблица 3

Сравнительная характеристика иммуногенности аллергенов, выявленной в РНГА по титру антител у иммунизированных животных {кроликов) Составитель Б.Райкис

Техред М.Моргентал

Редактор

Корректор Л.Филь

Заказ 3794 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

7,5

8,5

6,0

7,0

10.0

7.0

7,0

9,0

4,5

+++

8,0

7,0

8,0

6,5

7.0

12,0

7,5

9,0

5.0

+++

++++

+++

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии, и касается лечения поллиноза у детей

Аллерготропин для лечения полинозов и способ лечения полинозов // 2205661

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и аллергологии, и касается лечения полинозов

Способ выделения и очистки аллергенов травяной пыльцы // 2242248

Изобретение относится к способу выделения и очистки пяти аллергенов из групп 1, 2, 3, 10 и 13 из травяной пыльцы

Варианты основного аллергена phl p 1 из тимофеевки луговой // 2323942

Изобретение относится к фармацевтически важным вариантам основного аллергена Phl p 1 из тимофеевки луговой

Последовательность днк и получение аллергена пыльцы трав phl p 4 с помощью рекомбинантных способов // 2327739

Изобретение относится к генной инженерии, в частности к обеспечению генетической последовательности основного аллергена пыльцы трав Phl p 4

Микрочастицы, включающие углеводные сферы, ковалентно связанные с аллергеном // 2329830

Вариант аллергена группы i из роасеае, характеризующийся сниженной аллергенностью и сохраненной т-клеточной реактивностью (варианты), кодирующая его молекула днк и его применение // 2409589

Изобретение относится к области генной инженерии, конкретно к получению вариантов аллергена группы I из Роасеае (зубровка душистая), и может быть использовано для специфической иммунотерапии (гипосенсибилизации) пациентов, имеющих аллергии на пыльцу растений, или для профилактической иммунотерапии аллергий на пыльцу

Способ диагностики поллиноза // 2011385

Изобретение относится к иммунологии и аллергологии и может быть использовано для диагностики аллергологических заболеваний, а именно, поллинозов

Комплексный препарат на основе аллергенов пыльцы березы и мурамилпептидов // 2537225

Изобретение относится к комплексному инъекционному препарату для лечения поллинозов методом АСИТ. Указанный препарат получают путем простого смешивания аллергоида пыльцы березы и мурамилпептида без проведения химической конъюгации составляющих, причем на дозу в 1000 PNU аллергоида добавляют 2 мг мурамилпептида. Заявленное изобретение обеспечивает значительное усиление иммунного ответа и стимулирует высокий уровень выработки специфических IgG-антител, а также позволяет сократить курс лечения поллинозов, что уменьшает возможность осложнений. 1 ил., 2 табл.

Агрегирующий агент для экстрагирования водорастворимого белка пыльцы кедра // 2548810

Группа изобретений относится к биохимии. Предложено применение натурального неорганического агрегирующего агента (варианты) при экстрагировании пыльцы кедра для экстрагирования водорастворимого белка пыльцы кедра. Натуральный неорганический агрегирующий агент в одном варианте содержит сульфат кальция, оксид алюминия, диоксид кремния и сульфат алюминия в качестве основных компонентов. В другом варианте натуральный неорганический агрегирующий агент содержит силикат кальция в качестве основного компонента. Изобретения обеспечивают проведение экстракции в больших объёмах при одновременном повышении эффективности экстракции. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 2 ил.