Способ культивирования микроводорослей

 

Использование: биотехнология, получение биомассы микроводорослей. Сущность изобретения: готовят питательную среду, содержащую азотнокислый калий или натрий , меченыйизот6прм 15М, гв концентрации 1,5-2,0 г/л и другие соли, необходимые для роста водорослей, среду засевают водорослями , такими как Chlorella sp., Splrullna platensis, с плотностью 30-50 мг/л по сухому весу и культивируют при освещении 250- 300 Вт/м2 до прекращения прироста биомассы. Способ позволяет получить биомассу с равномечеными азотсодержащими соединениями.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 4867592/13 (22) 19,09.90 (46) 30.03.93, Бюл. ¹ 12 (71) Институт физиологии растений им, К.А,Тимирязева (72) Л,Н.Цоглин, В,Е.Семененко и И.П.Маслова (73) Институт физиологии растений PAH (56) Владимирова М.Г., Семененко В,Е. Интенсивная светокультурэ одноклеточных водорослей. M., 1962.

Авторское свидетельство СССР

¹ 1555354, кл, С 12 И 1/12, 1990, Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам культивирования микроводорослей, и может быть использовано для получения биомассы, меченой стабильными изотопами, применяемой для изучения пространственной структуры природных молекул, их информационных превращений, функциональных взаимодействий и в медицинской диагностике, Цель изобретения — получение меченых азотсодержащих соединений в биомассе микроводорослей.

Это достигается новым способом культивирования микроводорослей, предусматривающем засев микроводорослей на питательной среде, содержащей изотопы, культивирование их при барботировании гэзовоздушной смесью и освещении, причем в качестве изотопов используют изотоп N .. в виде эзотнокислого натрия или калия в

1806184 АЗ (я)ю С 12 и 1/12 (54) СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКРОВОДОРОСЛЕЙ (57) Использование: биотехнология, получение биомассы микроводорослей. Сущность изобретения: готовят питательную среду, содержащую азотнокислый калий или натрий,меченый изотопом N, в концентрации 1,5-2,0 г/л и другие соли, необходимые для роста водорослей, среду засевают водорослями, такими как СЫоге!!а sp., Splrulina

platensis, с плотностью 30-50 мг/л по сухому весу и культивируют при освещении 250300 Вт/м до прекращения прироста биомассы. Способ позволяет получить биомассу с равномечеными азотсодержащими соединениями. концентрации 1,5-2,0 г/л. засев среды осуществляют с плотностью 30-50 мг/л по су- ф хому весу, освещение с интенсивностью

200-300 Вт/м, э культивирование до прег кращения прироста биомассы, Повторное засевание ведут выращен- 00 ной биомассой на свежей питательной среде.

Пример 1, Культуру микроводоросли в

СЫоге!!а зр К из коллекции ИФР AH СССР, р в количестве 30 мг/л по сухому весу засевают на питательную среду следующего состава (г/n): К йОЗ-2,0; Mg SO<*7H20-2,5; кн2ро -1,25; сеяо1 7н,о-0.009: ETTA - .Р

0,037; раствор микроэлементов 1 мл. Выра- (Д щивание микроводоросли проводят при 36 С с интенсивностью освещения 250 Вт/м круклосуточно при непрерывном барботировании воздушной смесью до прекращения прироста биомассы. Концентрация изотопа азота в культуральной среде равна

1806184

Ф

j!

13 мг/л. Полученную биомассу исследуют; белок — 447ь, свободные аминокислоты—

8,77; нуклеиновые кислоты — 1,17: пигменты — 3,27ь; липиды — 16 )(,; углеводы — 307ь.

Il р и м е р 2, Культуру микроводоросли

ChIorella С-9, из коллекции ИФР AH СССР, в количестве 40 мг/л по сухому весу эасеивают на питательную-среду следующего состава (r/ë): К МОэ — 2,0; М9$04*7НрΠ— 2,25;

КН2Р04 — 0,63; Ре$04*7Н20 — 0,005; ЕДТА—

0,037; раствор микроэлементов 1 мл. Выращивание микроводоросли проводят при

36 С с интенсивностью освещения 300 Вт/м круглосуточно при непрерывном барботировании гаэовоэдушной смесью Щ СОз) до прекращения прироста биомассы, Концентрация изотопа азота в культуральной среде равна 21 мг/л. Полученную биомассу исследуют: белок — 48 ; свободные аминокислоты — 5,2 ; нуклеиновые кислоты — 1,57,; пигменты — 1,5 ; липиды — 187; углеводы—

25,8 .

Пример 3. Культуру микроводоросли

Spyruiina platensls и коллекции ИФР АН

СССР в количестве ЬГ мг/л по сухому весу засевают на питательную соеду следующего состава (г/л): Na ЧОэ — 1,8; МаНСОа—

16,8; М9$04+7Н20 - 0,2: К НРО4 — 0,5, К2$04 — 1,0; NaCI 1,0 СаО2 — 0,04;

Ге$04*7Н20 — 0,01; =ДТА — 0,08; раствор микроэлементов 1 мл Выращивание микроводоросли проводя r . ри 31 С с интенсивностью освещения 25 ) Вт/м круглосуточно

2 при непрерывном барботировании воздушной смесью до прек;"ащения прироста биомассы. Концентрация изотопа азота в культуральной среде равна 28 мг/л. Полученную биомассу исследуют: белок — 63, свободные аминокислоты — 4,47 .; нуклеино вые кислоты — 1,1%; пигменты — 2,5 )(,; липи ды — 10 ; óãëåâîäû — 12,, Пример 4. Культуру:аикроводоросл.i

Spyrulina minima из коллекции ИФР АН

СССР в количестве 40 мг/л по сухому весу засевают на питательную среду следуюш .госостава(г/л); Na йОэ-1,8 МаНСОа-6 О, М9$04*7Н20 — 0,2; К2НРОа - 0,5; К2$г :

0,5; йаС! — 1,0; СаО2 — О,п4 е$0а*7НрС0,01; ЕДТА — 0.08 раствор микроэлемент;ов

1 мл. Выращивание микроводорогли проводят при 26 С с интенсивн стью освещения

200 Вт/tube круглосуточнс при непрерывном барботировании воздушнсй смесью до пре

35 кращения прироста биомассы, Концентрация изотопа азота в культуральной среде равна 22 мг/л. Полученную биомассу исследуют: белок — 52, свободные аминокислоты — 9,47; нуклеиновые кислоты — 2,0 ; пигменты — 3,07, липиды — 15,6 ; углеводы

- 180, Пример 5. Культуру микроводоросли

СЫогеИа эр К, полученную по примеру 1, в количестве 500 мг/л по сухому весу засевают на питательную среду следующего состава (г/л); К ЙОз — 2,0; М9$04*7НгΠ— 2,5;

КН2РОа — 1,25; Fe$04*7Hz0 — 0,009; ЕДТА—

0,037; раствор микроэлементов 1 мл, Выращивание микроводоросли проводят при

36 С с интенсивностью освещения 250 Вт/м круглосуточно при непрерывном барботировании воздушной смесью до прекращения прироста биомассы. Полученную биомассу исследуют, белок — 44%; свободные аминокислоты — 8,7 ; нуклеиновые кислоты — 1,1 ; пигменты 3,2 ; липиды—

16 ; углеводы — 30 .

Результаты примеров 1-4 свидетельствуют о том, что заявляемый способ культивирования микроводорослей позволяет получить биомассу микроводорослей, содержащую меченые азотсодержащие соединения. Потери изотопа азота не превышают

1,47,.

Пример 5 доказывает воэможность использования клеток микроводорослей, содержащих меченые азотсодержащие соединения, в качестве инокулята для повторных засевов на среду, содержащую.изотоп азота, Формула изобретения

Способ культивирования микроводорослей, предусматривающий посев микро- водорослей на питательную среду, содержащую изотопы, культивирование их при барботировании гаэовоздушной смесью и освещении, отличающийся тем, что, с целью получения меченых азотсодержащих соединений в биомассе микроводорослей, из изотоповв используют изотопы 5N в виде аэотнокислого натрия или калия в концентрации 1,5-2,0 г/л, посев на среду осуществляют с плотностью 3050 мг/л по сухому. весу, освещение — с интенсивностью 200-300 Вт/м, а культивирова2 ние — дс прекращения прироста биомассы.