Способ получения оптически активных производных (+)-бицикло (3.3.0)-октанола
Использование: получение химических соединений биосинтезом, использование ферментов или микроорганизмов для разделения рацемической смеси на оптические изомеры. Сущность изобретения: осуществляют ферментативное или микробиологическое стереоспефическое ацилатное омыление ацилатной группы ряда рацемических соединений промежуточных стадий Изобретение относится к способу стереоспецифического ацилатного гидролиза рацемических сложных эфиров 3-ацилоксибицикло 3.3.0(-октан-7-он-2-карбоновых кислот до оптически активных спиртов с помощью ферментов или микроорганизмов. Он особенно пригоден для получения оптически активных производных (+)-бицикло(3.3.0)-октанола формулы (+) у 7-R, он (+Ы , простаци клина. Берут, например, 3 г ( ±) метилового эфира За-ацетокси-7,7-(2,2- диметил-триметилендиокси)-цис-бицикло (3.3.0)-октан-2 /3 -карбоновой кислоты, растворяют в 100 мл этанола и объединяют с раствором 1,5 г липазы-PL из Alcaligenes в 1 л 0,1 М фосфатного буфера с рН 7 в колбе Эрленмейера емкостью 2 л. Суспензию встряхивают, по истечении 21ч превращаются 50% используемого субстрата. Реакционную смесь экстрагируют 3 раза метилизобутилкетоном. Экстракты объединяют , концентрируют досуха и для отделения непрореагировавшего ацилата сложного эфира хроматографируют через колонку с силикагелем. Получают 1,15 г. энантиомерного чистого (+) метилового эфира За -окси-7,7-(2,2-диметил-триметилдиокси)-цис-бицикло(3.3,0)-октан-2 /3 -карбоновой кислоты, который после кристаллизации из смеси гексана с диизопропиловым эфиром плавится при 64-66°С,(а)о20 +26,2° (с 1,255, в СНС1з). 3 з.п. ф-лы, 2 ил. (Л С где RI и R2 вместе обозначают атом кислорода или двухвалентный остаток -0-Х-О- с X в качестве линейного или разветвленного алкилена с 1-7 С-атомами или Рз обозначает остаток COOZ с Z в качестве линейного, или разветвленного алкила с 7-10 С-атомами. Он отличается тем. что рацемические производные 3-ацилоксицис-бицикло(3.3.0)-октана формулы ()-И: % А, « 9- ОСОРЦ vi 00 00 О а 00 GJ (±)-ii,
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ
ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ (21) 4356253/13 (86) P ÑÒ/D Е 87/00513 (12.11.87) (22) 12.07.88 (31) Р 3638758,4 (32) 13,11,86 (33) DE (46) 15.01.93. Бюл, № 2 (71) Шеринг АГ (DE) (72) Карл Петцольдт, Хельмут Даль и Вернер
Скубалла (DE) (56) К.Kojima et al: "А convenient synethsis of (+) — 9(0) Methanoprostacyclin", Chem. Phalm, Bull. Band 33, ¹ 7, 1985, р, 2688 — 2696. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОПТИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ПРОИЗВОДНЫХ (+)-БИЦИКЛО (3.3.0)-О КТАНОЛА (57) Использование: получение химических соединений биосинтезом, использование ферментов или микроорганизмов для разделения рацемической смеси на оптические изомеры, Сущность изобретения: осуществляют ферментативное или микробиологическое стереоспефическое ацилатное омыление ацилатной группы ряда рацемических соединений промежуточных стадий
Изобретение относится к способу стереоспецифического ацилатного гидролиза рацемических сложных эфиров 3-ацилоксибицикло 3,3.0(-октан-7-он-2-кэрбоновых кислот до оптически активных спиртов с помощью ферментов или микроорганизмов.
Он особенно пригоден для получения оптически активных производных (+)-бицикло(3,3.0)-октанола формулы (+)-I: р, ОН (+)-I, „„Я „„1788968 АЗ (st)s С 12 Р 41/00 (С 12 P 41/00, С 12
R 1:84, 1:85, 1 865 С 12 P 7/12 простациклина. Берут, например, 3 г () метилового эфира За-ацетокси-7,7-(2,2диметил-триметилендиокси)-цис-би цикло (3.3.0)-октан-2 Р -карбоновой кислоты, растворяют в 100 мл этанола и объединяют с раствором 1,5 г липазы-PL из Alcaligenes в
1 л 0,1 М фосфатного буфера с рН 7 в колбе
Эрленмейера емкостью 2 л. Суспензию встряхивают, по истечении 21 ч превращаются 507, используемого субстрата, Реакционную смесь экстрагируют 3 раза метилизобутилкетоном. Экстракты объединяют, концентрируют досуха и для отделения непрореагировавшего ацилата сложного эфира хроматографируют через колонку с силикагелем. Получают 1,15 г энантиомерного чистого (+) метилового эфира За -окси-7,7-(2,2-диметил-триметилдиокси)-цис-бицикло(3,3.0)-октан-2 Р -карбоновой кислоты, который после кристаллизации из смеси гексана с диизопропиловым эфиром плавится при 64 — 66 С (а)О =+26,2 (с=
= 1,255. в СНС(з). 3 з.п. ф-лы, 2 ил. где R1 и R2 вместе обозначают атом кислорода или двухвалентный остаток — Π— X-Π— с
Х в качестве линейного или разветвленного алкилена с 1 — 7 С-атомами или
Рз обозначает остаток COOZ c Z в качестве линейного, или разветвленного алкила с 7-10 С-атомами.
Он отличается тем, что рацемические производные 3-ацилоксицис-бицикло(3.3.0)-октана формулы ()-1I: г я, ОсОЦ, (+) П
1788968 где Rr, R2, Яз и R4 имеют вышеуказанные значения, ферментативно или микробиологически подвергают стереоспецифическому ацилатному гидролизу и образовавшееся (+)-про- 5 изводное бицикло (3.3,0)-октанола (+)-! отделяют от неомыленного бицикло (3.3.0)октанолацилата формулы (— )-II или неомыленный энантиомер (+)-II отделяют от омыленного производного бицикло (3,3,0)- 10 октанола (— )-I и затем подвергают химическому ацилатному гидролизу (=гидролизу ацилатной группы).
Если X обозначает линейный или разветвленный алкильный остаток с 1 — 7 С-ато- 15 мами, то подразумевают следующие
Остатки, "
-(CH2)n — с "n" = 1 — 7 (метилен, этилен, три-, тетра-пента, -гекса- и гептаметилен), — С(СНз)2 —, — СН(СНз) —, — СН(СНз) — СН2 —, 20 — С(С Н З)2 —, C H2 —, — C H2 — С Н(С Н)З вЂ”, — C H2—
С(СНз)2, — С Н2 — СН(СНз) — СН2 — — С Н2—
С(СНз)2-СН2-, CH (C2H5) -С(С2Н5)-, -СН(С2Н5)-CH2 -СН2-CH(C2H5) — СН2 — C(C2H5)2 —, — СН2 — CH(C2H5) — СН2 —, 25 —,С Н2 — C(C2 H5) — С H2 — и т,д.
Z, R4 в качестве линейных или разветвленных алкильных остатков с 1 — 7 С-атомами обозначают метил, атил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор, -бутил, трет,- 30 бутил, н-пентил, изопентил, втор. -пентил, неопентил, н-гексил, изогексил, н-гептил, изогептил.
2; соответственно, R4 в качестве аралкильных остатков с 7 — 10 С-атомами должны 35 охватывать следующие остатки: — CH2-С6Н5, -СН2-СН2-С6Н5, -СН2-СН2-СН2-С6Н5, -CH2 ÑÍ2 — CH2 — СН2 — С6Н5, СН(СНз) — С6Н5, — СН2 — СН(СНз) — С6Н5, С Н2 — СН2 — СН(СНз)—
С6Н5, СН(СНз) — СН2 — С6Н5, — СН(СНз) — СН2 — 40
СН2 С6Н5, СН2 СН(СНЗ) СН2 С6Н5, CH(C2H5)
С6Н5, СН2 — СН(С2Н5) — С6Н5, — СН(сзН7)—
С6Н5, — С(СНз)2 — С6Н5, — СН2 — С(СНз)2 — С6Н5,—
СН(СНз) СН(СНз) С6Н5, С(СНз)2 СН2
С6Н5 и т.д. 45
Известен способ, предусматривающий применение производных цис-бицикло(3.3.0)-октан-3,7 — диона для синтеза оптически активных карбациклинов, который включает разделение диастереомерных со- 50 лей рацемической 7,7-этилендиокси-3а-окси-цис-бицикло(3.3.0) — октан-2-карбоновой кислоты, Также этот способ требует еще 7 реакционных стадий, чтобы исходя из сложных 55
3-оксоглутаровых эфиров достичь исходного материала для аналогов карбациклина. К тому же проходят промежуточную стадию получения нестабильной Р-кетокислоты, Целью изобретения является повышение выхода и ускорение способа, Способ иллюстрируется фиг.1 и 2.
В качестве ферментов для предлагаемого в изобретении способа предпочтительно пригодны:
Липаза-Р! из Alaligenes
Липаза M из Candida cylindracea
Липаза "Saiken" из Rhlzopus
Липаза:Selегоtinia"
cr-õèìoòðèïcèí из поджелудочной железы крупного рогатого скота
Алкалаза Т
Эстераза из свиной печени
Липаза из поджелудочной железы свиньи
Субтилизин из Bacillus subtitis, причем ферменты можно использовать как в растворенной, суспендированной или, например, иммобилизованной на активированной BrCN сефа розе или на оксиранакриловых шариках форме.
В качестве микроорганизмов для предлагаемого в изобретении способа предпо <тительно пригодны:
Alcaligenes marshallii АТСС 21030
Mucor rouxie АТСС 8097
Corynebacterium egui АТСС 21107
Trichoderma koningi CBS 85068
Sarcina lutea АТСС 9341
Penicillium citrinum АТСС 8506
Flavobacterium lutesuns IFO 3085
Alcaligenes paradoxus АТСС 17713
Однако также можно применять выделенные из микроорганизмов ферменты в раствбренной или иммобилизованной форме.
Получаемые по способу согласно изобретению оптически активные производные бициклооктана формулы (+)-I представляют собой ценные промежуточные продукты для синтеза фармакологически эффективных производных простациклина. Множество стереоспецифических гидролизующих ферментов и микроорганизмов омыляют рацемические производные 3-ацилоксицис-бицикло(3.3,0)-октана формулы (+)-!! до оптически активных спиртов формулы (+)-1, которые по своей абсолютной конфигурации соответствуют природному простациклину PCI2, Оказалось, путем сравнения спектральных и оптических свойств со сравнительными веществами, что обычно можно получить оптически активные карбациклиновые аналоги из промежуточной стадии синтеза. Таким образом полученные продукты после отделения от неомыленных
"фальшивых" энантиомеров (— )-I можно прямо использовать для синтеза соответствую1788968 -СООСН, ОСОС,Н3 (+)-3 к а О
О-СООСН, осо(сн,),соон
СООСН, (+)-1
СООСН3
ОСОСН3 (+)-2 COOÑÏ, ОсО(сн,),сн, (+) -6 ()(ЯОСН3
ОсосН(СН,), (+)-7 с
О О
СООС Н3
ОСОСН3 (+)-10 С
О,О
r. Е ()-СООН
ОСОСН3 (+)-9
OXO
СООСН СБН3
ОСОСН, (+)-11 щих природному простациклину PGI2 аналогов, Однако оказалось, что микроорганизмы и ферменты, как, например, химотрипсин или ацилаза Т, омыляют из обоих компонентов рацемата (+ )-II "фальшивый", неестественно конфигурированный энантиомер до (-)- . В этом случае остающийся неомыленный энантиомер(+)-!! может использоваться для синтеза аналогичных PGlg карбациклинов, В предлагаемом в изобретении способе работают при общеизвестных условиях способа, которые обычно применяют при ферментативных реакциях, соответственно, микробиологических превращениях и которые следуют из примеров. Ход ферментативного или микробиологического превращения прослеживается благодаря анализу непрерывно отбираемых проб. В качестве методов анализа пригодны жидкостная хроматография высокого давления или быстрый анализ с помощью тонкослойной хроматографии (пластины из силикагеля фирмы lVlerk, Дармштадт), проявление с помощью эфира, окрашивание с помощью смеси серная кислота (этанол).
Реакцию прерывают и реакционную смесь обрабатывают, когда превратилось
50% используемого рацемического субстрата.
Предлагаемое согласно изобретению ферментативное или микробиологическое стереоспецифическое ацилатное омыление особенно пригодно для ацилатного омыления (омыления ацилатной группы) следующих рацемических соединений промежуточных стадий простациклина;
Из получаемых по предлагаемому в изобретении способу оптически активных 3-ок5
55 си-соединений общей формулы (+)-i можно получать фармакологически эффективные простациклины. Например, исходя из (+)-1, получают биологически активное вещество
Илопрост.
С 11.11.86 г. штаммы Mucor ronxii (DSM
3897) и Alcaligenes marshallii (0SM 3900) находятся на хранении в немецкой коллекции микроорганизмов.
Получение исходных соединений.
Пример А 1. Метиловый эфир 7,7-(2,2диметил-триметилендиокси)-цисбицикло (3,3.0)октан-3-он-2-карбоновой кислоты, 38,34 r 55%-ного гидрида натрия суспендируют в 616 мл диметилкарбоната, нагревают в атмосфере азота до 50 С и добавляют небольшое количество раствора
49,31 г 3;3-(2,2-диметилтриметилендиокси)цис-бицикло(3.3.0)-октан-7-она в 370,мл диметилкарбоната. Путем добавки 2 мл метанола индуцируют реакцию, добавляют к реакционной смеси остальное количество раствора и перемешивают в целом 7,5 часов при 50 С, Охлаждают на ледяной бане, разлагают избыточный гидрид натрия с помощью метанола, добавляют воду и нейтрализуют уксусной кислотой. Продукт экстрагируют с помощью дихлорметана, концентрируют в вакууме и продукт кристаллизуют из гексана, Получают 532,44 r продукта с т.пл, 72 С, Пример 2. Метиловый эфир 7,7-(2,2диметил-триметилендиокси(-3-окси-цис-би цикло(3.3.0)-октан-2/3-карбоновой кислоты.
Метод А.
52,0 г метилового эфира 7,7 (диметилтриметилендиокси)-цис-бицикло(3.3.0)-октан-3-он-2-карбоновой кислоты при нагревании растворяют в 1000 мл метанола и охлаждают до — 40 С. Затем вносят 20,91 r боргидрида натрия, перемешивают 30 минут, медленно смешивают с 171 мл ацетона и нейтрализуют спустя последующий час с помощью уксусной кислоты. После отгонки основного количества растворителя, смешивают с водой и дихлорметаном, органическую фазу сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме.
Остаток растворяют в 550 мл метанола. добавляют к полученному раствору 9,94 г метилата натрия и нагревают 105 мин при
40 С. Охлаждают на ледяной бане, нейтрализуют и обрабатывают как описано выше.
Полученный сырой продукт хроматографируют на силикагеле с помощью смесей дихлорметана с этилацетатом. Получают 47 г целевого соединения, которое может кристаллизоваться из гексана и имеет т.пл.
43 С, Метод Б.
1788968
56,6 г метилового эфира 7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси)-цис-бици кло(3,3,0)октан-3-он-2-карбоновой кислоты растворяют в 300 мл этила цетата и после добавки 5,1 г диоксида платины гидрируют при 22 С и 5 нормальном давлении до тех пор, пока не прекратится поглощение водорода. Отфильтровывают из катализатора и концентрируют в вакууме. Получают 56,8 r целевого соединения, чистота которого достаточна 10 для получения кристаллизующего сложного эфира. Продукт можно кристаллизовать из гексана и получают 44,4 г первого кристаллизата с т.пл, 43 С.
Пример А 3.. Сложный 3-эфир метило- 15
coro эфи ра 7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси)-За -окси-цис-бицикло(3.3.0)-октан- 2р
-карбоновой кислоты. а) Ацетат (+)-1
100 г полученного в предыдущем приме- 20 ре по методу Б сырого продукта растворяют в 57 мл пиридина и 57 мл уксусного ангидрида и нагревают 3 ч при 40 С. После охлаждения добавляют ледяную воду, экстрагируют дихлорметанам, органиче- 25 скую фазу промывают 2н. серной кислотой, раствором гидрокарбоната натрия и раствором хлорида натрия, высушивают над сульфатом натрия, концентрируют в вакууме и кристаллизуют остаток из гексана, Получа- 30 ют 97,7 г продукта с т,пл. 54 С. б) Бензоат("-)-3
5,0 r сырого сложного оксиэфира растворяют в 10 мл пиридина, смешивают с
2,47 мл бензоилхлорида и перемешивают 4 35 часа при 22 С. Затем медленно добавляют в 100 мл ледяной воды, перемешивают 30 минут и кристаллизат отсасывают. После высушивания и перекристаллизации из метанола получают 5,97 г продукта с т,пл. 40
102 С. в) Изобутират (+)-7
2,265 r закристаллизовавшегося сложного оксиэфира растворяют. в 40 мл дихлорметана, смешивают с 4,16 мл триэтиламина 45 и медленно с 3,14 мл изобутилхлорида. Спустя 2,5 ч при 22 С добавляют 40 мл насыщенного раствора гидрокарбоната натрия, ограническую фазу отделяют и промывают с помощью 2н. серной кислоты при охлаж- 50 дении льдом и водой, сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме. Сырой продукт хроматографируют на силикагеле. смесями гексана с этилацетатом. Получают
4,91 г продукта с т.пл.43 С, 55 г) Бутират (+.)-6
4,265 г кристаллизованного сложного оксиэфира растворяют в 10 мл пиридина, добавляют 4,90 мл масляного ангидрида и перемешивают 20 ч при 22 С. Смешивают с ледяной водой, экстрагируют дихлорметаном и экстракт промывают раствором гидрокарбоната натрия, при охлаждении льдом
2н. серной кислотой и водой, сушат над сульфатом натрия, концентрируют в вакууме и хроматографируют на силикагеле с помощью смесей гексан-этилацетат. Получают
5,03 г продукта в виде бесцветного масла. д) Неполный сукцинат (ч-)-8
4,265 r кристаллизованного сложного оксиэфира растворяют в 10 мл пиридина, добавляют туда 1,833 г 3-диметиламинопиридина и 1,501 r ангидрида янтарной кислоты и перемешивают 20 ч при 22 С. Затем добавляют в ледяную воду, подкисляют 2н. серной кислотой до рН 3, экстрагируют дихлорметаном, промывают раствором хлорида натрия, сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме. Остаток обрабатывают раствором гидрокарбоната натрия, экстрагируют диэтиловым эфиром, водную фазу подкисляют до рН 3, экстрагируют дихлорметаном, промывают экстракт раствором хлорида натрия, сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме. Получают 5,04 г продукта в виде бесцветного масла.
Пример А 4. Метиловый эфир За -ацетокси-7,7-этилендиокси-цис-би цикл о(3.3.0)
-октан-2Р -карбоновой кислоты (+)-2
10,0 г метилового эфира 7,7-этилендиокси-3-окси-цис-би цикла(3.3.0)-окта н-2-карбо новой кислоты превращают в условиях примера А За и сырой продукт хроматографируют на силикагеле смесями гесана с этилацетатом, Получают 10,28 г продукта с т.пл. 50 С, Пример А 5. 7,7-(2,2-диметилтриметилендиокси)-3 а -окси-цис-бицикло(3.3.0)-октан-2 Р -карбоновая кислота
5,0 г кристаллического сложного оксиэфира из примера А 2 перемешивают с 17.6 мл 1н. раствора гидроксида натрия в течение 30 мин при 22 С, экстрагируют этилацетатом, подкисляют при охлаждении льдом водной фазы с помощью 2н серной кислоты до рН 3, экстрагируют дихлорметаном, промывают раствором хлорида натрия, сушат над сульфатом натрия и концентрируют в вакууме. Получают 4,66 г продукта, который достаточно чист для последующих реакций, Пример А 6. За-ацетокси-7,7-(2,2-диметилтриметилендиокси)-цис-бицикло(3.3, 0)октан-2/3-карбоновая кислота (+ )-9
3,13 г оксикислоты из примера А 5 растворяют в 15 мл пиридина и после добавки
2,74 мл уксусного ангидрида перемешивают
20 ч при 22 С. К полученному раствору до1788968
5
15 бавляют ледяную воду, перемешивают 30 мин, экстрагируют дихлорметаном, промывают экстракт водой, сушат над сульфатом натрия, концентрируют в вакууме и хроматографируют на силикагеле смесями гексана с этилацетатом. Получают 3,04 г продукта в виде бесцветного масла.
Пример А 7. Этиловый эфир 7,7-(2,2диметил-триметилендиокси)-3 а -окси-цисбицикло(3.3.0)-октан-2 Р -карбоновой кислоты.
4,78 г, полученной в. примере А 5 оксикислоты кипятят с обратным холодильником в течение 2 дней вместе с 50 мл ацетона, 4,90 г карбоната калия и 5,72 мл иодэтана.
После охлаждения отфильтровывают, фильтрат концентрируют в вакууме, смешивают с водой, экстрагируют дихлорметаном, сушат экстракт над сульфатом натрия, концентрируют и очищают остаток на силикагеле смесью гексана с этилацетатом, Получают
3,65 г продукта в виде бесцетного масла, Пример А 8, Этиловый эфир За— а цето кси-7,7-(2,2-диметилтриметилендиокси)-цис-бицикло(3.3.0)-октан-2 Р -карбоновой кислоты (+.)-10
3,10 г сложного оксиэфира из примера
А 7 превращают в условиях примера А За и сырой продукт хроматографируют на силикагеле смесями гексана с этилацетатом.
Получают 3,20 г продукта в виде бесцветного масла.
Пример А 9. Бензиловый эфир 7,7-(2,2диметил-триметилендиокси)-3 Q -окси-цисбицикло(3,3.0)-октан-2 Р -карбоновой кис. лоты.
2,52 r полученной в примере А оксикислоты вместе с 50 мл ацетата, 3,59 г карбоната калия и 3,0 мл бензилхлорида кипятят с обратным холодильником в течение 5 дней и обрабатывают как описано в примере А 7, Получают 2,07 r продукта в виде бесцветного масла.
Пример А 10. Бензиловый эфир 3 аацетокси-(2,2-диметил-триметилендиокси)цис-бицикло(3,3.0)-октан-2Р-карбоновой кислоты (+ )-11.
1,89 г сложного оксиэфира из примера
А 9 превращают в условиях примера А 3 и сырой продукт хроматографируют на силикагеле смесями гексана с этилацетатом.
Получают 1,78 г продукта в виде бесцветного масла.
Пример А 11, Бензиловый эфир
7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси)-цисбицикло(3.3.0)-окси-3-он-2-карбоновой кислоты, К раствору 2,5 г метилового эфира 7,7(2,2-диметил-триметилендиокси)-цис-бици20
55 кло(3.3.0)-октан-3-он-карбоновой кислоты в
50 мл толуола добавляют 1,2 мл бензилового спирта и 217 мк диметиламинопиридина и раствор кипятят с обратным холодильником в течение 8 часов. Затем охлаждают до 25 С, добавляют насыщенный раствор хлорида натрия, экстрагируют метиленхлоридом, промывают рассолом, сушат над сульфатом магния и выпаривают в вакууме. Остаток очищают путем колоночной хроматографии на силикагеле. Элюируют смесью гексана с уксусным эфиром (8:2) 2,6 г титульного соединения в виде бесцветных кристаллов. После перекристаллизации из смеси уксусного эфира с гексаном получают 1,8 г бесцветных кристаллов с т,пл. 78 С.
Пример А 12. Бензиловый эфир
7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси)-3 а -окси-цис-бицикло(3.3.0)-октан-2 Р -карбоновой кислоты.
1,5 г бензилового эфира 7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси)-цис-бицикло(3.3.0)
-октан-3-он-2-карбоновой кислоты (пример
11) при температуре кипения с обратным холодильником растворяют в 25 мл метанола. Затем охлаждают до — 40 С, добавляют
470 мг боргидрида натрия и перемешивают
1 ч при — 40 С. Добавляют 3,8 мл ацетона, перемешивают 1 ч при — 40 С, нейтрализуют примерно 0,7 мл ледяной уксусной кислоты и концентрируют в вакууме. Остаток смешивают со 100 мп воды, экстрагируют с помощью метиленхлорида, промывают рассолом, сушат над сульфатом магния и выпаривают в вакууме. После хроматографии на силикагеле получают с помощью смеси гексана с уксусным эфиром (6 — 4) 1,4 г титульного соединения в виде бесцветного масла. ИК-спектр (СНС!з):3600, 2960, 1722, 1447 см
Пример А 13, Бензиловый эфир
7,7-(2,2-диметил-триметилендио кси)-3 а бензоил-окси-цис-бицикло(3.3,0)октан-2 /3карбоновой кислоты, К раствору 1,85 г бензилового эфира 7,7(2,2-диметилтриметилендиокси)-3 а -оксицис-бицикло(3.3.0)-октан-2 Р -карбоновой кислоты (пример А 12) в 14 мл метиленхлорида при 0 С добавляют 1,4 мл пиридина и
0,62 мл бензоилхлорида и перемешивают
0,5 ч при 0 С и 2 ч при 25 С. Затем добавляют 0,2 мл воды, перемешивают 1 ч, разбавляют метиленхлоридом, встряхивают последовательно с водой, 57,-ным раствором гидрокарбоната натрия и водой, Сушат над сульфатом магния и хроматографируют остаток после выпаривания на силикагеле.
С помощью смеси гексана с уксусным эфи1788968
12 ром (3 — 2) получают 1,36 г титульного соединения в виде бесцветного масла.
ИК-спектр (СНС!з):3960, 2870, 1725, 1603 см
Следующие примеры осуществления служат для пояснения предлагаемого в изобретении способа, Пример 1. 3 г (ч-) метилового эфира
3 а -ацетокси-7,7-(2,2-диметилтриметиленди о кси)-ц ис-би цикл о(3,3,0)-о кта н-2 Р-ка рбоновой кислоты растворяют в 100 мл этанола и объединяют с раствором 1,5 г липазы -PL из Alcaligenes в 1 л 0,1 М фосфатного буфера с рН 7 в колбе Эрленмейера емкостью 2 л, Суспензию встряхивают при 30 С на ротационном встряхивателе, причем за ходом реакции следят путем анализа непрерывно отбираемых проб, По истечении времени реакции 21 ч превращается 50% испытуемого субстрата. Реакционную смесь теперь экстрагируют 3 раза метилизобутилкетоном. Э кстракты объединяют, кон центрируют в вакууме досуха и для отделения непрореагировавшего ацилата сложного эфира хроматографируют через колонку с силикагелем (градиент: метиленхлорид-метиленхлорид (10% ацетона). Получают 1,15 г энантиомерного чистого (+) метилового эфира 3-окси-7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси)-цис-бицикло-(3.3.0)-октан-2Р -ка рбо н овой кислоты, который после кристаллизации из смеси гексана с диизопропиловым эфиром плавится при 64 — 66 С, (а)о
=+ 26,2 (с= 1,255, в СНСЬ).
Пример 2. 300 мг (+.)-метилового эфира 3 а -ацетокси-7,7-(2,2-диметилтриметилендиокси)-цис-бицикло(3.3.0)-октан-.2 Pкарбоновой кислоты суспендируют в 100 мл
0,1М фосфатного буфера с рН 7, добавляют
750 мг липазы Му из Candlda cylindracea и суспензию гомогенизируют с помощью ультра- Turrax. Затем смесь при комнатной температуре встряхивают на ротационном встряхивателе. Спустя время реакции 30 ч, субстрат превращается на
50%. Реакционную смесь тогда экстрагируют 3 раза эфиром, экстракты объединяют и выпаривают в вакууме досуха. Оставшийся остаток для отделения непрореагировавшего исходного материала хроматографируют с помощью градиента растворителей метиленхлорид-метиленхлорид — (5% ацетона) через колонку с силикагелем. Получают .105 мг (+) метилового эфира 3 -окси-7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси}-цис-бицикло(3,3.0)
-октан-2Р-карбоновой кислоты, который после кристаллизации из гексана имеет т,пл, 62-63 С и величину вращения (а)п +25 С (c= 1,01 в CHCIs). Путем сравнительного из40
55 неестественной конфигурацией, омыленных в.этом случае энантиомеров хроматографируют с помощью градиентов растворителей метиленхлорид-метиленхлорид/ 5% ацетона через колонку с силикагелем. Фракция 1 содержит соответствующий по своей абсолютной конфигурации природному простациклину РС!г, остающийся неомыленным энантиомер (+ )-II. После концентрирования досуха получают 115 мг (+)-метилового эфира 3 а-ацетокси-7,7-(2,2диметил-триметилендиокси)-цис-бицикло (3.3,0)-октан-2 j3-карбоновой кислоты в виде некристаллизующегося масла с величиной вращения (а)г> =+2,6 (с= 1,035 в хлороформе).
Пример 5. В условиях примера 4, 300 мг (+ )-метилового эфира 3 i2-ацетокси-7,7этилендиокси-цис-бицикло(3.3.0)-октан-2/>карбоновой кислоты в фосфатном буфере с мерения с аутеничным сравнительным стандартом установили избыток энантиомера
93,6%.
Пример 3, 300 мг (+ ) метилового
5 эфира 3 а -ацетокси-7,7-(2,2-диметилтриметилендиокси)-цис-бицикло(3.3,0)-октан-2 Pкарбоновой кислоты растворяют в этаноле и добавляют суспензии 750 мг липазы
"Saiken" из Rhizopus в 100 мл 0,1 M фосфат10 ного буфера с рН 7. Спустя 96 ч встряхивают на машине для встряхивания при 28 С, затем реакционную смесь экстрагируют метилизобутилкетоном, экстракт концентрируют досуха и хроматографируют через. колонку с
15 силикагелем. Получают 112 мг (+)-метилового эфира За -окси-7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси)-цис-бицикло(3,3.0)-октан-2
-карбоновой кислоты с т,пл. 64 — 65 С после кристаллизации из гексана. Величина вра20 щения составляет (а)г> = + 23,8 (с = 1,02 в
СНС!з), избыток энантиомера после сравнительного измерения по отношению к аутеничному стандарту 92,5%.
Пример 4. 300 мг (-)-метилового эфира 3 а -ацетокси-7,7-(2,2-диметилтриметилендиокси)-цис-бицикло(3.3,0)-октан-2 /3— карбоновой кислоты суспендируют в 100 мл
0,1 М фосфатного буфера с рН 7. Добавляют
750 мг а -Химотрипсина из поджелудочной
30 железы крупного рогатого скота и гомогенизируют с помощью ультра-Turrax. Затем реакционную смесь при 28 С встряхивают на ротационном встряхивателе до тех пор, пока используемый субстрат ацилата сложного эфира не превратится на 50%. После этого реакционную смесь экстрагируют многократно метилизобутилкетоном, обьединенные экстракты концентрируют в вакууме досуха и с целью отделения с
13
1788968
14 рН = 7 вводят во взаимодействие с 750 мг субтилизина из Bacillus subtilis. После встряхивания в течение 10 ч при 28 С смесь экстрагируют метилизобутилкетоном, экстракт концентрируют досуха и хромэтографируют на колонке с силикагелем. С помощью градиентов растворителей метиленхлорид-метиленхлорид/ 4 ацетона элюируют в виде первой фракции неомыленный, с соответствующей природному простациклину конфигурацией (+)-энантиомер. После концентрирования фракции досуха получают 130 мг (+)-метилового эфира
3 а -ацетокси-7,7-этилендиокси-цис-бицикло(3,3,0)октан-2)З-карбоновой кислоты в виде маслянистой жидкости с величиной вращения (a)D = +2,4 (с = 1,085 в хлоро20 форме).
Пример 6. Колбу Эрленмейера емкостью 2 л, которая содержит 500 мл стерилизованного в течение 30 мин при 120 С в автоклаве питательного раствора из 0,1 пептона, 0,2% Corn Sreep Liguor 0,5 глюкозы и 0,5% дрожжевого экстракта, с установленным при 7,5 значении рН, инокулируют с помощью культуры косых палочек (Schrogrohrehen) штамма AIcaligenes
rnarshalii АТСС 21030 и в течение 48 ч встряхивают на ротационном встряхивателе. С помощью 300 мл этой выращенной культуры инокулируют ферментер емкостью 10 л, который заполнен 5 л стерилизованной питательной среды такого же состава, что и таковая выращиваемой культуры. При добавке силикона SH в качестве антивспенивателя оставляют прорастать при 29 С при аэрации (5 n/ìèí) и перемешивании (220 об/мин). После фазы роста 36 часов добавляют субстрат в форме стерильно отфильтрованного раствора 30 г (+ ) метилового эфира 3 а -ацетокси-7,7-(2,2-диметилтриметилендиокси)-цис-бицикло(3.3.0)-октэн-2 j3— карбоновой кислоты в 125 мл этанола и за течением реакции следят с помощью анализа непрерывно отбираемых проб. Спустя 10 ч после добавки субстрата, превратилось
50 / используемого субстрата. Содержимое ферментера теперь экстрагируют 4 раза по
3; метилизобутилкетоном, экстракты объединяют и выпаривают в вакууме досуха. Оставшийся остаток растворяют в метаноле и для удаления силиконового масла фильтруют через складчатый фильтр. Фильтрат снова доводят в вакууме досуха и остаток для отделения непрореагировавшего с конфигурацией (-)-II энантиомера (фракция I) хроматографируют через колонку с силикагелем (градиент = метиленхлорид — метиленхлорид/20% ацетона). Получают во фракции ll после кристаллизации из гексана 10,7 г (+)метилового эфира За-окси-7,7-(2,2-диметилтриметилендиокси)-цис-бицикло(3,3.0)-октан-2Р-карбоновой кислоты с т.пл, 63 — 64 С, 5 что соответствует выходу энантиомера
81,9 от теории. Величина вращения составляет (а)о =+26,1 (с = 1,3 в хлорофоро ме), избыток энантиомера 97,5 .
Пример 7. Колбу Эрленмейера емко10 стью 2 л, которая содержит 500 мл стерилизованного в течение 80 мин при 120 С в автоклаве питательного раствора из 3 глюкозы, 1,0 Steep Liguor, 0,2 NaN03, 0,1 КН2Р04,0,2% К2НР04, 0,05 MgS04 7«
15 «Н20, 0,002 FeS04.7 Н20 и 0,05 KCI, инокулируют с помощью культуры косых трубочек штамма Mucor rouxii (АТСС 8097) и 2,5 дня встряхивают на ротационном встряхивателе при 30 С.
20 С помощью двойного объема этих выращенных культур инокулируют ферментер емкостью 20 л, который заполнен с помощью 14 л стерилизованной в течение 60 мин при 121 С и повышенном давлении 1,1
25 бар среды такого же состава, что и таковая выращиваемых культур, При добавке силикона SH в качестве антивспенивателя оставляют прорастать при 29 С с повышенным давлением 0,7 бара при аэрации (15 л/мин)
30 и перемешивании (220 об/мин). После фазы роста 15 ч добавляют субстрат в форме стерильно профильтрованного раствора 9 г (+ )-метилового эфира 3 а -ацетокси-7,7(2,2-диметил-триметилендиокси)-цис-бици35 кло(3.3.0)-октан-2 P карбоновой кислоты в
220 мл этанола и за течением реакции непрерывно следят путем анализа непрерывно отбираемых проб.
Спустя 2 ч после добавки субстрата пре40 вратилось 50 используемого субстрата, Содержимое ферментера теперь экстрагируют 3 раза по 10 л метилизобутилкетоном. экстракты обьединяют и концентрируют в вакууме досуха. Остающийся остаток рас45 творяют в метаноле и для удаления силиконового масла фильтруют через складчатый фильтр. Фильтрат снова доводят досуха в вакууме и остаток, для отделения непревращенного исходного материала, хроматогра50 фируют через колонку с силикагелем (градиент: 5 л метиленхлорида — 5 л мети- ленхлорида 10 ацетона). Получают 3,3 г (+)-метилового эфира 3 а-окси-7,7-(2,2-диметил-три метил е ндио кси)-ци с-би ци кл о(3.3.0)55 октан- 2 Р -карбоновой кислоты, который после кристаллизации из смеси гексана с диизопропиловым эфиром, плавится при
64 — 65 С. Величина вращения составляет (а )D = +25,7 (с = 1,045 в хлороформе).
1788968
Путем сравнительного измерения по отношению к аутентичному стандарту определен энантиомерный избыток 96 вес.
Пример 8. Колбу Зрленмейера емкостью 2 л, заполненную 500 мл стерильного 5 питательного раствора из 0,1 пептона, 0,2 Corn Steep liguor, 0,5 глюкозы и 0,5 дрожжевого экстракта, рН = 7,3, инокулируют с помощью культуры косого агара штамма Corynebactirium egui (АТСС 21107) и 10 встряхивают 48 ч при 30 С.
С помощью двойного объема этих выращенных культур инокулируют ферментер емкостью 20 л, который заполнен 14 л стерильной среды такого же состава, что и та- 15 ковая выращиваемых культур, При добавке силикона SK- в качестве антивспенивателя оставляют прорастать при 29 С и повышенном давлении 0,7 бара при аэрации (15 ф мин) и перемешивании (220 об/мин). После 20 времени роста 16 ч добавляют субстрат в форме стерильно профильтрованного раствора 6 г (+ )-метилового эфира 3 а-ацетокси-7,7-(2,2-диметил -триметилендиокси)-цисбицикло(3.3.0)-октан-2Р -карбоновой кисло- 25 ты в 150 мл этанола и далее перемешивают и аэрируют. Спустя 3 ч после добавки субстрата превратилось 50 используемого субстрата. Смесь теперь экстрагируют метилизобутилетоном и экстракт концентри- 30 руют в вакууме досуха. Остающийся остаток освобождают от силиконового масла путем обработки метанолом и хроматографируют через колонку с силикагелем. Получают 1,9
r (+ )-метилового эфира 3 а - окси-7,7-(2,2-ди- 35 метилтриметилендиокси)-цис- бицикло(3.3.0)октан-2 Р -карбоновой кис- лоты, который после кристаллизации из смеси гексана с диизопропиловым эфиром плавится при 63—
65 С. Величина вращения составляет (a)D 40
=+25,2 (с = 1,04 в CHClg).
Пример 9. В условиях примера 7 с помощью культуры штамма Trichoderma
Koningi(CBS 85068) 6 г(+)-метилового эфира
3 а -ацетокси-7,7-(2,2-диметил-триметилен- 45 дио кси)-ци с-би ци кло(3.3.0)-о кта í-2Р -ка рб оновой кислоты после времени ферментации
28,5 ч превращают в 2,0 r (+)-метилового эфира 3 G -окси-7,7-(2,2-диметил-триметил ендио к си)-цис-би цикл о(3.3.0)-октан-2 Р карбоновой кислоты. Величина вращения кристаллизованного из гексана вещества составляет (а)0 =+24,2 (с = 1,015 в СН С э).
Пример 10. В условиях примера 8 с помощью культуры штамма Sareina Lutea (ATCC 9341) 6 г (+ )-метилового эфира 3 а— а цетокси-7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси)-цис-бицикло(3.3.0)-октан-2 /3 -карбоновой кислоты после времени ферментации
135 ч превращают в 1,85 r (+)-метилового эфира 3 а -окси 7,7(2,2-диметил-триметилендиокси)-цис-бицикло(3.3.0)-октан-2 р карбоновой кислоты, Величина вращения составляет(а)пи =+23,6 (c=1,010 в СНС!з).
Пример 11. В условиях примера 7 с помощью культуры штамма Penicillium
lutesuns (ATCC 8506) 6 г(+ )-метилового эфира 3 а -ацетокси-7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси)-цис-бицикло(3.3.0)-октан-2 Р
-карбоной кислоты за 8 ч времени ферментации превращают в 2,3 г (+ )-метилового эфира 3 а -окси-7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси)-цис-бицикло(3.3,0)-октан-2 Р карбоновой кислоты, Величина вращения составляет (а)р =+21,8 (с = 1,05 в CHClg).
Пример 12. В условиях примера 8 с помощью культуры штамма Flavobacterium
lutesuns (IFO 3085) 6 г (+)-метилового эфира
3 а -ацетокси-7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси)-цис-бицикло(3.3.0)-октан-2 Р-ка рбоновой кислоты за 47 ч времени ферментации превращают в 1,8 г (+ ) -метилового эфира 3 а -окси-7,7-(2,2-диметилтриметилендиокси)-цис-бицикло(3.3.0)-октан-2 -карбоновой кислоты. Величина вращения составляет (а)р =+21,8 (с = 1,145 в
СН С!з).
Пример 13. 300 мг (+ )-метилового эфира 3 -бутирилокси-7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси)-цис-бицикло(3.3.0)-октан-2
-карбоновой кислоты растворяют в 9 мл этанола и объединяют с раствором 750 мг липазы "Saiken" из Rhizopus в 100 мл 0,1 М фосфатного буфера с рН 7. Суспензию встряхивают в течение 150 ч при 28 С на ротационном встряхивателе и затем экстрагируют метилизобутилкетоном. Экстракт концентрируют в вакууме досуха и остаток для отделения непрореагировавшего ацилата сложного эфира хроматографируют через колонку с силикагелем, Получают 95 мг (+)метилового эфира 3 rz -окси-7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси)-цис-бицикло-(3,3.0)
-октан-2Р-карбоновой кислоты с величиной вращения (а)о =+22,8 (с = 0,905 в CHClg).
Пример 14. В условиях примера 13, 300 мг(+)-метилового эфира 3-бутирилокси7,7-(2,2-ди метил-три метил ендиокс и)-ци с-б ицикло(3,3,0)-октан-2Р-карбоновой кислоты в фосфатном буфере с рН = 7 превращают в присутствии 750 мг алкалазы T. Спустя 2,5 ч встряхивания при 28 С смесь экстрагируют метил-изобутилкетоном и экстракт хроматографируют на силикагеле. Получают 100 мг(— )-метилового эфира 3 G -окси-7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси)-цис-бицикло(3.3.0) 17
1788968
-октан-2 Р-карбоновой кислоты с величиной вращения (а)о = -24,9 (с = 1,020 в CHCls), Пример 15, 300 мг (+ )-метилового эфира 3 -диметилацетокси-7,7-(2,2-диметилтриметилендиокси)-цис-бицикло(3.3.0)-ок- 5 тан-2ф-карбоновой кислоты растворяют в 9 мл эта нола и объединяют с раствором 1,5 мл разбавленной 1:40 эстеразы из свиной печени в 100 мл 0,1 M фосфатного буфера с рН= 7. Смесь встряхивают 1 ч при 28 С на 10 машине для встряхивания, затем экстрагируют метилизобутилкетоном и выпаренный в вакууме экстракт хроматографируют через колонку с силикагелем, Получают 114 мг (+)метилового эфира 3 а -окси-7,7-(2,2-диме- 15 тил-триметилендиокси)-цис-бици кло(3,3.0)октан-2Р-карбоновой кислоты в виде масла, которое медленно кристаллизуется. Т.пл, 64 — 65 С (а)п =+25,1 (с = 1,010 в CHCls).
Пример 16. 300 мг (+ )-метилового 20 эфира За -карбоксипропионилокси-7,7-(2,2диметил-триметилендиокси)-цис-бицикло (3,3.0)-октан-2Р -карбоновой кислоты растворяют в 9 мл этанола и объединяют с раствором 750 мг липазы "Sclегоtinia" в 100 мл
0,1 М фосфатного буфера с рН = 7, После встряхивания в течение 30 ч на машине для встряхивания при 28 С устанавливают рН значение раствора равным 9,0 с помощью
0,1 н, NaOH, затем экстрагируют с помощью метилизобутилкетона и экстракт концентрируют в вакууме досуха. Получают 105 мг (+)-метилового эфира 3 а-окси-7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси)-цис-бици кло(3.3.0)октан-2 j3-карбоновой кислоты с величиной вращения (Q)D =+24,0 (с= 1,08 в CHCI3), Пример 17. 300 мг ()-этилового эфира
3 а -ацетокси-7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси)-цис-бицикло(3.3.0)-октан-2 Р-карбоновой кислоты растворяют в 9 мл этанола и обьединяют с раствором 750 мг липазы из поджелудочной железы свиней в 100 мл фосфатного буфера с рН 7. Раствор встряхивают на ротационном встряхивателе при
28 С, причем за течением реакции следят путем анализа непрерывно отбираемых проб. Спустя 1 ч времени реакции превращается 50% используемого субстрата.
Смесь теперь экстрагируют 3 раза метилизобутилкетоном, экстракты объединяют, концентрируют в вакууме досуха и для отделения непрореагировавшего ацилата слож- ного эфира, хроматографируют на колонке с силикагелем (градиент:метиленхлоридметиленхлорид 10 /, ацетона), Получают 110 мг (+)-этилового эфира За -окси-7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси)-цис-бицикло (3,3.0)-октан-2ф-карбоновой кислоты с величиной вращения (а)п =+23,8 (с = 1,215 в
С Н Cls), Пример 18. В условиях примера 17, 300 мг (+)-этилового эфира 3 а-ацетокси-7,7(2,2-диметил-триметилендиокси)-цис-бици кло(3.3.0)-октан-2 Р -карбоновой кислоты в течение 1 ч обрабатывают раствором 1,5 Мп (разбавленным 1:40) эстеразы из свиной печени в 100 мл фосфатного буфера с рН 7.
После экстракции метилизобутилкетоном и хроматографии через колонку с силикагелем получают 118 мг(+)-этилового эфира
3 а -окси-7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси)-цис-бицикло(3.3.0)-октан-2 Р -карбоновой кислоты с величиной вращения (а)0 =+24,3 (1,075 в СНС(з).
Пример 19. В условиях примера 17, 300 мг (+)-бензилового эфира 3 а-ацетокси7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси)-цис-бицикло(3.3.0)-октан-2 Р -карбоновой кислоты в течение 1 ч обрабатывают раствором 750 мглипазы Р(из Alcaligenes в 100 мл фосфатного буфера с рН 7. Затем смесь экстрагируют метилизобутилкетоном, экстракт концентрируют досуха и остаток хроматографируют через колонку с силикагелем.
Получают 105 мг (+)-бензилового эфира
3 а -окси-7,7-(2,2-диметил-триметиленд иокси)-цис-бицикло(3.3,0)-октан-2 /3 -карбоновой кислоты с величиной вращения (c)n =+23,9 (с = 1,045 в СНС!з), Пример 20. В условиях примера 17.
300 мг (+)-бензилового эфира 3 а-ацетокси7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси)-цисбицикло(3,3,0)-октан-2/3-карбоновой кислоты в течение 3 ч обрабатывают раствором
750 мг липазы Му из Candida cyclindracea в
100 мл фосфатного буфера с рН 7. Затем смесь экстрагируют метилизобутилкетоном, экстракт концентрируют досуха и остаток хроматографируют на колонке с силикагелем. Получают 115 мг (+ )-бензилового эфира 3 а-окси-7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси)-цис-бицикло(3.3.0)-октан-2 /3карбоновой кислоты с величиной вращения (а)п =+24,5 (с = 1,145 в СНС з).
Пример 21. В условиях примера 8 с помощью культуры штамма Alcaligenes
patadoxus (АТСС 17713) превращают 6 r (+ )-метилового эфира 3 с -ацетокси-7,7-(2.2диметил-триметилендиокси)-цис-бицикло (3.3.0)-октан-2 /3 -карбоновой кислоты. Спустя 4 ч после добавки субстрата, превращаются 50% используемого рацемата. Смесь экстрагируют метилизобутилкетоном и экстракт концентрируют в вакууме досуха. Остающийся остаток, с целью отделения неестественной конфигурации омыленного энантиомера, хроматографируют через колонку с силикагелем, При этом во фракции 1 оказывается соответствующий по своей аб19
1788968
20 3
0H (+) I солютной конфигурации природному простациклину PGlz, оставшийся неомыленным энантиомер (+)-II. После того, как фракцию концентрируют досуха, получают 2,4 г (+)метилового эфира 3 а-ацетокси-7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси)-цис-бицикло (3,3.0)-октан-2Р-карбоновой кислоты в виде некристаллизирующегося масла с величиной вращения (а )D = +2,2 (c = 1,11 в
СНС з), Пример 22. Проведение иммобилизации липазы из свиной поджелудочной железы.
1 r липазы из свиной поджелудочной железы суспендируют в 40 мл 1М фосфатного буфера рн 7,5, прибавляют к 10 г Eupergit
С.
После хорошего перемешивания инкубируют три дня при комнатной температуре. В заключение отсасывают иммобилизат, дважды промывают по 200 мл 0 1 M фосфатного буфера и выдерживают в 0,1 М при 4 С.
Энзимная реакция:
В 2-литровой эрлейнмейеровской колбе суспендируют 20 r иммобилизованной на
Eupergit С-липазы в 1 л фосфатного буфера, рН 7, После этого добавляют субстрат в форме раствора 500 мг метилового эфира (1)3 а -а цетокси-7,7-(2,2-диметил-триметилендиокси)-цис-бицикло(3,3,0)октан-2 Р -карбоновой кислоты в 25 мл этанола и встряхивают 16 ч при 30 С на встряхивающей м ашине.
В заключение отсасывают иммобилизованный фермент и промывают немного фосфатным буфером. Фильтрат дважды экстрагируют по 500 мл метилизобутилкетона, объединенные экстракты сушат над
NazS04 и концентрируют досуха в вакууме.
Оставшийся остаток хроматографируют на силикагелевой колонке (градиент; 1,8 л метиленхлорида — 1,8 л метиленхлорида) 5о ацетон. Первая фракция содержит непревращенный ацетоксибициклооктан-метиловый эфир, вторая фракция содержит 320 мг метилового эфира (+ )-3 а-гидрокси-7,7-(2,2диметил-триметилен)-цис-бицикло(3,3.0)октан-2/3-карбоновой кислоты с т.пл. 62 — 63 С, Угол вращения составляет+25,5 (c= 1,001 в
НСС!з).
Формула изобретения
1. Способ получения оптически активных производных (+)-бицикло(3.3.0)-октанола общей формулы (+)-1 Rt Я2
5
55 где Rt и R2 кислород или двухвалентный остаток — О-X-Π— c X в качестве линейного или разветвленного C> — Ст-алкилена атомами;
Вз — остаток COOZ c Z в качестве линейного или разветвленного C> — Ст-алкила или
Ст — С1о-аралкила атомами, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода и ускорения способа, осуществляют ферментативный или микробиологический стереоспецифический ацилатный гидролиз рацемических производн ых За-ацилоксицис-бицикло(3.3.0)-октана общей формулы (+)-II R, R> .
>С
4 где Rt, Rz и Вз имеют указанные значения;
R4 — линейный или разветвленный С>С4-алкил или фенил, используемый в качестве субстрата, с последующим отделением образовавшегося производного (+) -бицикло(3.3.0)-октанола формулы (+ )-I от неомыленного бицикло(3.3.0)-октанол-эцилата формулы (— )-II, или неомыленный энантиомер формулы (+)-1I отделяют от омыленного производного бицикло (3,3,0)-октанола формулы ()-! и затем подвергают химическому ацилатному гидролизу.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве ферментов используют липазу — PL из Alcaligenes, липазу Му из
Candida Cylindracoa, липазу "Saiken" из
Rhizopus, липазу Sclегоtonia, а-химотрипсин из поджелудочной железы крупного рогатого скота, алкалазу Т, эстеразу из свиной печени, липазу из поджелудочной железы свиньи или субтилизин из Bacillus subtilis в растворенной, суспендированной или иммобилизованной на активированной бромцианом сефарозе или на оксиранакриловых шариках форме, 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве микроорганизмов используют штаммы Alcaligenes morshalii
АТСС 21030, Mucor rouxii АТСС 8097.
CorynebacterIum egui АТСС 2107, Tricoderma koningi СВС 85068, Sarcina lutea
АТСС 9341; Penicillium citrinum АТСС 8506, Flavobacterium lutesuns IFO 3085 или
Alcaligenes paradoxus АТСС 17713.
4, Способ по п.З, отличающийся тем, что в качестве ферментов используют выделенные из указанных микроорганизмов ферменты в растворенной, суспендированной или иммобилизованной форме.
1788968
СТАДИЯ (Ь): ВЫХОД=90,5 $ СЕГО 81%
СТАДИЯ (С) l ВЫХОД =89,5%3
СТАДия (О,): ВЫХОД =51%
0 0
>С
C00Ne
OH фиг, 1
СООСН, ОН
СТАДИЯ Ь ВЫХОД = 88%
СТАДИЯ ь ВЫХОД = 85 (о
ФИГ 2
Составитель И.Привалова
Техред М,Моргентал Корректор Н.Гунько
Редактор
Заказ 83 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, yn,Гагарина, 101
0 0 (G)
СООМе
0 0 (b)
С00Н
ОН (+) 0 0 соосн, ОС0СН>
0 0
Е (+) э ИЕТИЛБЕНЪАииН СОЛЬ
OH (0.,0
СООСН, OH
