Способ диагностики гнойно-септических заболеваний

 

Использование: медицина, иммунология , диагностика сепсиса, остеомиелита и других гнойно-септических заболеваний. Сущность изобретения: кровь смешивают со специфической сывороткой, содержащей антитела против микробов возбудителя гнойных заболеваний, инкубируют в течение 2 ч, центрифугируют, в полученном супернатанте определяют содержание калия и при повышении его концентрации на 7% и более по сравнению с контролем диагносцируют гнойно-септическое заболевание. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (sI)s G 01 N 33/549

ГОСУДАРСТВЕ1+ЮЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) Ф(Й. @ЩИ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4797467/13 (22) 15.01.90 (46) 30,06.93. Бюл. М 24 (71) Киргизский государственный медицинский институт (72) В.Л.Морозов, M,А.Сабодаха и Д.А.Адамбеков (56) Справочник Ilo микробиологическим и вирусологическим методам исследования/Под ред, М.О.Биргера. M.: Медицина, 1982, с. 251. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГНОЙНОСЕПТИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. и может быть использовано в клинической диагностике сепсиса, остеомиелита и других гнойно-септических заболеваний.

Цель изобретения — ускорение способа.

Это выполняется тем, что кровь смешивают со специфической сывороткой, содержащей антитела против микробов возбудителя гнойных заболеваний, инкубируют в течение 2 ч, центрифугируют, в полученном супернатанте определяют содержание калия и при повышении его концентрации на 7 и более по сравнению с контролем диагносцируют гнойно-септическое заболевание.

В отличие от известного способа диагностики путем бактериологического длительного метода исследования предложенный способ является иммунохимическим и основан на взаимодействии микробных антигенов с антителами сыворотки на поверхности клеток крови, отража„,« Ы„„1824583 А1 (57) Использование: медицина, иммунология, диагностика сепсиса, остеомиелита и других гнойно-септических заболеваний, Сущность изобретения: кровь смешивают со специфической сывороткой, содержащей антитела против микробов возбудителя гнойных заболеваний, инкубируют в течение 2 ч, центрифугируют, в полученном супернатанте определяют содержание калия и при повышении его концентрации на 7ф, и более по сравнению с контролем диагносцируют гнойно-септическое заболевание, 2 табл..ющее специфический иммунологический механизм процессов антиген-антитело с высвобождением иэ разрушенных клеток внутриклеточного микроэлемента.

Это позволяет. сократить время диагностики и повысить точность способа.

Способ осуществляют следующим образом: 0,08 мл крови иэ пальца смешивают с

0,02 мл антимикробной сыворотки, разведенной на 5 цитрате натрия в титре, определенном опытным путем, Например, для антистафилококковой сыворотки — титр

1:100 (табл. 1).

Параллельно проводят контрольную пробу: 0,08 мл крови смешивают с 0,02 мл

50 цитрата натрия. Кровь инкубируют 2 часа при 37 С, Во все пробирки добавляют по

0,9 мл изотонического раствора хлористого натрия, смесь взбалтывают и центрифугируют 10 мин, при 1500 об/мин. Надосадочную жидкость отсасывают и определяют в ней содержание ионов калия пламенной фото1824583

К вЂ”. 100, Таблица 1

Титрование антистафилококковой сыворотки оротньг звед

31,3 метрией или другим чувствительным способом, Результат рассчитывают по формуле где О - содержание калия в опытной пробе:

К вЂ” содержание калия в контрольной пробе.

При значениях результата 7 )(, и выше диагносцируюг гнойно-септическое заболевание.

Способ исг1ытан при диагностике гнойно-септических заболеваний с подтвержденной бактериологически стафилококковой этиологией

В табл, 2 приведены результаты испи тания метода. Для сопоставления метод выполнялся с антигенами стафилококка и кишечной палочки, а также с антисывороткой против кишечной палочки, В результате выявлено, что разница в пределах интервала между средними минимальными и максимальными значениями показателей повреждения клеток при сепсисе и остеомиелите и средними значениями показателей повреждения клеток здоровых людей равна при сепсисе: (14,36 — 4,41) — (2,40 + 0,80)6,75 при остеомиелите; (14,07 — 5,69) — (2,40—

0,80) = 6,78

При округлении этих величин = 77,, При испытании данного метода положительные результаты были получены у 7 из 10 больных сепсисом (70 ), Рекция была положительной также у половины больных острым гематогенным остеомиелитом. У здоровых доноров реакция была положительной у 2 иэ 18 человек (11) ). При применении антисыворотки против кишечной палочки получены более низкие значения, что свидетельствует о возможности ориентированного выявления этиологии заболевания.

Пример. Больная Б., 14 лет, поступила в хирургическое отделение 30.09.89 r, с диatнозом: сепсис. Кровь взята на анализ

01,10.89 r, Из крови выявлен Staphylococcus

aureus, По 0,08 мл крови из пальца смешали с

0,02 мл aHтистафилококковой сыворотки, разведенной на 5, цитра е натрия в титре

1;100. Для контроля 0,08 мл крови смешали с 0,0? мл 5;ь цитрата натрия. Инкубирование опытной и кон троя .Itot проб проводили при 37"С в течение 2 часов, 3 1ем B обе пробирки добавили по 0,9 мл изотоническо;о раствора хлористо èo: атрия, смесь взболтали и отцентрифу ; ".>ttaли 10 мин при скорости 1500 об, мин Р надосадочной ,r

1-> кидкосги с помотцью tïtaìottttîto фотоме1ра определили содег;жание ионов калия.

Результаты илам.:ьног; фа1ометрии; контрольнач проба 17,5 опытная пробa — 19,5

?0 показатель повреждения клеток—

11,4 ь

Таким образом, вссь процесс постановки реакции и учет полученных данных занимает около 3-х часов, Это сокращает сроки постановки диагноза на 4 суток по сравнению с известным способом лабораторной диагностики гнойно-септических заболеваний, так как отпадает необходимость в посеве крови на питательные среды, получении чистой культуры и ее идентификации Крома тото, ynpощастся:.роведение исследования и умен; шг ютс ° финансовые затраты на один анализ

Формула и.. обретения

Способ дии но."гики гнойно-септических заболеваний пу-ем исследования крови, о .; и ч а ю шийся тем, что исследуемую кровь смешивают со специфической сыво40 роткой. содержащей антитела против возбудителя гнойного заболевания, инкубируют в течение 2 ч, центрифугируют. в полученном супернатанте определяют содержание калия и при превышении et o концентрации на

45 7 ) и более по сравнению с контролем диагносцируют гнойно-септическое заболевание.

1824583

Продолжение табл.1

П р и м е ч а н и е: 1- результаты пламенной фотометрии, 2- показатель повреждения клеток() Таблица 2

Результаты ускоренного метода диагностики гнойно-септического состояния стафилоккоковой этиологии

Использованный еактив

Исследованные

Антизшерихи- Антиген кишечозная сыво- ной палочки отка

Анти ген золотистогоо стафилок,окка

Антистафилококковая сыворотка

M+m

М m

553 й2 69

10 9,08 396 9

10 612 +. 205

10 14,36 + 4.43

6 7Щ й3,666

6 14,07 +. 5 69

675+ 311

6 837 й298

18 230 «+ 0,83 18

18 2,60 0,59

18 2,40 "- 0,80

2,10 0,66

Редактор

Заказ 2223 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Больные стафилококковым сепсисом

Больные острым гематоген ным остеомиелитом стафилококковой природы

Здо овые

Составитель И.Кадкина

Техред M.Mîðråíòàë Корректор А,обручар