Способ получения коллагеназы

 

Использование: биотехнология, в частности получение ферментов микробного происхождения, медицина, парфюмерная промышленность и НИР. Сущность изобоетения: в качестве продуцента коллагеназы используют актиномицет Streptomyces lavendulaeBKnM-S-910(HHMH-36SV) культивирование которого осуществляют в течение 48-72 ч при температуре (28±2)°С и рН 6,4-6,8 на питательной среде следующего состава, г/л: кукурузная мука 18-20: препарат № 1 (мука кормовая животного происхождения ) 1,5-2,0; желатин 2,5-3,0; MgSO 7Н20 0,2-0,4: остальное - вода водопроводная , до достижения активности фермента в культуральной жидкости 10 /0 ед/мл. в препарате 135-185 ед/мг

СО10Э СОВЕТCКИХ

СОЦИАЛИСТИ 1ЕСКИХ

РЕС11У6(1ИК (Я1s С 12 N 9/58

ГОСУДАРСГВЕН11ОЕ ПАТЕНТ11ОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (Г ОСПАТЕНТ СССР) ОЮЗНАЯ

We i.! 4Д ЯГ 1(ii Д

to I ;

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4914908/13 (22) 30.01.91 (46) 23.06,93. Бюл. 3Ф 23 (71) Институт микробиологии АН СССР (72) Н,С,Демина и С.В.Лысенко (56) Biochemical organic compounds for Research and Diagnostic reagents "Sigma", Chem Company 1990, р. 333.

Патент США N.. 4624924, кл. 435 — 220, опублик. 1986. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОЛЛАГЕНАЗЫ (57) Использование: биотехнология, в частности получение ферментов микробного происхождения, медицина. парфюмерная

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению ферментов микробного происхождения, и может быть использовано в медицине при терапии ожоговых ран, обморожений (препарат "Ируксол", Югославия), некоторых заболеваний печени, грыжи интервертебрального диска позвоночника, для получения и культивирования клеточных культур человеческих и животных тканей, являющихся источником активаторов плаэминогена в тромболитической терапии, а также в парфюмерной промышленности и НИР, например, для определения структуры коллагенов, Цель изобретения — увеличение активности фермента, удешевление процесса его получения.

Укаэанная цель достигается тем, что е качестве продуцента коллагеназы используют актиномицет Streptomyces lavendulae

ВКГ1М-S-910 (ИНМИ-36-SV). культивирование которого осуществляют в течение 48-72 ч при температуре (28 2)"С и рН 6,4 — 6,8 на. 5.0 1822879 А1 промышленность и НИР. Сущность иэобоетения: в качестве продуцента кпллагеназы используют актиномицет Streptomyces

lavendulae ВКПМ-S-910(ИНМИ-36 Я/). культивирование которого осуществляют в течение 48 — 72 ч при температуре (28 ) С и рН

6.4-6,8 на питательной среде следующего состава, г/л: кукурузная мука 18-?0; препарат М 1 (мука кормовая животного происхождения) 1,5-2.0; желатин 2,5-3,0; MgSO4

7HzO 0.2 — 0,4: остальное — вода водопроводная, до достижения активности фермента в культуральной жидкости 10- 20 ед/мл. в препарате 135 †1 ед/мг. питательной среде следующего состава, г/л: кукурузная мука 18-20, препарат М 1 (мука кормовая животного происхождения, отходы ГОСТ 17536-82) 15 — 20. желатин 2,53,0, MgS04 7НрО 0,2-0,4, вода водопроводная. Среду разливают по 50 мл в колбы

Эрленмейера объемом 250 мл. Посевной материал вносят в количестве 10;(,. Выращивание проводят на качалке (200 o6/мин) при (28+D) С в течение 48-72 ч, Мицелий отделяют центрифугированием при 6000 o6/мин.

Осаждение ферментов из культуральной жидкости осуществляют ацетоном при температуре 0 — 5 С. Коллагенаэную активность осажденного ферментного препарата определяют с помощью нингидринового метода и выражают в ед. лей/мл к,ж. или мг препарата.

Коллагеназная активность в культуральной жидкости составляет 10-20 ед.лей/мл, а в осажденном лиофилиэированном препарате — 135 — 185 ед.лей/мг (в мкмоль лейцина) эа 18 ч инкубации реакционной смеси.

1822879

55!.! l,:!! игольными признаками предлагаемого способа является то, что в качестве продуценга коллагенаэы используют актиномицет Streptomyces lavendulae ВКПМ-S910 (ИНМИ-36-SV), который выращивают в течение 48-72 ч при температуре (28+ ) C и рН 6,4-6,8 на питательной среде следующего состава, г/л: кукурузная мука 18-20, препарат N.. 1 (мука кормовая животного происхождения, отходы. ГОСТ 17536-82)

15-20, желатин 2.5 — 3.0, MgSO4 7HzO 0,2—

0,2, вода водопроводная. Среду разливают па 50 мл в колбы Э рленмейера объемом 250 мл. Посевной материал вносят в количестве

10 (, Выращивание проводят на качалке (200 об/мин) при (28 й2) С в течение 48-72 ч, Мицелий отделяют центрифугированием при 6000 об/мин. Осаждение ферментов из культуральной жидкости осуществляют ацетоном при 0 — 5 С. Коллагеназная активность осажденного ферментного препарата определялась с помощью нингидринового метода и выражалась в ед. лей/мл к.ж. или мг препарата.

Коллагенаэная активность в культуральной жидкости составляет 10 — 20 ед. лей/мл. в осажденном лиофилизированном препарате — 135 — 185 ед. лей/мг (в мкмоль лейцина), за 18 ч инкубации реакционной смеси.

Увеличение или уменьшение вышеуказанных концентраций компонентов среды отрицательно влияет на синтез коллагенаэы — активность снижается на 10-50 . При температуре ниже и выше указанных пределов, исходных значениях рН ниже 6,4 и выше 6,8 снижается скорость роста и ферментативная активность, При сокращении менее 48 ч или увеличении более 72 ч времени выращивания активность также снижается.

Изобретение иллюстрируется следую щими примерами.

Пример 1. Культуру Streptomyces

lavendulae ВКГ1М-S-910 (ИНМИ-36-SV) выращивают на среде следующего состава, г/л: кукурузная мука 18, препарат М 1 1,5, желатин 2,5, MgSOq 7H20 0,2, остальное— вода водопроводная, рН 6,6, Посевной материал вносят в количестве 10 . Выращивание проводят при 28 С в колбах на 250 мл в 50 мл среды на качалке (200 об/мин) в течение 48 ч. Культуральную жидкость отделяют центрифугированием (6000 об/мин) при охлаждении. Осаждение ферментов проводят при температуре 0 — 5 С. Осадок лиофилизируют и определяют коллагеназную активность по нингидриновому методу по лейцину (15) через 18 ч инкубации реакционной смеси, 5

Д Ъ

Коллагеназная активность культуральной жидкости равна 12 ед/мл, лиофилиэированного препарата — 135 ед/мг.

Пример 2. Культуру Streptomyces

lavendulae ВКПМ-S-910 (ИНМИ-36-SV) выращивают нв среде следующего состава, г/л; кукурузная мука 20, препарат 1Ф 1 20, желатин 3.0. MgSO4 7Н20 0,4. остальное— вода водопроводная, рН 6,8. Посевной материал вносят в количестве 107(, Выращивание проводят при 30 С в колбах на 50 мл в

50 мл среды, на качалке (200 об/мин) в течение 48 ч. Культуральную жидкость отделяют центрифугированием (6000 об/мин) при охлаждении. Осаждение ферментов проводят при 0 — 5 С. Осадок лиофилизируют.

Коллагенаэная активность культуральной жидкости равна 16 ед/мл, а лиофилизированного препарата — 150 ед/мг за 18 ч инкубации реакционной смеси, Пример 3, Культуру Streptomyces

lavendulae ВКПМ-S-910 (ИНМИ-36-Р/) выращивают на среде следующего состава, г/л: кукурузная мука 20, препарат М 1, 20, мелатин 3,0, MgSO4 7Н20 0,4, остальное— вода водопроводная, рН 6.5. Выращивание проводят по примеру 2. но в течение 72 ч.

Коллагенаэная активность в культуральной жидкости равна 20 ед/мл, в лиофилизированном препарате — 185 ед/мг за 18 ч инкубации реакционной смеси.

Применение предлагаемого способа позволяет получить из культуральной жидкости актиномицета Streptomyces lavendulae

ВКПМ-S-910 (ИНМИ-36-SV) активную коллагеназу.

Коллагенаэная активность осажденного из культуральной жидкости препарата до

1,5 раза превышает активность препарата, олученного по известному способу. В предлагаемом способе используют простую и дешевую питательную среду.

Формула изобретения

Способ получения коллагеназы, предусматривающий культивирование продуцирующего микроорганизма на водной питательной среде, содержащей источники углерода, азота, желатин, сульфат магния семиводный до достижения максимальной активности, отличающийся тем, что, с целью увеличения активности фермента и удешевления способа. в качестве продуцирующего микроорганизма используют штамм Streptomyces tavendulae ВКПМ5910, а культивирование ведут при температуре 26-30 С, рН 6,4-6,8 на питательной соеде, содержащей в качестве источника углерода кукурузную муку, источника азота—

1822879

Составитель Н.Демина

Техред М.Моргентал Корректор М. Куль

Редактор Г.Бельская

Заказ 2174 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Рэушская наб., 4/5

Производственно-издательский ком инат атент, г. жгород, ул. агарина белковый препарат М 1 при следующем соотношении компонентов, г/л:

Кукурузная мука 18-20

Белковый препарат М 1 1,5 — 2,0

Желатин 2,5-3,0

Сульфат магния семиводный 0,2-0,4

Вода водопроводная Остальное.

Способ получения коллагеназы Способ получения коллагеназы Способ получения коллагеназы 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии и касается обработки кожевенно-мехового сырья с помощью нового комплексного ферментного препарата

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к созданию на основе коллагеназы микробного происхождения субстанции для лекарственных средств
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к новым способам получения ферментного препарата лакказы

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается использования базидиальных грибов рода Coprinus в качестве молокосвертывающих ферментов при производстве сыра с применением ферментов микробного происхождения
Изобретение относится к биотехнологии и может быть применено в пищевой промышленности

Изобретение относится к медико-биологической области биотехнологии

Изобретение относится к медицинской промышленности, в частности к микробиологическому синтезу ферментов медицинского назначения

Изобретение относится к биотехнологии, в частности, к получению штамма - продуцента комплекса гидролитических ферментов, в состав которого входят кислые и слабокислые протеазы, - амилаза, а также сопутствующие ферменты, такие как экзо -- глюканаза, цитаза, ксиланаза, и может быть применено в микробиологической промышленности при получении ферментных препаратов для гидролиза растительных, животных и микробных субстратов в пищевой промышленности, бродильных производствах, сельском хозяйстве, при получении аминокислотных смесей, ферментолизатов дрожжей и других биологически активных веществ
Наверх