Способ получения среды для выделения и видовой идентификации стафилококков

 

Изобретение относится к области медицины , а именно медицинской микробиологии , и может быть использовано для выделения стафилококков и видовой идентификации их по лецитиназной активности и пигментообразованию. Целью изобретения является улучшение ростовых свойств среды и процесса лиофилизации, а также увеличение срока хранения целевого продукта. Она достигается тем, что порошковый агарагар смешивают с хлоридом натрия, желтком и молоком, а затем добавляют мяср-пептонный бульон, смесь гомогенизируют при комнатной температуре, замораживают до температуры от 40-50°С в охлажденном спирте и лиофилизируют в течение 16-18 ч при температуре продукта не выше 35°С, причем в начале сушки создают давление 0,026-0,013 кПа, а в конце сушки - 0,003 кПа. 1 табл. w fe

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5!)5 С 12 N 1/02

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

М

° ю

° °

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4145308/63 (22) 24,07.86 (460 30.01,93. Бюл. (Ф 4 (71) Киргизский научно-исследовательский .. институт туберкулеза (72) E.À.Ôèíêåëü и Т,С.Панова (56) Приказ М3 СССР от 22.04.85 "Об унификации микробиологических (бактерйологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений".

Ъ (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДЫ ДЛЯ

ВЫДЕЛЕНИЯ И ВИДОВОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ СТАФИЛОКОККОВ (57) Изобретение относится к области медицины, а именно медицинской микробиолоИзобретение относится к области медицины, а именно к медицинской микробиологии и может быть использовано для выделения стафилококков и видовой идентификации их по лецитиназной активности и пигментообраэованию.

Известен способ приготовления желточно-молочно-солевого агара для выделения и идентификации стафилококков, включающий смешивание питательного агара, содержащего ферментативный гидролизат кормовых дрожжей и хлорид натрия с молочно-желточной смесью по прописи.

Целью изобретения является улучшение ростовых свойств среды и процесса лиофилизации, а также увеличение срока хранения целевого продукта, „, Ы,, 1791448 А1 гии, и может быть использовано для выделения стафилококков и видовой идентификации их по лецитиназной активности и пигментообразованию. Целью изобретения является улучшение ростовых свойств среды и процесса лиофилизации, а также увеличение срока хранения целевого продукта.

Она достигается тем, что порошковый агарагар смешивают с хлоридом натрия, желтком и молоком, а затем добавляют мясо-пептонный бульон, смесь гомогенизируют при комнатной температуре, замораживают до температуры от 40 — 500С в охлажденном спирте и лиофилиэируют в течение 16-18 ч при температуре продукта не выше 35 С, причем в начале сушки создают давление 0,026-0,013 кПа, а в конце сушки — 0,003 кПа. 1 табл.

Указанная цель достигается тем, что порошковый агар-агар смешивают с хлоридом натрия, желтком и молоком, а затем добавляют мясо-пептонный бульон, смесь гомогенизируют при комнатной температуре, эамораживают до температуры — 40, -500С в охлажденном спирте и лиофилизируют в течение 16 — 18 ч при температуре продукта не выше 35 С, причем в начале сушки поддерживают давление 0,026 — 0,013 кПа, а в конце сушки — 0,003кПа.

Пример. Для получения среды используют следующие компоненты (в вес.g): порошковый агар-агар — 1,8-2,0; натрия хлорид — 7,5-10; желток яичный — 1,2-1,5; молоко коровье стерильное — 18,0-20,0, мясо-пептонный бульон — остальное.

1791448

20 герметически укупоривают.

Для использования среды в бутылкидобавляют небольшое количество кипящей стерильной дистиллированной воды, встряхивают, чтобы смыть сухую массу со стенок, доводят ее уровень до 100 мл. Восстановленную среду разливают в стерильные чашки Петри и после застывания используют для посевов по общепринятой методике.

Исследования охватывают изучение 90

35 культур стафилококков, выделенных от больных туберкулезом.

Для оценки биологической активности восстановленной сухой и нативной сред, изготовленных, соответственно по заявленному способу и по прототипу, учитывали процентное количество культур, которые проявляли лецитиназную активность и обнаружили пигмент спустя 24 и 48 ч после посева.

Показатели интенсивности лецитинаэной активности и пигментообраэования при проверке через 24 и 48 ч после посева патологического материала на нативную и сухую восстановленную питательную среды, изготовленные сравниваемыми способами, представлены в таблице, Результаты сравнительного изучения лецитиназной активности и пигментообразования стафилококков на нативной и сухой

50 восстановленной питательных средах, изготовлейных, соответственно, по прототипу и заявленному способу.

Результаты проверки лецитиназной активности через 24 ч после посева показывают преимущества сухой восстановленной среды по заявленному способу.

Полученные через 24 ч различия по нигментообразованиа статически также выявляют преимущество сухой питательной

Все компоненты в указанной последовательности помещают в стерильную емкость, тщательно растирают до получения однородной массы, после чего при постоянном перемешивании добавляют мясо-пеп- 5 тонный бульон. Смесь разливают по 100 мл в стерильные бутылки емкостью 250 мл. закрывают резиновыми пробками и погружают в ванну с охлаждением до -40, -50 С на

30-40 мин. При вращении бутылок смесь 10 замораживают на их стенках. Затем бутыл- . ки открывают, помещают в сублимационный аппарат и замороженную смесь сушат в течение 16 — 18 ч, при температуре продукта не выше 35 С/ до 3 ч. или при -35-17 С; 15

4-11 ч. при -15 — 0 С; 12 — 18ч, при 30 — 35ОС/, причем в начале сушки поддерживают давление 0,026-0,013 кПа, в конце сушки—

0,003 кПа. Бутылки с высушенной средой среды, изготовленной по заявляемому способу. Эта особенность более ярко выражена у культур, образующих золотисто-желтый пигмент.

Высокая биологическая активность сред по заявленному способу подтверждается и при сопоставлении результатов испытания обеих сред после 48 ч после посева патологического материала.

Через 24 ч и 48 ч после посева среда по заявленному способу обладала более высокими биологическими качествами выделения и идентификации стафилококков по лецитиназной активности и пигментообраэованию.

Весьма существенно, что на сухой восстановленной среде 73,3 7 культур стафилококков по пигменту и лецитинаэной активности уже через 24 ч могли быть отнесены к патогенным штаммам, Причем патогенность их подтверждена в реакции плазмокоагуляции. На нативной среде таких штаммов было 50 по истечении 24 ч после посева. Различие статистически достоверно. Этот факт подтверждает более высокие биологические качества сухой среды по предлагаемому способу, позволяюЩие за короткий период получить более высокий диагностический результат.

Анализ скорости прироста количества патогенных культур в последующие 24 ч на нативной среде показывает, что их максимальное число 70.0ф,. достигается только к

48 ч, в то время, как на сухой, восстановленной среде максимум (73,37,) патогенных культур обнаруживается уже к 24 ч после посева и лишь незначительно(4%) возрастает к 48 ч. Фактически полноценная диагностика патогенности стафилококков обеспечивается на сухой восстановленной среде в 24 ч инкубации в термостате, т.е. в срок в 2 раза меньше, нежели на нативной среде.

Вторично биологическая активность среды по заявленному способу была проконтролирована после 12 месяцев хранения, которые показали, что питательная среда, изготовленная по заявленному способу и восстановленная после 12 месяцев хранения, при видимой идентификации стафилококков по показателям лицетиназной активности и пигментобразованию превосходит нативную среду по прототипу.

Способ приготовления среды позволяет получить сухую питательную среду, стандартизировать ее и обеспечить выделение и видовую идентификацию стафилококков по лецитиназной активности и пигментообразованию.

1791448

Составитель IO. Кононенко

Техред M,Ìoðråíòàë Корректор С.Патрушева

Редактор С. Кулакова

Заказ 134 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Формула изобретения

Способ получения среды для выделения и видовой идентификации стафилококков, включающий приготовление желточно-Молочно-солевой питательной смеси на уплотняющей агаровой основе, о т л и ч а ю. шийся тем, что, с целью улучшения ростовых свойств среды и процесса лиофилизации, а также увеличения срока хранения целевого продукта, в качестве уплотняющей основы используют порошковый агар-агар, смешивают его с хлоридом натрия, желтком и молоком, смесь гомогенизируют при комнатной температуре с мясо-пептонным бульоном, замораживают до

5 температуры -40...-50 С в охлажденном спирте и лиофилизируют в течение 16 — 18 ч, при температуре продукта на выше 35 С, причем в начале сушки поддерживают давление 0,026 — 0,013 кПа, а в конце сушки—

10 0,003 кПа.