Средство для повышения резистентности организма птиц к бактериальной инфекции

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5I)5 А 61 К 31/535

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКСМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ о

О Д

Ф Ql (д (21) 4890025/15 (22) 11.12.90 (46) 15.02 93, Бюл. ¹ 6 (71) Ленинградский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови и Всесоюзный научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства (72) M,Ф.Харченко, Н.В.Иванова, Н,M.Øóñтова, С.В.Николаев, Л.С.Колабская, Л.П,Рыбакова и Т.Б.Кузина (56) Машковский M.Д. Лекарственные средства. M.; Медицина, 1984, т, 2, с. 172.

Ерэикян К.Л., Трапков В,А. Гликоэаминогликаны: структура и метаболизм — Известия АН СССР, Биологическая серия, 1988, с. 334 †3, ¹ 3.

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к птицеводству и касается повышения неспецифической резистентности организма птиц к инфекции.

Существующий комплекс ветеринарносанитарных мероприятий, направленных на повышение здоровья и продуктивности птицы не всегда дает делаемый эффект. В птицеводстве с целью повышения резистентности организма птиц, атом числе к бактериальным и вирусным заболеваниям, в последние годы на базе сбалансированных по белку кормов с витаминизированными добавками и добавлением микроэлементов используют химико-фармацевтические средства, антибиотики, а также биологически активные вещества (БАВ) гормональные вещества тимуса, агаро-тканевые препараты, неспецифический авиглобулин, авиамин, тимоген и др.

Однако широкое применение лекарственных препаратов в птицеводстве, наряду

„„Я3„„1794453 Al (54) СРЕДСТВО ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА ПТИЦ К БАКТЕРИАЛЬНОЙ ИНФЕКЦИИ (57) Использование: птицеводство, Сущность изобретения: в качестве средства, повышающего резистентность организма птиц к бактериальной инфекции, применяют гликозаминогликаны лейкоцитов птиц.

Гликозаминогликаны лейкоцитов птиц получают из крови птиц убойных цехов птицефабрик. 3 табл. с профилактическим их действием, способствует появлению устойчивых штаммов микробов и,. следовательно, снижению эффективности лечения; обуславливает появление болезней, вызываемых условно-патогенной микрофлорой, Кроме того, антибиотики обладают выраженным иммунодепрессивным действием. Ассортимент же биостимуляторов невелик, стоимость их высока, Применение синтетических химических препаратов также имеет отрицательные последствия, т.к. многие из них активны и оказывают.влияние на генотип организма. накапливаются в органах и тканях, что ведет к снижению качества продукции.

Целью предлагаемого изобретения является повышение резистентности организма птиц к бактериальным инфекциям.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве средства, повышающего резистентность организма птиц. используют гликааминогликаны лейкоцитов птиц, получаемые в результате нематериалоемкой

10 римышечно вводили ГАГ лейкоцитов птиц в 1-"

1е нологии из широкодоступного сырья-крови птиц убойных цехов пгицефабрик.

Опыты по применению гликозоаминогликанов (ГАГ) проводили на цыплятах суточного возраста кросса "Бройлер-6", которым с интервалом 7 дней двухкратно внутримышечно вводили ГАГ в конечной концентрации 20 — 50 мкг на кг живсй массы.

Содержание цыплят соответствовало существующей на птицефабрики технологии кормления и выращивания, включающей рецепт кормления: комбикорм ПК-5 и премик витаминный и минеральный.

В первые сутки жизни цыплятам внутконцентрации 10, 25, 50 мкг на кг живой массы, на 7 сутки введение ГАГ повторяли в

-oA же концентрации. После чего спустя еще сутки заражали цыплят Е.coll штамм Б-6 путем подкожного однократного введения 0,6 мл взвеси (исходная концентрация 1 млрд, микробных клеток в 1 мл среды согласно стандарту мутности). В течение 30 дней велось наблюдение за животными производилось определения показания реэистентности, состава микрофлоры кишечника, осуществлялся учет выживаемости, Воздействие ГАГ на выжимаемость животных, Пример 1. Цыплят суточного возраста разделяли на две группы по 20 алов в каждой. Одной группе вводили ГАГ в дозе 10 мкг на кг живой массы двукратно, внутримышечно с интервалом 7 дней, Контролем служила группа, не получавшая препарата.

Через сутки после повторного введения препарата цыплят опытной и контрольной групп заражали Е,coii.

Спустя 5 дней выживаемость в опытной группе составила 65%, а ерез 30 дней—

38%. В контроле через 5 дней выживаемость составила 24 /, а через 30 дней—

0,6 /, Пример 2. Схема опыта соответствовала примеру 1, но ГАГ вводили в дозе 25 мкг на кг живой массы двукратно внутримышечно с интервалом 7 дней.

На 5 день после заражения выживаемость в опытной группе составила 53%, а в контроле — 24 /, на 30 день в опытной группе выживаемость составила 24, в контроле вся птица пала.

Пример 3. Схема опыта соответствовала примеру 1, но ГАГ вводили в дозе 50 мкг на кг массы двукратно, внутримышечно с интервалом 7 дней.

На 5 день после заражения выжимаемость в опытной группе и контроле совпада35

55 ла и составила 24, а на 30 день . в опытной группе - 10, а в контроле - 0 /.

Для подтверждения высокой биологической активности ГАГ эффект его действия сравнивали с таковым тималина, как широко известного иммуностимулятора при острых и хронических инфекциях. Введение тималина проводили внутримышечно по той же схеме, что и ГАГ в конечной концентрации 200 мг на кг массы (согласно инструкции по применению).

Выживаемость цыплят на 5 сутки после заражения в. группе, получавшей тималин составила 47, на 30 сутки — 20, а в контроле, соответственно — 24 и 0%, Следует отметить, что при введении ГАГ в конечной концентрации 20 — 50 мкг на кг массы выживаемость на 5 сутки была выше, чем в контроле на 30 — 40, на 30 сутки — на

20 — 40%, что дает основание рассматривать концентрацию в указанных пределах как оптимальную, в то время как в опыте с тималином выживаемость не превышает таковую контрольной группы более чем на 20 .

Наряду с интегральным показателем— выживаемость птицы после заражения

Е.coli были прослежены показатели резистентности у цыплят контрольной группыбез введения ГАГ, опытных — c,.ââåäåíèåì

ГАГ в конечной концентрации 20„50, 100 мкг на кг массы и группы с применением тималина в конечной концентрации 200 мкг на кг массы (см. табл. 1), Из данных табл, 1 следует, что при введении ГАГ цыплятам, зараженным Е.coll, штамма Б-G происходит усиление защиты организма, В частности, содержание lgG повышалось, в среднем, на 50 в опытной группе по сравнению с контрольной, процент розеткообразующих клеток — на 31 . Наряду с этим возрастал фагоцитарный индекс и фагоцитарное.число, что свидетельствует о напряженности фагоцитоэа и усилении поглотительной способности зернистых гранулоцитов.

Следует отметить, что результаты, полученные при введении ГАГ (в оптимальной концентрации 20-50 мкг на кг массы) по большинству рассмотренных параметров не уступают таковым при введении тималина. а по ряду показателей, в т.ч. интегральному показателю выживаемости поголовья превосходят.

Одним из показателей устойчивости жи.вотных к заболеваниям является качественный и количественный состав микробных сообществ кишечника, т,к. этиологическими агентами инфекционных заболеваний все чаще становятся условно-патогенные энте1794453 робактерии и грамотрицательные неферментирующие бактерии, прежде считавшиеся вполне безвредными. В связи с этим была поставлена задача проанализировать популяцию условно-патогенной микрофлоры цыплят в описанных опытах.

Были проведены исследования содержимого слепых кишок у цыплят в опытах с заражением Е.соИ: контрольной группы, . опытных — с применением ГАГ с конечной концентрации 20 мкг, 50 мкг, на кг массы и в группе с применением тималина, Забор материала производили на 5 сутки после заражения Е,coli, Гомогенат кишок (1 г) разводили десятикратными серийными разведениями, высевали на селективные среды: Эндо, Хогингера, солевой агар и др.

Дальнейшую идентификацию проводили с помощью тест-систем АР1 20 EM Rapid 20Е (Франция), Для родовой идентификации, применяли следующие тесты: определение

-галактоэидазы, фенилаланиндезаминазы, уреазной активности, образование индола и сероводорода, утилизация цитрата и малоната ¹a. ферментативной активности по отношению к лактозе и лизину.

Спектр выделенных микроорганизмов приведен в табл. 2. Из приведенных данных следует, что общее количество энтеробактерий кишечника цыплят сокращается в среднем на 2 порядка в опытах с ГАГ и тималином по сравнению с контролем. Количество лактозоотрицательных энтеробактерий в опытах с ГАГ сокращалось íà 7% по сравнению с конгоолем, тогда как при вве % дении тималина наолюдалось снижение на

4%. Гемолитические Е.coll u Proteus вообще отсутствовали в группах с применением ГАГ и тималина. Гемолитические кокки в группе с применением ГАГ в концентрации 20 мкг на кг массы отмечены в единичных количествах, в группе с применением ГАГ в концентрации 50 мкг на кг массы отсутствовали, тогда как в контроле они составляли 10, Еще более значительным быз ло действие ГАГ íà Salmonella. Популяция

Salmonella сократились в опытах in vlvo c

ГАГ на один порядок, в то время как тималин практически не влиял на их содеожание, Таким образом, применение ГАГ в концентрации 20 — 50 мкг на кг массы йриводит к угнетению роста микроорганизмов условно-патогенной флоры кишечника, что может способствовать повышению резистентности организма птиц и увеличению сохранности поголовья.

Следует отметить, что ГАГ в опытах !и чЬо обладает высокой биологической активностью в сравнительно-низких концентрациях 20 — 50 мкг на кг массы, что выгодно бавляли ледяную дистиллированную воду в соотношении 1:4 для гемолиза эритроцитов с экспозицией 30-40 сек., после чего раствором 2н NaCI доводили концентрацию соли до 0,9 н. Затем полученный гемолиз центрифугировали при 1300 об.в. мин на центрифуге К-70 при температуре +4 в течение 10 минут и получали в осадке лейкоциты, Получение ГАГ из осажденных лейкоцитов крови птиц проводили известным методом получения ГАГ из лейкоцитов человека (4).

Концентрацию ГАГ определяли карбазольным методом по содержанию уроновых кислот {5).

На основании химического (ферментативного расщепления) и электрофоретического анализа на ацетат-целлюлозной пленке вещества. выделенного из лейкоци55 тов птиц вышеуказанным способом и ГАГстандартов можно сделать заключение, что полученное средство, повышающее резистентность организма птиц к бактериальной инфекции является ГАГ и включает 3 фракции: хондроитийсульфат — 8%. отличает его от общеизвестного биостимулятора тималина оптимальная доза которого в 4-10 раз выше таковой ГАГ.

В связи с проблемой салмонеллеза;

5 имеющей место в сельском хозяйстве и в птицеводстве в частности, целесообразно было выявить влияние ГАГ непосредственно на данный микроорганизм в опытах in

vivo (см. табл. 3).

10 Для этого в 1 мл среды с Salmonella

galllnarum, начальная концентрация которой в среде составляла 10 10, 10, вносили

ГАГ в концентрации 50 мкг, 25 мкг, 12,5 мкг, 6,25 мкг, 3 мкг, 1,5 мкг. Контролем служил 1

15 мл МПБ с начальной концентрацией

S.gallinarum 10, 10, 10 . Пробы сутки вы.держивали в термостате; после чего производился высев на плотную агаровую среду с последующей инкубацией в течение 24 ча20 сов при оптимальной температуре, затем подсчитывали количество микроорганизмов.

Из данных таблицы 3 видно, что даже такие низкие концентрации ГАГ как 6,25

25 мкг/Mn, 3 мкгlмл, 1,5 мкг/мл угнетают рост

S.gallinarum на 4-6 порядков в опытах !п чего.

Сырьем для получения ГАГ служит кровь птиц, получаемая в результате плано30 вых убоев на птицефабриках.

Получение лейкоцитов из периферической крови птиц, взятой в присутствии цитрата натрия в конечной концентрации 0,5%, проводили следующим путем; в кровь до1794453

Таким образом, применение ГАГ лейкоцитов птиц с целью повышения неспецифической резистентности организма птиц в сравнительно низких концентрациях 20 — 50 мкг нэ кг живой массы способствует усиле- 5

Формула изобретеения

Применение гликозэминогликанов лейкоцитов птиц в качестве средства для повыТаблица1

Тималин 200 ГАГ 20 мкгlкг ГАГ 50 мкг/кг ГАГ 100 мкг/Kr массы массы массы мкг/кг массы

Контроль

2,97 + 0,59

4,03 + 1,93

2,3+ О

3,4+ 0,22

3,3+ 0,64

196 мгlмл

25,7+ 4,2

19,7+ 2,9 25,0+ 3,6

25,0+ 2,1

21,0+ 2,7

Фагоцитарный индекс

63,5+ 17,4

80,0+ 2,8

63,5+ 6,2

66,6+ 9,9

43,6+ 7,7 (%) Фагоцитарное число

5,43 + 3,03

3,62 + 0,73

2,31+ 0,4

1,8 + 0,6

3,78+ 2,23

34,58 + 15,51 42,70 + 2,40 61,20 + 10,63 53,44 + 11,66 54, 30 + 14,50

47

10

20

Таблица2

Показатели резистентности

Розеткообразующие клет1

1794453

Продолжение табл,2

Таблица3

Составитель M.Õàð÷åíêo

Техред М.Моргентал . Корректор Н.Бучок

Редактор В.Трубченко

Производственно издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 383 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5