Способ индукции новообразований и регенерантов в культуре пыльников in viтrо у озимых гексаплоидного тритикале и пшеницы

 

Использование: биотехнология, культивирование тканей и клеток растений, андрогенез. Сущность изобретения: новообразования и регенеранты гексаплоидного тритикале и пшеницы получают путем выращивания донорных растений, эксплантации пыльников на питательную среду и дальнейшего культивирования, при этом семена донорных растений облучают радиацией в дозе 5-10 кР. 6 табл.

союз соВетских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУ6ЛИК ((9) (! !) (5!)5 А 01 Н 4/00

ГОСУДАРСТВЕН.ОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) "ЯЗМе

М ft! - ° сп

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4921623/13 (22) 25.03.91 (46) 23.06.93. Бюл. I4 23 (71) Белорусский научно-исследовательский институт земледелия и кормов (72) А.П. Сорокин, И.А. Гордей, Г.М. Гордей, М.П. Шишлов и Т.И. Островская (56) S.K. Datta et э).//Theor, and Appl. Genet„

1989, v.77, р. 820-824.

В.Foroughl wehr et al.//Theor. and Арр).

Genet.. 1990. v. 79, р. 77-80.

Charmet G. et aI.//Theor. and Арр).

Genet, 1984, ч. 69, р. 55-61.

Hod rose aklImat I паз)епл., 1974, ч. 18, р. 217-220.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генетике и селекции, и может быть использовано для ускоренного получения дигаплоидных линий, а также при создании исходного материала для селекции растений.

Цель изобретения — повышение индукции новообразований и зеленых регенерантов.

Поставленная цель достигается тем, что в сгюсобе индукции новообразований и регенерантов в культуре пыльников у озимых гексаплоидного тритикале и пшеницы, включающим выращивание донорных расTBHHA и посадку пыльников на питательную среду, семена донорных растений облучают лучами в дозе 5-10 кР.

Ilo сравнению с прототипом техническое решение включает облучение семян донорных растений у-лучами в дозе 5-10 кР, (54) СПОСОБ ИНДУКЦИИ НОВООБРАЗОВАНИЙ И РЕГЕКЕРАНТОВ В КУЛЬТУРЕ

ПЫЛЬНИКОВ IN V)TRO У ОЗИМЫХ ГЕКСАПЛОИДНОГО ТРИТИКАЛЕ И ПШЕНИЦЫ (57) Использование: биотехнология, культивирование тканей и клеток растений, андрогенез, Сущность изобретения: новообразования и регенеранты гексэплоидного тритикале и пшеницы получают путем выращивания донорных растений, эксплантации пыльников на питательную среду и дальнейшего культивирования, при этом семена донорных растений облучают у радиацией в дозе 5 — 10 кР. 6 табл. что соответствует критерию изобретения

"новизна".

В предлагаемом способе обработку семян зерновых культур у -лучами проводят при выращивании донорных растений для Q0 культуры пыльников In ч)(го с целью повы- Я шемия выхода новообразований и зеленых растемий. (с

fl р и м е р. Семена гомозиготной линии

Л160 и гибридной комбинации (Fg ГК340 озимого гексэплоидного тритикале, а также оенмоя пшеницы Jl1 по 100 семян яюкдхо с6. фв резца были облучены перед посевом у-лучами в дозах 5 кР -10 кР на установке ЛМД у" 1М (цеэий 137) мощностью 3000 Р/мин. В качестве контроля были высеяны необлучвмные семена.

Колосья с пыльниками нэ одмоядерной стадии срезали и выдерживали в течение 5 дней при температуре +4 С. Затем матери1822683

10 мг

10 мг

10 мг

20 мг

0,015 мг

Пантогенат Са

Тиамин HCI

Пиридоксин HCI

Никотинамид

Цианкобаламин ал стерилизовали в 3 ) хлороцине и высаживали пыльники на среду Potato И, для каждого варианта высаживали не менее 300 пыльников (табл. 1).

После посадки пыльники культивировали в темноте при температуре 31 С до появления новообразований.

Новообразования переносили на среду для регенерации, в качестве которой использовали среду Р8 (модификация среды Гамборга В-5) (6) без гормональных добавок:

100,0

1 мг/л

1 мг/л

0,1 мг/л

0,6

5,7

5мг

5мг

10 мг

Таблица 1

Микроэлементы

КЙОз

CaCIz 2НэО

MgS04 7HzO (NH4QSO< йаН РО HzO

Kl О, НзВОз

МпS04 Н20

ZnS04 7Н20

ЙЗ2МЗ04 2Н20

CuSO4 5Н20

CoClz 6HzQ

Naz ЕДТА 2НрО

FeSO4 7Н20

Сахароза 30000 мг/л

Иноэитол

НУК

Кинетин

Витамин Е

Агар рн

Витамины по Стаба

Фолиевая кислота

Рибофлавин

Биотин мг/л

134

0,75 . 3,10

10,00

2,00

0,25

0,025

0,025

37,23

27,80

Растворить в 100 мл, для приготовления

1 л среды брать 5 мл раствора.

Приведенные результаты дисперсион10 ного анализа подтверждают положительное влияние у-облучения на регенерацию зеленых растений (табл. 6).

Так как наблюдалось значительное варьирование по выходу растений в зависи15 мости от генотипа и дозы облучения, то рекомендуется испольэовать полный спектр приведенных доэ у-облучения для определения наиболее оптимальной для испытываемого генотипа.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет увеличить выход новообразований при дозе 5 кР и долю зеленых растенийсреди регенерантов при дозах 5-10 кР в зависимости OT генотипа, что повышает эф25 фективность метода получения гаплоидных растений через культуру пыльников.

Формула изобретения

Способ индукции новообразований и

30 регенерантов в культуре пыльников In vitro у озимых гексаплоидного тритикале и пшеницы, включающий выращивание донорных растений, зксплантацию пыльников на питательную среду и культивирование, о т л и35 ч а ющийся тем, что,с цельюповышения частоты индукции новообразований и выхода зеленых растений, семена донорных растений облучают у-лучами в дозе 5-10 кР.

1822683

Таблица 2

8ыход новообразований при различных дозах облучения семян донорных растений, 7 .

Таблица 3

Результаты дисперсионного анализа по выходу новообразований при культивировании пыльников

1822683

Таблица 4

Доля зеленых растений среди общего числа регенерантов в зависимости от дозы облучения, ф, Таблица 5

Выход зеленых регенерантов в зависимости от дозы облучения семян у гомоэиготмой линии озимого гексаплоидного тритикале и ф) Таблица 6

Результаты дисперсионного анализа по выходу зеленых растений