Вещество, повышающее стрессоустойчивость

 

Изобретение относится к медицине, а именно к физиологии, и касается вещество, повышающее стрессоустойчивость. Целью изобретения является повышение специфической активности. Сущность изобретения заключается в использовании водного экстракта дереворазрушающего гриба ложного дубового трутовика в качестве средства, повышающего стрессоустойчивость в эксперименте . Положительный эффект заключается в повышении активности к гипертермии и ожоговому шоку, а также протекторной активности при лучевом поражении, к воздействию гипоксии и гиперкапнии, а также при здреналовом отеке легких и эмоционально-иммобилизационном стрессе. 9 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (st)s А 61 К 35/78

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4871539/14 (22) 08.10.90 (46) 07.05.93,Бюл. ¹ 17 (71) Минский государственный медицинский институт (72) В.А.Переверзев, Е,В.Переверзева, А,И,Кубарко, И.Н.Семененя, В,П,Новиков, Л,В.Бутько, А.И,Хоменко и А.И.Головко (56) Авторское свидетельство СССР

¹ 1473140, кл. А 61 К 35/78, 1988.

Рудаков В,Ф. Высшие грибы и их физически активные соединения. Л.: Наука, 1973, с.49-52. (54) ВЕЩЕСТВО, ПОВЫШАЮЩЕЕ СТРЕССОУСТОЙЧИ ВОСТЬ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к физиологии, и касается вещество, Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к физиологии.

Цель изобретения — повышение активности к стрессу.

Влияние предлагаемого вещества и некоторых других соединений на устойчивость мышей к действию острой кратковременной гипертермии приведено в табл.1.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве средства, повышающего срессоустойчивость организма млекопитающих, предлагается использовать водный экстракт, полученный из высшего дереворазрушающего гриба — ложного дубового трутовика (Phellinus robustus /P.Karsten et

Lalz) (ЛДТ). Длительность получения данного (устойчивого к действию высокой температуры) средства из исходного сырья (плодовых тел гриба) не превышает 2 ч.

« . Ы„„1813446 А1 повышающее стрессоустойчивость. Целью изобретения является повышение специфической активности. Сущность изобретения заключается в использовании водного экстракта дереворазрушающего гриба ложного дубового трутовика в качестве средства, повышающего стрессоустойчивость в эксперименте. Положительный эффект заключается в повышении активности к гипертермии и ожоговому шоку, а также протекторной активности при лучевом поражении, к воздействию гипоксии и гиперкапнии, а также при адреналовом отеке легких и эмоционально-иммобилизационном стрессе. 9 табл.

Известна противовоспалительная активность водного экстракта, получаемого из высшего дереворазрушающего гриба ложного дубового трутовика. Сведений же о том, что упомянутый экстракт можно использовать для повышения устойчивости млекопитающих к действию экстремальных факторов внешней среды, в источниках патентной документации и научно-медицинской информации не обнаружено.

Водный экстракт из ложного дубового трутовика получают следующим образом.

Грубодисперсный порошок, полученный из сухих плодовых тел ложного дубового трутовика, вносят в колбу и заливают кипящей дистиллированной водой в соотношении 1:10 и кипятят 30 мин на водяной бане. Полученный отвар охлаждают до комнатной температуры и фильтруют. Получен1813446

40 ном виде гипертермии серотонин, экстракт чаги (настой), предлагаемое средство и интал в дозе 20 мг/кг. Следует отметить, что защитное действие водного экстракта из ложного дубового трутовика при остром перегревании мышей сохраняется и в случае перорального введения средства. Получение экстракта чати при высокой температуре (отвар) . существенно снизило фармакологическую активность прототипа, 45

Экстракт ложного дубового трутовика и прототип использовали для повышения устойчивости млекопитающих к действию ожоговой травмы, которую моделировали путем погружения нижней (3/4) части тела в горячую воду (70 С) на 4 с. Эксперименты показали (табл.2), что выраженность защитного действия экстракта из ЛДТ (ложного дубового трутовика) зависит от вводимой дозы и сохраняется при пероральном введении. Защитное действие прототипа при ожоге зависило от условий экстракции средства. Водный экстракт чаги, полученный при комнатной температуре, повышал. а отвал гриба не влиял на выживаемость мышей при ожоговом шоке.

55 ное средство представляет собой прозрачный или слегка опалесцирующий раствор коричневого цвета или порошок, получаемый после лиофильной сушки.

Водный экстракт из чаги (прототип) пол- 5 учали вышеназванным способом (по тексту он называется отвар из чаги) и путем настаивания при комнатной температуре (Рудаков, 1973) (по тексту он называется настоем чаги).

Пример 1. Повышение стрессоустойчивости организма млекопитающих к гипертермии и ожоговому шоку.

В первой серии опытов, выполненной на белых нелинейных мышах обоих полов (246 животных), изучалось влияние различных доз полученного средства в сравнении с прототипом и с известными противовоспалительными и антигистаминными средствами на устойчивость животных к 20 кратковременной гипертермии, которую вызывали у грызунов путем их помещения в термокамеру (60 С) на 17 мин, Препараты вводили за 30 мин до нагрева внутрибрюшинно, 25

Опыты показали (табл.1), что ни салицилат натрия (классическое противовоспалительное и гипотермическое средство), ни антигистаминные препараты (димедрол и дипраэин), ни отвар коры дуба (обладающий противовоспалительным и вяжущим действием) не влияли на выживаемость мышей при кратковременном их перегревании. Повышали выживаемость животных при данПример 2. Протекторная активность при лучевом поражении. Эксперименты по изучению способов повышения устойчивости млекопитающих к действию ионизирующего излучения проводились на белых беспородных крысах обоих полов различных возрастных групп (120 животных и белых нелинейных мышах обоих полов массой

18-25 г (240 животных). Экстракт из ЛДТ вводился в дозе 1/32, 1/8 и 1/2 от СД э и

1/10 от СД5о. Прототип вводился в эквивалентной дозе Зх1/8 от СДы. В качестве стандартного радиозащитного средства для сравнения применяли серотонин (50 мг/кг) и цистамин (75 мг/кг). Все исследуемые соединения вводили за 30-60 мин до облучения на универсальной гамма-установке (УГУ-420) в дозах 6-8 ГР при мощности дозы гамма-излучения 5сГР/с. За животными наблюдали 30 суток. Изучали выраженность клинической картины лучевой болезни: среднюю продолжительность жизни павших животных и динамику изменения массы тела из-за развивающейся диареи.

Опыты показали (табл.4 и 5), что предлагаемое средство обладает выраженным радиопротекторным действием, Фактор уменьшения дозы равен 1,4 и сопоставим с таковым у цистамина и серотонина. Высокий терапевтический индекс (23,5) указывает на очень низкую токсичность препарата при сравнении с таковой для таких известных радиопротекторов как цистамин (1,5) и серотонин (7,0), Протекторный индекс препарата значительно превосходит таковой для цистамина и в меньшей мере для серотонина, что указывает на большую широту

eto терапевтического действия по сравнению со стандартными радиопротекторами, Оптимальные радиозащитные дозы препарата составляют 1/8 от СД1е (278 мг/кг—

1/10 от СД5о (375 мг/кг). Предлагаемое средство превосходит по своей активности прототип. Следует отметить, что радиозащитное действие препарата сохраняется как у взрослых животных (крыс) репродуктивного периода, так и у крысят инфантильного периода в том числе и при его пероральном применении, Пример 3. Повышение устойчивости животных к действию гипоксии и гиперкапнии.

Опыты по изучению устойчивости животных к гипоксиям различного происхождения проведены на белых беспородных крысах-самках массой 150-220 г (45 животных) и белых нелинейных мышах обоих полов массой 18-25 r (64 животных).

Препараты, полученные иэ ЛДТ путем кипячения на водной бане и из чаги при ее наста1813446

6 ивании в условиях комнатной температуры, в виде 10%-ных растворов вводили животным в/б в дозах 2 и 10 мл/кг массы тела за

30 мин до воздействия. Острую гипоксичную гипоксию вйзывали путем подъема животных в барокамере на высоту 12 км (первые 6 км за 1 мин, последующие 6 км со скоростью 1 км/мин). Гиперкапническую гипоксию моделировали путем помещения животных в гермокамеру обьемом 250 мл.

Результаты экспериментов представлены в табл,6. Из них видно, что процент выживших животных после 8-минутного пребывания на высоте 12 км в опытной группе был в 9,2 (р<0,01) раза выше, чем в контрольной. Увеличивалась устойчивость животных и к действию гиперкапнии при введении им средства из ЛДТ. Длительность пребывания животных в условиях гермообьема увеличилась при этом в 1,35 раза (р<0,05).

Пример 4. Защитное действие некоторых фармакологических препаратов при адреналиновом отеке легких. Отек легких вызывали внутрибрюшинным введением адреналина-гидрохлорида (0,1%-ный раствор) в дозе 9,0 мг/кг. Препараты вводили за 30 мин до применения адреналина внутрибрюшин ко, Эксперименты показали (табл.7), что наиболее, выраженным протекторным действием при отеке легких обладали а-адреноблокатор фентоламин (100%-ная защита от гибели опытных крыс) и экстракт из ЛДТ, при введении которого выжило

40,0 +16,3% животных, Все остальные препараты: прототип (настой), обзидан, (а-адреноблокатор) димедрол и дипразин (блокаторы Í1-гистаминовых рецепторов) не влияли на выживаемость животных при адрекалиновом отеке легких.

Таким образом, эксперименты показали, что предложенный способ повышения стрессоустойчивости оргакизма млекопитающих путем введения экстракта из ЛДТ превосходит таковой при применении прототипа. Кроме того, еще одним важным отличительным признаком экстракта из ЛДТ является его более низкая токсичность и большая устойчивость к действию высоких температур по сравнению с прототипом;

Как показали эксперименты (табл.3). СДщ для экстракта из ЛДТ составляет 3748 мг/кг, а для прототипа 1000 + 311 мг/кг, для коры дуба 958 4- 275 мг/кг. Не оказывало токсического действия на организм и длительное как паратеральное, так и пероралькое введение водного экстракта из ЛДТ крысам обоих полов, 15 дневная замена воды в поилках на отвар ложного дубового трутовика (при соотношении сырье: экстрагент 1:100) не влияла на содержание лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобина, величину цветного показателя, уровень СОЭ и циркулирующих имунных комплексов, гемолитическую активность комплемента (табл.8). Не было разницы при этом и в некоторых других показателях; подвижности животных в тесте открытого поля, температуре тела, массе

10 тных и удлинять их пребывание в условиях действия экстремальных факторов, не оказывая при этом токсического действия на организм млекопитающих.

Учитывая наличие выраженного клинического стресса у домашних и сельскохозяйственных животных при их лечении, было предложено провести клинические испытания предлагаемого способа в условиях экспериментальной клиники при лечении собак.

Пример 5. Повышение резистивности организма к действию эмоционально-иммо30

35 билизационного стресса

Исследования проведены на базе экспериментальной клиники МГМИ на собаках

40 различных пород массой 5-15 кг. В опытной и контрольной группах было по 6 животных.

У иммобилизованных на спине в течение

10-15 мин животных регистрировали электрокардиограмму (ЭКГ) во 11 стандартном отведении и забирали (после записи ЭКГ) кровь из бедренной вены для иммунологического и общеклинического анализов. Эти манипуляции с собаками производили до применения средства и через 5,15 и 30 дней после его использования. Экстракт добавляли животным в творог в дозе 200 мг ка животное (один раз в сутки) ежедневно в течение 31 дня.

Установлено, что у всех животных в исходном состоянии отмечаются при иммобилизации выраженные нарушения сердечного ритма (табл.9). Отношение числа сердечных сокращений (ЧСС) к числу внеочередных сокращений (ЧВС) (т.е, когда разница в длительности двух соседних интервалов PP превышает 10 ) составляет

1,61 0,12 единиц. тела и внутренних органов. Увеличение длительности потребления крысами (до 48 дней) водного экстракта из ЛДТ (причем соотношение сырье:экстрагент было 1:10)

15 вместо питьевой воды также не вызывало видимых изменений в поведении животных, изменение массы тела и внутренних органов.

Следовательно, предлагаемый способ

20 позволяет повышать выживаемость живо1813446

Таблица 1

Препарат

N. пlп ф, выживших мышей

Доза

Число животных погибших в группе выживших

Контроль

Серотонин

Интал

2

4

6

8

9 . 10

11

81

23

16

16

76

14

9

9

17

62 й27

652 й9,3»

12,5 й8,5

62,5 + 12,5*

10,0 + 10.0

10,0 и 10.0

10,0 и 10.0

Qir 15,6+8,2

60,0 + 16,5*

100 4-100

3

10 мг/кг

5 мг/кг

20 мг/кг

10 мг/кг

10 мг/кг

5 мл/кг

500 мг/кг

50МПД/кг

5 мл/кг

5 мл/кг

Димедрол

Дипразин

Отвар коры дуба

Салицилат натрия

° Пирогенал

Экстракт из чаги

Отвар из чаги

Предлагаемое средство

8

5

60,0 + 16,6», 615 й141»

60,0 + 16 5*

5 мл/кг

25 мл/кг

25 мл/кг

13

13

Примечанйе: все препараты вводились внутрибрюшинно, кроме предлагаемого средства, которое животным 13-й группы вводилось через зонд в желудок.

» — р<0,01 по отношению к группе 1 (контролю).

У контрольных собак на 15-й день существенной динамики не отмечается. Отношение ЧСС/ВЧС равно 1,55 + 0,12 единицы. У опытных же животных этот показатель увеличивался до 2,62 + 0,34 (р<0,05). Это свидетельствует о стабилизации сердечного ритма и уменьшении числа внеочередных сокращений в 1,69 раза у опытных собак.

Кроме того, у животных на ЭКГ в исходном состоянии имеются признаки ишемии миокарда: отрицательные зубцы Т, опущение сегмента ST ниже изолинии. У опытных собак при этом под действием экстракта из

ЛДТ наблюдается скорейшее исчезновение этих признаков по сравнению с контролем.

Анализ показателей системы крови показал, что они у опытных и контрольных животных соответствуют данным литературы. Не выявлено достоверных различий в показателях и в динамике наблюдения за контрольными животными-(табл.9). У опытных же животных по сравнению с контролем лишь достоверное увеличение количества лейкоцитов на 347 (р<0,05) через 15 дней после приема экстракта из ЛДТ. При этом у опытных собак была выше и функциональная активность лейкоцитов, о чем свидетельствует увеличение числа фагоцитирующих лейкоцитов в 1,23 раза (р<0,005) и числа фагоцитируемых одним нейтрофилом ста5 филлококков в 1,43 раза (р<0,01)., Таким образом, предлагаемый способ повышения стрессо-устойчивости организма млекопитающих может найти уже сегодня широкое применение в ветеринарии при

10 лечении и перевозках домашних и сельскохозяйственных животных для профилактики стрессорных повреждений при вынужденной их лечебной или транспортной иммобилизации. Кроме того, предлагаемое для

15 данного способа средство не оказываеттоксического воздействия на организм млекопитающих разных видов (мыши, крысы, собаки) как при остром, так и при хроническом введении в рекомендуемых дозах.

Формула изобретения

Применение водного экстракта высшего дереворазрушающего гриба ложного дубового трутовика (Phelllnus robustus/Р.

25 Karsten / Bourd et Lalz) в качестве вещества, повышающего стрессоустойчивость, 1813446

Таблица 2

Изменение устойчивости мышей к ожоговому шоку после введения животным некоторых фармакологических препаратов

Примечание; в/б — внутрибрюшное введение препаратов; в/ж — введение препаратов в желудок через зонд;

* — p<0,05 по отношению к контрольной группе; ожоговый шок у мышей вызывали путем погружения нижней (3/4) части тела в горячую воду (70 С) на 4 с, Таблица 3

Острая токсичность предлагаемого средства при внутрибрюшинном введении в сравнении с прототипом

*р<0.01 по отношению к животным, которым вводили отвар коры дуба или настой чаги

Таблица 4

Сравнение радиозащитного действия предлагаемого средства и известных радиопротекTGPo8

Группа животных

М пlп

Доза, мг/кг

Число мышей

Признаки острой л чевой болезни в серии падение массы твла в г

>30

Отсутствовало

100

100

11,0 й2,0

17,5 +3,2

10 О й3,9

40.0 11,2*

4,9б " 0,13

4,47+ 0,21

Биологический контроль

Контроль облучения

Се отонин процент выживших после облучения животных . продолжител ьность жизни погибших мышей в нях

1813446

Продолжение таблицы 4

П р и м е ч а н и е: Препараты вводили за 30-60 мин до облучения животных в дозе 7,0 ГР при мо цности дозы излучения 5 сГР/с.

* — различие достоверно при сравнении с контролем

Таблица 5

Сравненйе защитных и токсичных доз экстракта из ЛДТ и "классических" радиопротекторов при их внутрибрюшном введении.

Примечание: ЛДТ вЂ” ложный дубовый трутовик.

Таблица 6

Повышение устойчивости животных к острой гипоксической (A) или гиперкапнической (Б) гипоксиям после внутрибрюшинного введения им предлагаемого средства и прототипа

1S13446

Продолжение таблицы 6

Примечание: препараты применяли в виде 10%-ных растворов;

* — р<0,05 по отношению к контролю

Таблица 7

Влияние предлагаемого средства в сравнении с некоторыми другими препаратами на выживаемость животных при адреналиновом (9,9 мг!кг) отеке легких. Препараты вводили внутрибрюшинно за 30 мин до применения адреналина.

* — р<0,05 по отношению к контролю. таблица8

Некоторые покааатели крови после ежедневного в течение 15 дней употребления отвара ложного дубового трутовика (1: )Co) вместо питьевой воды соэ ческая активность комплекса

Контроль

3,44 о,78

31,9

0,85

0,077 о, оо8

6, 173

5,8

6,5

0,03

О, Опыт и 9

0,077

166

8,2 10з

0 65 1Оз

0,9!

8,!

o,î77

)0,05

0,05

5,3

О, : 0,05 0,05 С,05 то,05

0,05

Количество лейкоцитов в 1мкл кров п = 9

8,08 10З

0,36 ° От

I:îëè÷åство э ри троц итов

1 нкл крови ьг !О

29 10

Ог. 106

27.!Р

Гемоглобин, г/л

Цветной покаватель

Ц Р1к (циркулируя! на иммунные комплексы) СН 50 общая гемолити1813446

Табл и ца.9

Динамика некоторых показателей системы крови у контрольных (1) и опытных (2) собак.

Примечание; * — достоверно по сравнению с исходными величинами.

Составитель Г.Шишкин

Техред M.Ìoðãåíòàë Корректор С.Пекарь

Редактор

Производственно-издательский комбинат "Патент", r Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 1795 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5