Производные 2-амино-4-морфолино-6-пропил-1,3,5,-триазина в виде свободного основания или в виде гидрохлорида, обладающие активностью потенциализации холинэргического эффекта, улучшающего память и способность к учению

 

Изобретение касается гетероциклических соединений, в частности 2- амино- -морФолино-6-пропил-1,3,5Настоящее изобретение относится к новым производным 2-амино- -морфолино-6-пропил-1,3,5-триазина общей формулы I х, V N-fN 2 СН СНлСН триазинов, моноили дизамещенных по 2-аминогруппе, или их гидрохлоридов, обладающих активностью потенциализации холинэргического эффекта, улучшающего память и способность к учению , что может быть использовано в медицине. Цель - создание новых веществ указанного класса с новым видом биологического действия. Синтез ведут взаимодействием 2-хлор- -мор- .фолино-б-пропил-1,3,5-триазина с соответствующим моноили дизамещенным амином при кипячении в растворителе с выделением продукта в виде его гидрохлорида или свободного основания. Соединения исследованы на тесты: потенциализация холинэргических эффектов оксотремолина, торможение чрезмерной активности, вызванной скополамином, торможение эффектов скополамина на полосе 6,-9,6 Гц ЭЭГ, мнезическое удержание. Новые соединения превосходят известный препарат физостигмин. Новые соединения малотоксичны , их смертельная доза составляет 700-1100 мг/кг в противоположность 0,82 мг/кг у физостигмина. 7 табл. в форме свободного основания, когда R - водород или метил и R2 - 2-гидроксиэтил или ацетил,или R, - водород и R2 - гидроксильная группа, 1-этил2-гидроксиэтил , 2-метоксиэтил, диметиламиногруппа, 2-(ацетокси)этил или (диметиламино) карбонил, или в виде гидрохлорида, когда Ј 00 ю ю 4 О СО со

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 С 07 D 413/04, A 61 K 31/535//

//(С 07 D 413/04, 251:18, 295:14) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

11м(Ф 1,19, 11 ° 4*мЕСЧ41, (21) 4742645/04 (62) 4614758/04 (23) 15.08 ° 89 (22) 21. 12.89 (31) 88 19493 (32) 16,08.88 (33) СВ (71) ЮЦБ С.А. (BE) (46) 15.06.93. Бюл. 1" 22 (72) Эрик Коссманн, Жан Гобер, Ролан Буаден и Жак Матье (BE) (56) Выложенная заявка Японии

М 69688/74, кл, 16 Е 47, опублик.

1974 °

Машковский М.Д. Лекарственные соедства. М.: Медицина, ч.1, !986, 221, 239. (54) ПРОИЗВОДНЬ1Е 2-АМИНО-4-МОРФОЛИНО6-ПРОПИЛ-1,3,5-ТРИАЗИНА В ВИДЕ СВОБОДНОГО ОСНОВАНИЯ ИЛИ В ВИДЕ ГИДРОХЛОРИДА, ОБЛАДАЮЩИЕ АКТИВНОСТЬЮ ПОТЕНЦИАЛИЗАЦИИ ХОЛИНЭРГИЧЕСКОГО ЭФФЕКТА, УЛУЧШАЮЩЕГО ПАМЯТЬ И СПОСОБНОСТЬЮ

К УЧЕНИЮ (57) Изобретение касается гетероциклических соединений, в частности 2амино-4-морфолино-б-пропил-1,3,500

M М

° Р

Настоящее изобретение относится к новым производным 2-амино-4-морфолино-б-пропил-1,3,5-триазина общей форГОСУДАРСТВ Е Н Н ОЕ ПАТЕ НТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (I ОСПАТЕНТ СССР) мулы I

N .- 1 о и — К У М1.И Р2

2 2 3

„„ 4 „, 1822403 А3 триазинов, моно- или дизамещенных по

2-аминогруппе, или их гидрохлоридов, обладающих активностью потенциализации холинэргического эффекта, улучшающего память и способность к учению, что может быть использовано в медицине. Цель - создание новых веществ указанного класса с новым видом биологического действия. Синтез ведут взаимодействием 2-хлор-4-мор.Фолино-б-пропил-1,3,5-триазина с соответствующим моно- или дизамеценным амином при кипячении в растворителе с выделением продукта в виде его гидрохлорида или свободного основания.

Соединения исследованы на тесты: потенциализация холинэргических эффектов оксотремолина, торможение черезмерной активности, вызванной скополамином, торможение эффектов скополамина на полосе 6,4-9,6 Гц ЭЭГ, мнезическое удержание. Новые соединения превосходят известный препарат физостигмин. Новые соединения малотоксичны, их смертельная доза составляет

700-1100 мг/кг в противоположность

0,82 мг/кг у физостигмина. 7 табл, в форме свободного основания, когда

R1,— водород или метил и

R — 2-гидроксиэтил или ацетил,или а

R — водород и

R — гидроксильная группа, 1-этил2-гидроксиэтил; 2-метоксиэтил, диметиламиногруппа, 2-(ацетокси)этил или (диметиламино) карбонил, или в виде гидрохлорида, когда

1822403

R — водород или метил и

R< — ацетил или бензоил, имеющим активность потенциалиэации холинэргического эффекта, улучшающего память и способность к учению.

Указанные свойства позволяют предпопагать возможность применения этих соединений в медицине.

Известны 2-амино-1,3,5-триазины, замещенные в - положении 4 аминоо группой, которая моно- или дизамещена радикалом алкил, алкенил, циклоалкил, арил или аралкил, или азотным гетероциклическим радикалом, и в положении 6 алкилом, арилом или аралкилом, в частности, 2-амина-4-морфолино-6пропил-1,3,5-триазин. Эти соединения обладают свойством повышения секреции гормОИОв кОры надпОчечникОв и В частности, I-IIIQKQI-opMQHOB коры надпочечников.

Целью изобретения является получение новых производных 2-амино-4-морфолино-б-пропил-1,3,5-триазина, или их гидрохлоридов, обладающих новым видом биологического действия в этом ряду соединений.

Новые 2-амино-4-формолино-6-пропил-1,3,5-триазины формулы I обладают 0 свойством повышения потенциала центральных и периферийных холинэргических эффектов, вызванных холиномиметическим агентом, таким как, например, оксотреморин в то время, как сами новые соединения не обладают собственным холинэргическим эффектом.

Кроме того, эти соединения обладают преимущественным свойствам ослабления эффектов при пониженной холинэргической деятельности, вызванной холинэргическим антагонистом таким, как, например, скополамин. Холинэргическая система широко связана с явлениями запоминания и обучения. Введение молодым пациентам антихолинэргического агента такого, как скополамин, вызывает недостатки памяти, похожие на недостатки памяти у пожилых людей. Наоборот, холинэргические агенты, как физостигнин, способны бо- 50 роться с амнезией, вызванной введением антихолинэргических агентов.

Кроме того, в настоящее время установлено, что наиболее часто встречающимся признаком, связанным со crа; боумием является именно разрушение холинэргической системы, Вот почему, новые соединения могут быть использованы для лечения нарушений сознания и поведения, связанных с возрастом и синдромами слабоумия, в частности, при лечении нарушений, связанных с болезнью Альцхаймера, старческим слабоумием типа Альцхаймера и с любой развивающейся патологией сознания.

Пример 1. Получение 2-1(4морфолино-б-пропил-1,3,5-триазин-2ил)амино) -этанола (соединение I).

Растворяют 145,5 r (0,6 моль) 2хлор-4-морфолино-б-пропил-1,3,5-триазина в 600 мл диоксана. В этот раствор вводят, по каплям и при хорошем перемешивании, примерно за 80 минут, раствор 444 г (7,28 моль) 2-аминоэтанола в 600 мл диоксана. Затем реакционную смесь нагревают в рефлюксе в течение 7 часов. Образовавшийся гидрохлорид 2-аминоэтанола охлаждают, декантируют и удаляют диоксан под пониженным давлением. Полученный осадок растворяют в 5 литрах диэтилового эфира. Этот раствор промывают водой, а промывочную воду повторно экстрагируют дихлорметаном. Органические фазы объединяют и высушивают на сульфате магния. Удаляют растворитель под пониженным давлением. Полученный твердый осадок рекристаллизируют в смеси 50:50 (объем) этилацетат-петролейный эфир. Получают 169,8 г

2-((4-морфолино-б-пропил-1,3,5-триазин-2-ил)амино) -этанола.

Выход: 88 . Температура плавления: 95-99 С.

Анализ для С„ Н,И О в ь

Вычислено: С 53,91, Н 7,92, N 26,20.

Найдено: С 54,30, Н 8,10, N 26,13.

2-((4-морфолино-б-пропил-1,3,5триаэин-2-ил)амино)"этанол может быть представлен в двух различных кристаллических Формах в зависимости от рекристаллизации продукта в метаноле (температура плавления: 97-99 C) или в толуоле (температура плавления:

89-90 С).

Таким же образом получают соединения формулы I, приведенные в табл. 1.

Пример 2. а) Получение ис" ходного 2- ((4-хлор-б-пропил-1,3,5триазин-2-ил)амино1-этанола.

При температуре окружающей среды добавляют по каплям 24,4 г (0,4 моль, 2-аминоэтанола, растворенного в

100 мл диоксана, в раствор 38,4 г

22403

Выход: 74ь. Температура плавления: 131-133 С.

Полученный продукт растворяют в

55 изопропиловом спирте в горячем состоянии. В этот раствор добавляют эквивалентное количество хлористоводородной кислоты в растворе в этиловом эфире. Гидрсхлорид кристаллизуют пу5 18 (0,2 ноль) 2,4-дихлор-б-пропил-1,3,5триазина в 100 мл диоксана. После добавления выдерживают еще перемешивание в течение одной ночи. Фильтруют гидрохлорид 2-аминоэтанола, а фильтрат выпаривают под пониженным давлением. Полученный осадок рекристаллизуют в смеси этилацетат-гексан

50:50 (объем). Получают 41,5 г 2- (4хлор-б-пропил-1,3,5-триазин-2-ил)амино) -этанола.

Выход: 964. Температура плавления:

87-88 С

Анализ: для С в 1(< r.lN O в 4

Вычислено: С 44,34, H 6,00 N 25,88, С1 16,40.

Найдено: С 44,42. Н 6,17. N 25,69„

С1 16,52, e) Получение 2-((4-морфолино-6пропил-1,3,5-триазина-2-ил)амино этанола.

Вариант 1.

Смешивают 10,83 г (0,05 моль) 2((4-хлор-6-пропил- 1,3,5-триаэин-2ил)анино) -этанола и 8,7 г (0,10 моль) морфолина в 150 мл диоксана. Самопроизвольно повышают температуру смеси о до 41 С. Затем образовавшийся гидрохлорид морфолина нагревают в рефлюксе в течение 30 мин, затем охлаждают и фильтруют. Фильтрат выпаривают и рекристаллизуют осадок в смеси 50:50 (объем) этилацетат-гексан. Получают

11,8 г 2-((4-морфолино-6-пропил1,3,5-триазин-2-ил)амино) -этанола.

Выход: 88,4ь, Точка плавления:

93-94 С.

Рекристаллизированный в метаноле прсдукт плавится при 97-98 С и является идентичным соединению I, полученному по примеру 1.

Вариант 2.

Смешивают 10,83 г (0,05 моль) 2((4-хлор-б-пропил-1,3,5-триазин-2ил) амина) -этанола и 15, 15 г (О, 15 моль)

N-метилнорфолина в 100 мл диоксана.

Смесь нагревают в рефлюксе в течение

20 часов, затем охлаждают и удаляют диоксан под пониженным давлением.

Осадок растворяют в 200 мл этилацетата. Раствор промывают два раза посредством 50 мл воды, высушивают на сульфате натрия и концентрируют раствор. Продукт кристаллизируют в ходе выпаривания. Получают 9,23 г 2-1(4морфолино-б-пропил-1,3,5-триазин-2ил)амино)-этгнола, идентичного продукту, полученному по примеру 1.

Пример 3. а) Получение исходных 2-амино-4-морфолино-6-пропил1,3,5-триаэинов

1. 2 анино-4-морфолино-6-пропил1,3,5-триазина (гидрохлорид).

Смешивают 07 г (1 моль) морфолина и 8,6 г (0,05 моль) 2-анино-4хлор-б-пропил-1,3,5-триаэина. Темпе10 ратуру смеси самопроизвольно повышают до 54 С. Затем нагревают в рефлюксе я течение 5 часов. Реакционную смесь выпаривают под пониженным давI лением, а полученный осадок повторно

15 растворяют в этилацетате. Раствор промывают три раза водой, затем высушивают его на сульфате натрия. Растворитель удаляют под пониженным давлением, а осадок рекристаллизируют в

20 гексане. Получают 9,1 r 2-амино-4морфолино-б-пропил-1,3,5-триаэина, Выход: 824. Температура плавления:

127-128 С.

Гидрохлорид: температура плавле—

25 ния: 210-211 С (изопропиловый спиртэфир).

Анализ для С<ОН,т И ОНС1 в 4:

Вычислено: С 46,24,Н 6,94,И 26,97, С1 13,6830 Найдено: С 46,21, Н 6,90, N 26,78, С1 13,61.

2. 2-Иетиламино-4-морфолино-6-пропил-1,3,5-триаэин гидрохлорид.

В раствор,.содержащий 5,6 г

35 (О 03 моль) 2-хлор-4-метиламино-6пропил-1,3,5-триазина в 50 мл диоксана, добавляют раствор, содержащий

8,7 г (0,1 моль) морфолина в 50 мл диоксана. Смесь нагревают в рефлюксе в течение 5 ч. Затем охлаждают и фильтруют образовавшийся гидрохлорид морфолина, Растворитель удаляют под пониженным давлением, а осадок разбавляют в хлороформе. Промывают

45 водой и высушивают органическую фазу на сульфате натрия. Растворитель выпаривают, а осадок рекристаллизуют в этилацетате. Получают 5,3 г 2-метиламино-4-морфолино-б-пропил-1,3,550 TP11R3NHc3

1822403 тем охлаждения. Фильтруют, промывают этиловым эфиром и высушивают.

Выход: 753. Температура плавления:

177-178 С.

Анализ: для C„H, N O НС1 в Ж

Вычислено: С 48,26,Н 7,31, И 25,29, с1 12,97.

Найдено: С 48,38, Н 7>40, N 25>57„ с1-12,64 10 в) Получение 2-амино-4-морфолиноб-пропил-1,3,5-триазинов.

1. N-(4-морФолино-б-пропил-1,3,5триазин 2-ил)-ацетамид (соединение

21)

При температуре окружающей среды добавляют по каплям 4 г (0,05 моль) ацетилхлорида в раствор 11,2 г (0,05 моль) 2-амино-4-морфолино-6пропил"1,3,5-триазина в 100 мл без" 0 водного пиридина. Смесь перемешивают в течение 6 ч, затем оставляют в течение 48 ч. Гидрохпорид пиридина фильтруют и выпаривают фильтрат под пониженным давлением. Полученный оса- g5 док разбавляют один раз толуолом, который снова выпаривают. Затем осадок разбавляют дихлорметаном, промывают раствор водой и высушивают на сульфате натрия. Полученный после вы- 30 паривания осадок растворителя очищают хроматографией на двуокиси кремния (элюент: 90:10 (объем) дихлорметанэтанол), а продукт, в конечном итоге, рекристаллизируют в этилацетате, Получают 5,75 г N"(4-морфолино-6-пропил- l,3,5-триазин-2-ил)ацетамида.

Выход: 43,4Ж. Температура плавле» ния: 141-2 С (соединение 21а)

Гидрохлорид: температура плавле- 40 ния: 145-146 С (изопрппиловый спиртэфир), (соединение 21в)..

Анализ для С р Н (М П > НС1 в ь

Вычислено: С 47,76, Н 6,63,N 23,22, С1 11 >77, 45

Найдено: С 47,78„ Н 6,73, N 22,30

С1 11,62, 2. N-(4-морфолино-б-пропил-1,3,5триазин-2-ил)бензамид (гидрохлорид) (соединение 22)

В раствор 11,2 г (0,05 моль) 2амино-4-морфолино«б-пропил-1,3,5триазина я 200 мл дихлорэтана добавляют при температуре окружающей сре" ды, последовательно, раствор 7,7 г (0,055 моль) бензоилхлорида в 50 мл дихлорэтана и раствор 5,5 г (0,055 моль) триэтиламина в 50 мл дихлорэтана. Нагревают смесь в рефлюксе в течение

6 ч, затем ее охлаждают до температуры окружающсй среды. Последовательно промывают водой с водным раствором бикарбоната натрия, затем еще раз водой. Органическую фазу высушивают на сульфате натрия и выпаривают растворитель под пониженным давлением. Полученный осадок хроматографируют на двуокиси кремния (элюент: 95:5 (объем) дихлорметанэтанол), затем, в конечном счете, рекристаллизируют в смеси 50:50 (объем) эфир-гексан. Продукт образует гидрохлорид в эфире.

Таким образом, получают 12, 1 г гидрохлорида И-(4-морфолино-6-пропил1,3,5-триазин-2-ил)-бензамида.

Выход: 66 5ь. Температура плавления: 197-198 С.

Анализ: для C 11 „ О, НС1

Вычислено: С 56,12, Н 6,05, М 19,26, с1 9,77.

Найдено: С 56, 30, H б, 50, N 19, 16., С1 9,54.

Соединения, объединенные в табл.2, получают либо по методу примера 3в (1), либо по методу примера 3в (2).

Пример 4. 1,2- (2-(ацетокси)этил амино)-4-морфолино-6-пропил1,3,5-триазин)(соединение 37).

В раствор 13,4 г (0,05 моль) 2((4-морфолино-б-пропил-1,3,5-триазин2-ил)амино1-этанола (соединение 1, полу«енное по примеру 1) в 200 мл ° дихлорметана одновременно вводят, при температуре Оо-5 С, 4,3 r (0,055 моль) ацетилхлорида, растворенного в 50 мл дихлорметана, и 5, 5 г (0,055 моль) триэтиламина в растворе в 50 мл дихлорметана. Добавление этих двух реактивов регулируют таким образом, чтобы в реакционной среде кислотный хлорид всегда был в избытке по отношению к триэтиламину. Выдерживают перемешивание в течение одного часа при 5ОС, и затем, в течение

12 ч при температуре окружающей среды. Реакционную смесь последовательно промывают водным раствором бикарбоната натрия и водой. Высушивают на сульфате натрия и выпаривают растворитель под пониженным давлением. Осадок кристаллизуют в смеси толуол-гексан 1:2. Полученный продукт сначала очищают хроматографией на двуокиси кремния (элюент: 95:5 (объем) дихлорметанэтанол), затем его рекристаллизируют в смеси толуол-гексан 1:1. По 1822403

1О лучают 9,3 г 2- Г2-(ацетокси)этип амино1-4-морфолино-б-пропил- 1,3, 5триазина.

Выход: 603. Температура плавления:

94-95 С.

Анализ для C«Hz>N>0> в

Вычислено: С 54,37 H 4,77, N 22,65, Найдено: С 54,98. H 7,69,N 22,62.

Пример 5. Получение N,N-диметил-N (4-морфолино-б-пропил-1,3,5триазин-2-ил)мочевины (соединение

41) .

При температуре 20 С пропускают в течение трех часов, газовый поток диметиламина в растворе 5 г (0,0145 моль) (4-морфолино-б-пропил-1,3,5-триазин2-ил)карбамата фенила в 100 мл безводного дихлорметана. Затем оставляют смесь в течение 12 ч. Последовательно промывают ее разбавленным раствором гидроокиси натрия и водой. Органическую фазу высушивают на сульфате натрия и выпаривают растворитель под пониженным давлением. Полученный осадок кристаллизируют в смеси 50:50 (объем) этилацетат-гексан. Получают 1,7 г

N,N-диметил-N -(4-морфолино-б-пропил1,3,5-триазин-2-ил)мочевины.

Выход: 39,9>.

Температура плавления: 110-111ОС.

Анализ длл С Н ИвО в 1

Вычислено: С 53,06, H 7,48,1 28,57.

Найдено: С 53,20, H 7,69, N 28,67 °

2-Амино-4-морфолино-6"пропил1,3,5-триазины или их гидрохлориды обладают свойством коррекции эффектов гипофункции холинэргической системы. Это преимуцественное свойство было выявлено в результате серии фармакологических испытаний, показывающих, что соединения по изобретению оказывают определенный эффект, подобный эффекту хорошо известных холинэргических соединений таких, как оксотреморин, ареколин или физостигмин (2) или же противодействуют эффекту такого холинэргического знтагониста, как скополамин (3).

Соединения настоящего изобретения подвергли следующим фармакологическим испытаниям.

1. Потенциализация холинэргических эффектов оксотреморина . Целью этого теста является доказательство того, что соединения по изобретению усиливают центральные и периферийные холинэргические эффекты, вызванные путем введения мыши небольшой дозы оксотреморина.

Степень периферийной холинэргической активации измеряют по слюновыделению, количественно определенному по следуюцей системе отсчета:

0 очков: слюновыделение не превышает слюновыделение у обычной мыши, 1 очко: немного слюны находится вокруг зубов, 2 очка: слюна образует узкую полоску вокруг рта, 4 очка: слюна смачивает кожу под подбородком, б очков: слюна течет из рта, например, на передние конечности, Промежуточные очки не применяются, а слюна снимается после каждого наблюдения.

Степень центральной холинэргической активации измеряется по тремогенному эффекту, количественно определяемому по слелуюцей системе отсче25

0 очков: нет дрожи, 1 очко: случайное, легкое периодическое дрожание, 2 очка: умеренно-легкое, часто по30 вторяющееся дрожание

4 очка: сильное дрожание, но с периодами покоя, 6 очков: очень сильное, почти постоянное дрожание.

Самцов мышей И1 IRI (20-25 г) распределяют на четыре группы .по пять животных, а именно: одна контрольная группа и три обработанные группы.

Тестируемое соединение вводят интра4О перитональным путем (в трех обработанных группах) за 20 мин перед введением оксотреморина с разными дозами для каждой из обработанных групп.

Оксотреморин вводят интраперитональ45 ным путем в обработанных группах и в контрольной группе, с дозировкой

0,05 мг/кг, в растворе в 10 мл/кг физиологической сыворотки. Эта доза соответствует примерно минимальной дозе оксотреморина, которая вызывает дрожание и выделение слюны, 1

После введения оксотреморина животных отдельно помещают в небольшие клетки и за ними устанавливают наблюдение с равномерными интервалами в

5 мин до полного исчезновения холинэргических эффектов.

Для каждой из групп суммируются индивидуальные очки, начисляемые за

1822403

12 каждый период наблюдения, это позволяет составить кривую, представляющую сумму очков в зависимости от времени, характерную для каждой группы.

Средние значения поверхностей под кривыми, полученными для каждой из обработанных групп, сравнивают со средним значением поверхности под кривой соответствующей контрольной группы, и проводят статистический анализ по методу Нанн"Уитнел.. В результате этого сравнения, можно определить "минимальную активную дозу".

Эта "минимальная активная доза" является минимальной дозой соединения, необходимой длл наблюдения потенциализации эффекта слюновыделения или тремогонного эффекта оксотреморина, или, другими словами, для получения поверхности, большей, чем поверхность под кривой, полученной для контрольной группы.

В приводимой ниже табл. 3 даны активные минимальные дозы соединений согласно изобретению, которые потенциализируют слюнотечение и дрожания, вызванные оксотреморином.

Результаты, полученные в этом тесте, доказывают, что соединения изобретения усиливают эффект слюновыделения оксотреморина при минимальной до" зе, составляющей 8,4-88,6 мг/кг, и усиливают тремогенный эффект при минимальной дозе, составляющей 8,037,8 мгlкг. Кроме того, минимальные активные дозы не обладают собственным холинэргическим эффектом и очень далеки от смертельных доз, определенных в тесте Ирвина.

Кроме того, этот тест выявил, что некоторые соединения согласно изобретению, введенные в минимальной активной дозе, обладают более продолжительным, эффектом, чем сложный метиловый эфир 1,2,5,6-тетрагидро-1-метил-3-пиридинкарбоновой кислоты (ареколин), лвляющийся известным холинэргическим соединением.

Таким образом, соединения изобретения показывают потенциализацию эффектоо слюновыделения и тремогенных эффектов оксотреморина через двадцать минут после их введения при минимальной активной дозе в то время, как, в тех же самых условиях, ареко-, лин не дает никакой потенциализации.

2. Торможение черезмерной активности, вызванной скополамином.

Животное, поиев.енное впервые в новую окружающую среду, проявляет интенсивную исследовательскую активность по изучению этой новой среды.

Постепенное снижение и последующее исчезновение этой активности по изучению, другими словами, приаыкаеность к новой среде, может рассматриваться как элементарная йорма обучения. Эта элементарнал Форма обучения чувствительна к влиянию медикаментов, которые облегчают или которые замедляют обучение. Так например, скополаминсоединение, которое вызывает мнезические расстройства, приводит к черезмерной познавательной активности у крысы, помещенной в новую окружающую среду, это явление связано с цент-. ральной антихолинэргической активностью этого соединения. Напротив, холин.эргический антагонист типа физиостигмина противодействует черезмерной активности, созданной кополамином.

В нижеописанном тесте в зависимости от их растворимости, соединения изобретения вводят либо в физиологической сыворотке, либо в соответствующем носителе (обычно, буферный

30 раствор-цитрат с рН 5).

Этот тест позволяет установить для соединений согласно изобретению активность, сравнимую с активностью физиостигмина.

35 В этом тесте используют самцов . крыс Sprague-Davly SPF (Specific PatЬоВА Free) (160-200 г). В течение недели перед экспериментом этих животных содержат в нормальных услови4р ях группами по 15 животных в стандартных ограждениях решетками клетках со свободным доступом к пище и питью.

0 начале эксперимента, крыс рас45 пределяют на 4 однородные группы по

10 животных и приучают, в течение одного часа, к месту эксперимента. 3атем, каждая группа животных подвергается определенной обработке:

5p - группа I получает две одновременные интраперитональные инъекции физиологической сыворотки или использованного носителя, - группа 2 получает одну интраперитональную инъекцию физиологи вской сыворотки или использованного носителя и одну интраперитональную инъекцию в 0,5 мг/кг скополамина в растворе, 13

1822403

t4 различных дозах, исходя из которых определлют минимальную активную дозу, которая тормозит черезмерную актионость, наведенную интраперитональным введением О, 5 мг/кг скополамина.

Затем, сравнивают либо значения, полученные о группе ?, обработанной только скополамином, со значениями, которые получены в группе 4, одновременно обработанной скополамином и тестируемым соединением, либо значенил, полученные о группе 4, со значенилми, полученными в группе 3, обработанной только тестируемым соединением.

Контрольная группа 1 служит для контроля действия скополамина, ове45

50 группа 3 получает одну интраперитональную инъекцию тестируемого соединения в растворе в соответствующем носителе и одну интраперитональ5 ную инъекцию физиологической сыворотки или использованного носителя, группа 4 получает одну интрапе" ритональную инъекцию тестируемого соединения и одну интраперитональную

10 инъекцию в 0,5 мгlкг скополамина.

Через тридцать минут после этой обработки, одновременно тестируют четыре группы животных, Длл этой цели каждую группу помеща о кв драт ую камеру (100 <100 см) с решетчатым полом и одной вертикальной стенкой высотой 50 см. Каждая из этих камер имеет 16 зон, включая 4 зоны по углам, 4 центральные зоны и 8 перифе- 0 рических зон. Кроме того, каждая камера снабжена 2 рядами элементов инфракрасного излученил, расположенными в 2 см над полом длл регистрации горизонтальных перемещений животных и 2 другими рлдами элементов инфракрасного излучения, расположенными на высоте 10 см от пола, для регистрации вертикальных перемещений. Эти элементы инфракрасного излучения соединены с микропроцессором, который позволлет определять среднюю от пройденных расстогний (в см) для одной гругпы животных, определять среднее число осуществленных выпрямлений, а также распределение горизонтальных перемещений, в различных центральных, периферийных и угловых зонах, выраженных средним временем пребывания в этих различных зонах.

Каждое тестированное соединение исследуют, по меньшей мере, при трех денного в группу 2. Во всех случаях, отмеченные различия статистически, оценивают по методу Ман-Уитнея.

В приведенной ниже табл. 4 даны реэультать<, полученные в этом тесте с соединениями по изобретению.

Полученные в этом тесте результаты показывают, что соединения изобретения обладают хорошей тормозящей активностью в отношении черезмерной активности, наведенной скополамином.

Определенные для этих соединений минимальные активные дозы составляют

1,1-15,5 мг/кг. Однако в противоположность физостигмину, который является неактивным„ когда его вводят более, чем за 15 минут перед проведением измерений, соединенил, согласно изобретению, еще обладают тормозящей активностью, когда их вводят за

30 мин перед проведением измерений.

Следовательно, их активность является более продолжительной, чем активность фиэиостигмина.

3. Торможение эффектов скополамина на электроэнцефалограмме (ЭЭГ)

Введение скополамина человеку или животному вызывает мнезические расстройства, сравнимые с расстройствами, которые появляются в ходе нормального или патологического старения. У пациентов, страдающих старческим слабоумием типа Альцхаймера, получают улучшение мнезических расстройств путем введения фиэостигмина соединения, которое тормозит ацетилхолинэстеразу.

Скополамин, введенный крысам интраперитональным путем, при дозе

0,5 мг/кг приводит к изменениям спектра ЭЭГ, которые выражаются в повышении мощности полосы в 8 Гц, уменьшении мощности полос 20,8-40 Гц, а также о повышении общей мощности спектра ЭЭГ. Физостигмин противодействует этим изменениям.

Целью этого теста является подтверждение посредством метода количественного анализа электроэнцефалограммы того, что соединения изобретения обладают свойством нейтрализации воздействия скополамина на спектр

ЭЭГ.

В этом тесте, используют самцов крыс Albinos Sprague Оаи1> БРГ (160200 г), Когда животные достигают возраста 3 месяца, оживляют накрепко, асеп15

1822403

50

100 с.

55 тически и под общей анестезией, 5 кортикальных электродов: один нейтральный электрод, один лобный левый и один лобный правый электроды, один затылочный левый и один затылочный правый электроды.

Тест проводят, когда жиBQTные достигают возраста примерно 15 мес. В интервале животных содержат в индивидуальных клетках, они получают воду и пищу по желанию и их подвергают регулярному суточному циклу, содержащему период темноты от 10 часов ве чера до 6 ч утра. Одновременно животные постепенно привыкают к клеткам звуконепроницаемой кабины, которые они впоследствии будут занимать для записи электроэнцефалограмм, а также к экспериментальным условиям путем введения плацебоинтраперитональным путем.

Продукты вводят сразу перед записью ЭЭГ.

Крыс распределяют по группам из

8 животных и записывают 16 образцов спектров ЭЭГ за 5 секунд (два спект,ра ЭЭГ на животное). Затем полученные спектры анализируют на ЭВИ> что позволяет определять для каждой группы среднее из 16 проведенных измерений и вычислить из него длл одного животного общую мощность спектра ЭЭГ, а также распределение этой мощности (в ) в различных полосах частот.

Эту операцию (запись спектров) повторяют 9 раз (общая продолжительность: 121 минута).

Эффект изучаемого соединенил вы" числяют из статистического сравнения результатов, полученных для различных групп животных, которым ввели соответственно тестируемое соединение, скополамин и плацебо.

В табл. 5, приводится, для некоторых соединений изобретения, введенных интраперитонеальным путем при дозе, указанной в мг/кг, процент снижения увеличения мощности полосы 6,49,6 Гц (средняя 0 Гц), вызванного интраперитонеальным введением

0,5 мг/кг скополамина.

Результаты показь,вают, что соединения изобретения, как и физостигнин, тормозят эффекты, которые оказывает скополамин на электроэнцефалограмму.

Видно, что это торможение достигает и даже превышает 50> при относительно небольших дозах, очень далеких от

1О

45 токсичных доз, что не является случаем для физостигмина.

4. Пассивное уклонение с многократными испытаниями.

Соединения настоящего изобретения исследуют с целью выявления с одной стороны, их свойства содействия обучению, выраженного уменьшением числа испытаний, необходимых для достижения заранее определенного критерия, и с другой стороны, их свойства противодействия амнезии, вызванной введением скополамина. Для этой цели, используют метод пассивного уклонения с многократными испытаниями. Этот метод хорошо известен в плане оценки эффектов, которые оказывает продукт на память и на обучение.

Тест проводят на самцах крыс $ргаgue-Dawley (160-200 г), которых выдерживают во время эксперимента в стандартных клетках. Использованным устройством является квадратная прозрачная клетка со стороной 35 см и высотой 25 см, снабженная решетчатым электрифицированным полом. На полу, в одном из углов клетки, размещают резиновый изоляционный слой (10»

«17 см), Для оценки способности соединения содействовать обучению осуществляют следующее испытание, Каждое животное помещают на резиновый слой и отмечают время> которое животное затрачивает на решение гокинуть это место длл исследования клетки. После 20 с исследования животное получает удар электрическим током (прсдолжительность 3 с) в лапы, вызывая реакцию бегства. Крысу сразу извлекают из устройства и снова помещают в прежнюю клетку. Повторяют этот эксперимент до тех пор, пока животное не остается, по меньшей мере, 180 с на резиновом слое, чтобы избежать получения удара электрическим током.

Обучение выражается в среднем числе испытаний, необходимых для достижения времени пребывания на слое в

Время пребывания на резиновом слое в 180 с рассматривается как максимальная достигаемая характеристика для животного для избежания получения удара электрическим током. Крысы, которые остаются на слое в течение этого времени, приобретают рефлекс уклонения и снова помещаются в

1822403

5

<0 рическим током.

15 их прежнюю клетку без получения удара электрическим током.

Для оценки способности соединения содействовать мнезическоиу удержанию по истечению времени проводлт следующий эксперимент. Каждое животное подвергают четырем испытаниям по времени 0,4, 24 и 28 часов. При первом испытании (время О), животное помещают на резиновый слой и отмечают время, которое затрачивает животное для принятия решения покинуть это место для исследования клетки. После 20 с исследования, крыса полу ает удар электрическим током (продолжительность

3 с) в лапы, вызывал реакцию бегства.

Крысу немедленно извлекают из устройства и снова помещают в прежнюю клетку. В ходе трех последующих испытаний (время: 4, 24 и 28 ч), животное снова помещают на резиновый слой и отмечают время, затраченное для оставления этого места. Как только четыре лапы животного попадают на решетку, оно получает удар электрическим током и немедленно извлекается из устройства.

В начале эксперимента крыс распределяют на 4 группы однородного состава из 15 животных. За 30 мин перед каждым испытанием, каждую группу животных подвергают определенной обработке. группа 1 получает одну интраперитональную инъекцию физиологической сыворотки, группа 2 получает одну интраперитональную инъекцию тестируемого соединения, группа 3 получает одну интраперитональную инъекцию в 0,5 иг скополамина и группа 4 одновременно получает одну интраперитональную инъекцию в

0,5 мг скополамина и одну интраперитональную инъекцию тестируемого соединения.

Группы 1 и 2 используют в первом эксперименте, а группы 3 и 4 используют во втором эксперименте.

Результаты, полученные в этом тесте с соединениями изобретения приведены в табл. 6. В этой таблице указаны подвергающеесл испытанию соединение (колонка 1) и введенная интраперитональным путем доза, выраженная в мг/кг (колонка 2).

0 колонках 3 и 4 приводлтсл результаты, полученные в испытании, использованном длл оценки обучения.

Цифры указывают среднее число испытаний, необходимых длл того, чтобы

K

В колонках 5-12 приводлтсл результаты, полученные в эксперименте, использованнол< для оценки инезичсского удержания. В колонках 5-8 циФры представляют среднее вреил пребывания, отмеченное соответственно во время

0,4, 24 и 28 ч для животных группы 3, обработанных только скополаиином, а в колонках 9-12 предо гавлены ц.;фры, соответствующие живо-ных группы 4, однсвреиенно обработанных скополаминои и исследуемым соединением (при дозе, укаэанной во второй колонке).

Благоприятное влияние соединения в плане противодействия амнезии, вызванное скополаиинои, доказано увеличением времени пребывания на слое при кандидом наблюдении. Наблюдаемые различил статистически проанализированы по методу !1ан-уитнел.

11з табл. 6 видно, что: соединения изобретенил способствуют обучению рефлексу уклоненил: среднее число испытаний, необходимых длл достижения заранес определенного критерия (максимальное время пребывания на слое порядка 180 секунд), является меньшии для обработанных животных (колонка 4), чем длл контрольных животных (колонка 3).

- ам«езионный эффект скополаиина оче«ь ярко выражен: видно, что QpeMR пребывания животных группы 3 (колонка 5-8) лвллется явно меньше, чеи

100 секунд, полученных контрольными животныии после среднего числа испытаний (кслонка 3) и в этих условиях, благоприятное впилние соединений изобретенил длл противодействия амнезионному эффекту скополамина является очень явным: жив тные группы 4, одновременно обработанные скополаиином и соединением изобретения, имеют время пребывания при каждом наблюдении значительно большее, чсм животные груп19

1822403

20 ральным путем, имеют фармацевтические формы, известчые для этого виРа введения, например, растворы, суспензии, или водные или маслянистые эмульсии.

Для введения ректальным путем композиции, содержащие соединения изобретения, обычно представлены в форме свечей.

Фармацевтические формы содержат также композиции, которые позволяют

50 постепенно высвобождать активный продукт, Соединения изобретения смешивают с нетоксичным йармацепти ески 55

1 пы 3, обработанные только скополамином (сравнить результаты колонки 5 с результатом колонки 9, колонки 6 с результатами колонки 1О и т.д,) ..

- фиэостигмин оказывает благоприятное действие в плане противодействия амнезионному эффекту скополамина, подобное действию соединений изобретения, но при лозе, вызывающей побочные эффекты и очень близкой к токсичной дозе, что не относится к соединениям изобретения.

5. Токсичность.

Токсичность соединений изобретения определяют у самцов мышей NNRI посредством теста Ирвина.

Нарастающие дозы тестируемого соединения вводят интраперитональным путем группам из трех мышей до достижения смертельной дозы (доза, вызывающая смерть двух животных из трех за 48 часов).

В табл. 7 приводится смертельная доза, наблюдаемая для соединений 25 изобретения. Из табл. 7 следует, что соединения изобретения являются мало,токсичными, в противоположность физостигмину, 6. Дозировка и введение 30

Фармацевтические композиции, содержащие соединения изобретения, могут вводиться оральным, парентеральным или ректальным путем. Фармацевтические композиции, которые могут использоваться для введения оральным путем, могут быть твердыми или жидкими, например, в форме таблеток (дражирооанных или недражированных), пиI люль, драже, желатиновых капсул, растворов, сиропов и т.д. Таким же образом, композиции, которь!е могут использоваться для введения паренте60 мг

11 мг ия 20 мг изобретения

Производные 2-амино-4-морфолино6-пропил-1,3,5-триазина общей Форйулы

R — )Ц г 1

G N +) +

СН2СН 2СН У в виде свободного основания, когда

Р— водород или метил и R - 2-гидроксиэтил или ацетил или R< - водород и Р— гидроксигруппа, 1-этил-2-гид« роксиэтил, 2-метоксиэтил, диметиламиногругпа, 2-(ацетокси)этил или (диметиламино)карбонил, или в виде гидрохлорида, когда R) — водород или метил v Rg — ацетип или бенэоил, обладающие активностью потенциализации холинэргического эффекта, улучшающего память и способность к учению. приемлемым твердым или жидким носи- телем, и в известных случаях, с дис- пергатором, деэинтегратором или стабилизатором. В случае необходимосс ти, туда можно добавлять агенты подслащивания, красители. )lpoцентное содержание активного продук" та в фармацевтических композициях может изменяться в очень широких пределах в зависимости от частоты введения, Что касается ежедневной дозировки, она может изменяться в широком диапазоне унитарных доз, например, от

0,1 до 2 г активного продукта, в зависимости от способа введения. Так, например, она может составлять 0,250,75 г, предпочтительно, 0,5 г одинтри раза в день, когда соединение вводится в Форме таблеток.

В качестве примера композиции, содержащей соединение Формулы 1, которая может вводиться оральным путем, ниже приводится состав для таблеток:

Соединение I 250 мг !

1етилцеллюлоза (Метосель К4М) 200 мг

Сухая лактоза 154 мг

Аэросил 5 мг

Безводная лимонная кислота

Тальк

Стеарат магн

Ф о р м у л а 1822403

21

Таблица!

2-Р-4-морфолино-б-пропил-1,3,5-триазины

Соеди- Заместитель R нение

1, 1> <* 51, 6

2 75,4

93-93

2 %10»

90-9!

NH-CEI-C» 0H

< z

С211 5

И(с» ) С»,С» О» я 3

И»И(С»,), 62,6

42,7

32-33

44-45

10!

05-106

63,6

* Число молей амина на моль исходного продукта.

*< В присутствии 2 молей триэтиламина. та бли ца

2-R-4-морфолино-6- пропил-1, 3, 5-т ри аз и н

Соеди- Заместитель Р, нение

60-6!

3в(1) 34,8

3в(2) 46,5

25а И(С» )СОСН

27 N(CEIL)COC » гидрохлорид

122

Та бли ца 3

Потенциализация холинэргических эффектов оксотреморина

Активные минимальные дозы (в мгlкг)

Дроиание

Соединение

Слюнотечение

26,7 г

23,9

2,4

8,4

2 8

20

2,7

50 21а

5,3

3,6

2,8

25а

27

37

9 3

29 4

15,5

8,8

1 26,7

2 23,9

7 88,6

9 8,4

10 )28,1

20 20,6

21а 26,5

22 10,9

25а 8,4

27 37,8

37 30,9

41 29,4

29,5

8,4

28,!

8,0

Z6,5

36 4

8,4

37,8

Моль* Выход, Ф Точка плаво ления, С

Метод Выход, Точка плав4 ления, С

Таблица .Тормо><ение черезмерной активности, вызванной скопола)лимом

Соедине- Яктивнал минимальная доза, 4О мг/r,ã

1822403

Т а б л и ц а 5

Торможение эффектов скополамина на полосе 6,4 - 9,6 Гц ЭЭГ

Торможение, в

Соедине- Доза, мгlкг ние

21а

2,7

3,6

0,88

100

66,7

46,7

93,8

1О

12

52

03,3

Г

2,4

53,3

16,7

9,9

9,4

29,5

0,8

2,8

15 41

53,3

25,0

66,7

10

1оИЭОСтИГ76,8

0,4 мин

2 7

20 а блица 6

Инезицеское удержание

Время пребывания (в секундах) Группа 4

Группа 3

Обучение

Поза, нг/кг

Соединение

0 4 2i 28

2 24

78 среднее число испытаний

Группа 1

Группа 2

13,3 24,2 26,3

3,7 3,3 4,4

1,5 3,3 4,0

2 ° 3 3,3 5,7

4,5 2,3 4,5

2,5 4 ° 6 5,5

9 7 9,1 33,9 г0,3 12,8

61,3

42,!

1,53

1,0

102,7

104,5

1,27

2,27

I,O

1,9

2,67

I ° 0

1,4

1,0

2,57

22,5

62,7

31,1

2,0

2,27

2,87

1,93

1,60

2,07

1,53

1, I

2 ° 4

1,53

21а

1,7

1,0

2,20

0,09

3,70

2,07

3,0

8,9

2,07

7,7 3,3

31,6 54,I

4,S S.8

25а

2,1

1,Э

1,!3

2,20

133,5

49,9

66,3

37 9.6

2,5

2,0

1,3

7,0 7,7

6 9 21,3

3.7 с3

1,33

1,0

9,12

Фнзастигмин 0,4

1,9 17,8 56,2 53,4

1,4

2,60

2,30

1,7

Таблица 7

Токсичность соединений

Соедине

799

996

21а

5,35

2,4

29,54

8,72

28, 14

2,66

2,65

3.04

802

718

006

044

044

2,7 44,8

57,9

1,3

3,3 67,9

5,5 15,7

2,7 55,3

3,4 60,4

2,8 70,9

1,7 8,1

I 1,3 88,6

2,9 24,0

1,3 15,8

57,7 74,6

82,8

34,7

I11,5

44,4

27,3

52,1

Ieo,3

34,1

87,9

102 ° 4

I37,6

44,5

1822403

Продолжение табл. 7

1091

838

1133

928

294

0,02

25а

41

Физостигмин

Составитель 3.Латынова

Редактор В.Трубченко Техред М.Моргентал Корректор А.06руиар

Заказ 2118 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, MocKBa, N-35, Раушская наб., д, 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент"., г, Ужгород, ул. Гагарина, 1О1