5-(тозилглицил-l-пролил-l-аргинил)аминонафталин-1- метилсульфонамид в качестве анса - субстрата для определения тромбина

 

Использование: в биоорганической химии в качестве АНСА-субстрата для определения тромбина. Сущность изобретения: 5-(тозилглицил-1 -пролил-1 -аргинип)-аминонафталин-1-метилсульфонамид. Реагент I: тозилглицил-1 -лролин. Реагент II: дигидрохлорид 5-аргиниламинонафталин-1-метилсульфонамида. Процесс ведут в диметилформэмиде в присутствии 1-гидроксибензотриазола и дициклогексилкарбодиимида при охлаждении, с последующей нейтрализацией триэтиламином, разбавлением водой,экстракцией, упариванием. Выход 82%. C3iH4oNG07S2, т.пл.184-195°С. 20-8.7(.СНзОН), Лпах № (.СНзОН), Лпах254нм.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУ6ЛИК

ГОСУДАРСТВЕН-ЮЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (Г ОСПАТЕНТ CCCP) sUg+jgg, ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ЬЭ (Л

С)

T0S-Gl, g-Рт О-Ат -NH

SO2NHÑH, (21) 4872551/04 (22) 20.07,90 (467) 07,07.93. Бюл. М 25 (71) Институт биохимии АН Литвы и Институт молекулярной генетики АН СССР (72) С.Ю.Бутенас, А.А.Недоспасов, А.И,Палайма и В,Р,Балтенас (56) Недоспасов А.А., Незавибатько В,Н. и др. Возможный подход к анализу смесей протеаз. Изв. АН СССР, сер. Биол. 1989, ЬЬ 1, с. 128-132, Недоспасов А.А., Потаман А.Н. и др.

Биоорганич. химия, 1989, I+ 4, с, 444-451. (54) 5-(ТО 3 ИЛ ГЛ И ЦИЛ-1.-П РОЛ ИЛ-L-AP ГИН ИЛ)А МИН ОНАФТАЛ И Н-1-МЕТИЛ СУЛ Ь

ФОНАМИД В КАЧЕСТВЕ АНСА-СУБСТРАТА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТРОМБИНА

Изобретение относится к области биоорганической химии, а именно к новому пептидильному производному аминонафталинсульфамидов. конкретно к 5(тозилглицил-L-пролил-L-аргинил)аминонафталин-1

-метилсульфонамиду формулы который может быть использован в химии для получения искусственного хромогенного субстрата и в биохимии для определения тромбина методом АНСА-анализа.

« . Ж 1825800 А1 (c()q Г 07 5/06 С 12 N 9/74 (57) Использование; в биоорганической химии в качестве AHCA-субстрата для определения тромбина. Сущность изобретения: 5-(тозилглицил-L-пролил-L-аргинил)-аминонафталин-1-метилсульфонамид. Реагент I: тозилглицил-L-пролин. Реагент 1I дигидрохлорид 5-аргиниламинонафталин-1-метилсульфонамида. Процесс ведут в диметилформамиде в присутствии 1-гидро ксибензотриазола и ди ц и к л о ге кс ил к а рбодиимида при охлаждении, с последующей нейтрализацией тризтиламином, разбавлением водой, экстракцией, упариванием.

Выход 82%. Сз1Н40ИБО-Я, т.пл.184-195" С. (а)Π— 8.7 (С=1, СНзОН), 4 ах 254 нм.

Целью изобретения является поиск в ряду замещенных пептидильных производных аминонафталинсульфамидов новых соединений, позволяющих при использовании их в качестве АНСА-субстраТоВ определить тромбин.

Поставленная цель достигается новым

5-тозилглицил-L-пролил-L-аргиниламинонафталин-1-метилсульфонамидом в качестве

AHCA-субстрата.

Изобретение иллюстрируется примерами.

Пример 1. Дигидрохлорид 5-аргиниламинонафталин-1-метилсульфонамида.

3,3 г (10 ммоль) N -трет-бутилоксикарбонил аргинина (моногидрат) растворяют в 10 мл сухого ДМФА, заливают 30 мл сухого

1825800

55 толуола. Раствор упаривают при пониженном давлении до 10 мл, охлаждают до 10 С, добавляют 0,8 м (10 ммоль) сухого пиридина и 2,7 мл (15 ммоль) ди-трет-бутилпирокарбоната. Перемешивают 1 ч, добавляют порциями в течение 40 мин 2,6 г (11 ммоль)

5-амино нафталин-1-метилсул ьфонамида.

Перемешивают 3 ч при 20 С, после чего добавляют 1,3 мл (7 ммоль) ди-трет-бутилпирокарбоната и перемешивают еще 16 ч при

20 С. Реакционную смесь выливают в 100 мл сухого эфира, перемешивают 10 мин, эфир декантируют, остаток заливают 50 мл смеси трифторуксусная кислота — хлористый метилен (1:1) и перемешивают 2 ч при

20 С, концентрируют до 10 мл и заливают

100 мл сухого эфира. Образовавшийся продукт отсасывают, сушат, растворяют в 20 мл воды, отфильтровывают непрореагировавший аминонафталинсульфамид, Водный раствор экстрагируют 80 мл н-бутанола, органический слой отделяют, промывают 5 ным N3 Н СОз до р Н 7-8 (водного слоя), затем водой (2x10 мл), концентрируют до 15 мл и насыщают сухим HCI, Растворитель упаривают, остаток растирают с эфиром, образовавшийся осадок отсасывают и сушат.

Получают 4,3 r (93 ) целевого продукта, т.пл. 181-190 С, Вг=0.44 (БЦВ 412), lulls 7,9 (CI; СНзОН) ПМР (ДМСО):

2,38(C Н з).

Найдено, ; С 43,58; Н 5,75; N 18,32;

S 7,03; CI 15,56.

C17H26N6SO3CI2

Вычислено, %: С 43,87; Н 5,63; N 18,06;

S 6,89: С! 15,24.

Пример 2. 5-(тоэилглицил-L-пролилL-аргинил)аминонафталин-1-метилсульфонамид.

0,33 г (1 ммоль) тозилглицил-L-пралина, 0,14 г (1 ммоль) 1-гидроксибенэотриазола и

0,27 г (1,3 ммоль) дициклогексилкарбодиимида смешивают, добавляют 7 мл охлажденного до -20 С сухого диметилформамида, перемешивают на ледяной бане 0,5 ч. Растворяют 0,47 г (1 ммоль) дигидрохлорида

5-аргиниламинонафталин-1-метилсульфонамида, полученного в прим. 1, в 4 мл диметилформамида, раствор добавляют в реакционную смесь, перемешивают на ледяной бане еще 0,5 ч. Добавляют триэтиламин до рН 7, перемешивают еще 16 ч. позволяя реакционной смеси нагреться до 20 С, отфильтровывают выпавший осадок; реакционную смесь выливают в 100 мл воды.

Полученную суспензию экстрагируют четырежды по 10 мл смеси этилацетат-бутанол (1:1), органический слой отделяют и промываю трижды по 5 мл 5%-ным водным

11аНГО.. 10 -ным КН50 и г одпй г ;и тлоритель р аривают, оставшийся маслообразный остаток растирают с сухим эфиром, отфильтровывают, промывают эфиром, сушат.

Получают 0,57 r (82 ) целевого продукта, т.пл, 184-195 С. Рг=0,46 (БУВ 412), I rr I p

8,7 (С ; СНзОН), Найдено, : С 55,21; Н 6,13; N 12.18;

S 9,71.

Cgi H4pNg07Sg.

Вычислено, %: С 55,34; Н 5,99; N 12,49;

S 9,53.

ПМР (ДМСО)

Tos- Gl y-- Рг о-Ar HN (o go

$0гл н сиз

1,74 (м, 4Н, 2CHz), 1,83 (м, 4Н, 2CHg), 2,28 (с, ЗН, СНз), 3,25 (м, 2Н, СН2), 3,39(м, 2Н, СН ), 3,61(р,2Н, СН2),4,13(м, 1Н, СН),4,46(м, 1Н, СН), 7,28 (д, 2Н. 2СН-ароматические), 7,64 (q, 2Н, 2СН- ароматические), 5,30-8,72 (14Н, 6Ннафталин, 8Н-NH).

Пример 3. Анализ тромбина.

К О,З мл субстратной смеси, содержащей по 3,5 О.Е. (Л=ЗОО нм)/мл: 5-(f4 -тоэилглицил- -пролил- -аргинил)аминонафталин

-1-(н-бутил)сульфонамида и -метилсульфонамида, 0,1 О.Е, (Л =340 нм) данзилвалина (внутренний стандарт) в 0,05 М трис-HCI буфера рН 7,4 10,икл водного раствора тромбина, перемешивают, инициируют 2 мин при 37 С, добавляют СНзСООН до рН 4,3, перемешивают; добавляют 0,5 мл смеси этилацетат-гексан (2:1), опять перемешивают. верхний слой отделяют, высушивают, остаток растворяют в 0,05 М ацетата аммония в

35 ацетонитриле, хроматографируют на колонке Zorbax С-8 (4,6х250 мм) при 40 С и скорости потока 1 мл/мин и определяют

5-аминонафталин-1-сульфонамиды по максимуму поглощение при Л =254 нм. При завершении ферментативной реакции пик исходного субстрата исчезает (>99 ) и одновременно появляются пики продуктов ферментативного гидролиэа 5-аминонафталин-1-(н-бутил)-сульфонамида и -1-метилсульфонамида. Времена удерживания 8,3 мин и 2,3 мин, соответственно.

В таблице представлены результаты эксперимента, подтверждающие линейную зависимость определяемых количеств отщепленного аминонафталин-(N-метил)сульфамида от количества тромбина

Исходный раствор фермен га П.26 мг/мл бычьего тромбина. Бремя инкубации 12 мин, темпера ура 37" С, B.,, x д . г . i пия по поглощению Л=254 нм

1825800 т БОК-L-Arg-ОН HðO ! (т. БОК)гО, АНСА (Ме)

9З НС!

2НО Н-1 -Arg-AHCA (Me)

Tos-Gly-1 -Pro-OH. 1-оксибензотриаэол, дициклогексилкарбодиимид, тризтиламин

82

Tos-G ly-1.-Рго-1.-Arg-АН СА (Ме) Тов — 61 У-Р1 О-А1 9- N

2 3

Составитель А. Палэйма

Техред М. Моргентал Корректор И. Шулла

Редактор

Заказ 2306 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва. Ж-35, Раушская наб., 4/5

Проиэводс. påìíî-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина. 101

Ниже представлена схема синтеза

Для ТСХ использованы пластинки

Silufol UV-254, спектры ПМР сняты на спектрофотометре "Hitachl P-22" (90 МГц, Япония), углы вращения измерены на поляриметре фирмы Бекман, ВЭЖХ вЂ” на хроматографе фирмы Дю Пон (США).

Формула изобретения

5 Тозилглицил-L-пролил-L-аргинил)аминонафталин-1-метилсульфонамид формулы в качестве АНСА-субстрата для определе10 ния тромбина.

5-(тозилглицил-l-пролил-l-аргинил)аминонафталин-1- метилсульфонамид в качестве анса - субстрата для определения тромбина 5-(тозилглицил-l-пролил-l-аргинил)аминонафталин-1- метилсульфонамид в качестве анса - субстрата для определения тромбина 5-(тозилглицил-l-пролил-l-аргинил)аминонафталин-1- метилсульфонамид в качестве анса - субстрата для определения тромбина 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к производству ферментных препаратов, а именно к способу получения тромбина, применяемого в биоорганической химии

Изобретение относится к пептидам, в частности к получению производных трипептидов общей ф-лы Ri-W-CO-NH- ЦСНДОНа CO-NH-CH(COOH)-(CH2)2-CO-R3, где Ri-C4-Ce - циклоалкильная группа, группа циклогексил - низший алкил, фенильная группа, необязательно замещенная заместителем , группа фенил - низший С1-С2-алкил, где бензольное кольцо необязательно замещено заместителем мдроксизамеИзобретение относится к способу получения производных трипептидов или их фармацевтически приемлемых солей - новых биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине

Изобретение относится к новым биологически активным соединениям, а именно к L-пироглутамил-L-аспарагину и его производным общей формулы где Х О-трет-С4Н9, Y NH2 (соединение I); X OH, Y NH2 (II); X О-трет-С4Н9, Y О-трет-С4Н9 (III); X CH3, Y OCH3 (IV); X NHCH3, Y NH2 (V), обладающим способностью регулировать процессы обучения и памяти, которые могут найти применение в биологии и медицине

Изобретение относится к медицине, а именно к способам получения биологически активных веществ, обладающих иммуннорегулирующими свойствами, и может найти применение в медицине, ветеринарии, а также в экспериментальной биохимии

Изобретение относится к медицине, а именно к способам получения биологически активных веществ, обладающих иммуннорегулирующими свойствами, и может найти применение в медицине,ветеринарии, а также в экспериментальной биохимии

Изобретение относится к новым соединениям со структурой, близкой к структуре 15-деоксиспергуалина
Наверх