Способ получения имидазопиридазинов

 

Использование: в качестве противоопухолевых препаратов. Сущность изобретения: продукт формулы, 3 RrY-X-k -N-C02R2 N где RI - фенил, необязательно замещенный одной-тремя С1-С4-алкоксигруппами; R2 - С1-С4 алкил, необязательно замещенный С1-С4-галоидалкилом, гидроксильной группой ,, алкоксильной группой или атомом азота , входящим в морфоли ювый цикл, или моноили ди С:1-С4-алкиламиногруппой, или Ра-фенил; Нз водород или Ci-Ci-элкил. Реагент Т: соответствующий азидимидазо 1,2- Ь пиридазинкарбоновой кислоты, реагент 2: RaOH, где RS имеет указанные значения. Возможно последующее алкилирование. 5 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

РЗ

R,-Y-X -- . -N-COÐ й

N 3

К вЂ” У вЂ” Х.4. >-И-С02Я2 — .1 >(21) 4614684/04 (62) 4356488/04 (23) 12.08.88 (22) 25,07.,89 (46) 23.08.93. Вюл. М 31 (31) 8719368 (32) 15.08.87 (33) GB (71) Дзе Велкам Фаундейшн Лимитед (GB) (72) Симон Тинби Ходгсон (GB) (56) Вейганд-Хильгетаг. Методы эксперимента в органической химии. М.: Химия, 1968, с. 443-444. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИМИДАЗОПИРИДАЗИНОВ (57) Использование: в качестве противоопухоле в ых и репаратов. Сущность изобрете- . ния: продукт формулы, Предлагается способ получения новых имидазопиридазинов общей формулы где R1 обозначает фенильную группу, необязательно замещенную одной-тремя С -С4алкоксигруппами;

Rz обозначает С1-С4-алкильную группу, необязательно замещенную С>-С4-галоидалкилом, гидроксильной группой, алкоксильной группой или атомом азота, входящим в морфолиновый цикл, или моно-, „„QJ„, 1836372 АЗ

{я)з С 07 О 487/04//А 61 К 31/415, 31/50 (С 07 0 487/04, 233/66, 237/14) где R> — фенил, необязательно замещенный одной-тремя Ñ1-С4-алкоксигруппами; Rz—

С1-С4-алкил, необязательно замещенный

С4-С4-галоидалкилом, гидроксильной группой, алкоксильнай группой или атомом азота, входящим в морфолиновый цикл, или моно- или ди-С1-С4-алкиламиногруппой, или

И2-фенил; Яз — водород или С1-С4-алкил. Реагент 1 . соответствующий азидимидазо(1,2Ь1пиридазинкарбоновой кислоты, реагент 2: йзОН, где Яз имеет указанные значения.

Возможно последующее элкилирование, 5 табл. или ди-С -C4-ал кила миногруп пой, или Rz обозначарт фенил;

Яэ обозначает водород или С1-С4-алкил, Х вЂ” кислород;

У обозначает СН2, обладающих цитотоксической активностью.

Цель изобретения — синтез нового класса производных имидазопиридазинов с использованием известного способа, обладающих противоопухолевой активностью.

Получение промежуточных соединений, Промежуточное соединение! -3-амино6-(3,4,5-триметоксибензилокси)пи рида з и и.

1836372

3,4,5-Триметоксибенэиловый спирт (19,82 r, 0,1 моль) растворяют в ДМЭ (20 мл), добавляют за 15 мин к суспензии трет-бутоксида калия (11,22 r, 0,1 моль) в ДМЭ при перемешивании в атмосфере азота и при охлаждении в ледяной бане. Спустя 0,5 ч полученную смесь обрабатывают 3-амино6-хлорпиридазином (12,95 r, 0,1 моль) и спустя 1,5 ч нагревают при кипении с обратным холодильником в течение 3 ч. Полученную смесь охлаждают и фильтруют и отфильтрованный твердый продукт промывают эфиром. Полученный фильтрат выпаривают в вакууме до получения масла, которое разделяют между этилацетатом и водой, Органическую фазу промывают водой, сушат (NazSO4) и выпаривают до получения масла (А), которое хроматографируют на силикагеле, элюируя смесью 5$ метанола/хлороформ. Элюированные фракции объединяют до получения масла (В), которое тщательно растирают с хлороформом и дииэопропиловым эфиром до получения указанного в заглавии соединения в виде не чисто белого твердого продукта (9,44 r) т.пл. 142-144 С, ЯМР дн (СОС!з): 687 (1Н, J АВ, 8,8 гц

5-Н), 6,78(1Н, J АВ, 8,8 гц,4-Н), 6,72 (2Н, с. АрН), 5,38 (2Н, с, СНг), 4,45 (2Н, с, МНг), 3,87 (6Н, с, ОМе) и 3,84 (ÇH, с, OMe). ,Пример 1. 2,2,2-Трифторэтил-N(6)3,4,5-триметоксибензилокси(имидаэо(1, 2-Ь)пиридазин-2-ил)карбамат.

А. Этил-6-(3,4,5-триметоксибензилокси)имидазо(1,2-Ь)пи ридазин-2-карбоксилат.

Этилбромпируват (117 г, 0,6 моль) добавляют к 3-амино- 6-(3,4,5-триметокси)пиридазину (174,6 r, 0,6 моль) и 2,6-лютидину (62,4 r, 0,5 моль) в сухом ДМ (600 мл) при перемешивании в атмосфере азота. Полученную смесь нагревают при 100 С в течение 3 ч, охлаждают и концентрируют в вакууме, а затем обрабатывают водой и фильтруют до получения твердого продукта коричневого цвета, который промывают водой и эфиром. Твердую часть кристаллиэуют из ДМФ и воды до получения укаэанного в заглавии соединения s виде твердых кристаллов (38 r), т.пл. 159-163 С.

ЯМР дн (CDC13): 8,31 (1Н, с, ЗН). 7,84 (1Н, J АВ 8,8Гц8Н),6,82(1Н, J AB,8,8 Ãö,7Í), 6,70 (2Н, с, АрН), 5,30 (2Н, с, СНгАр), 4,46 (2Н, кв, J 7 Гц, ОСНгСНз), 3.88 (6Н, с, ОСНз), 3,86 (ЗН, с, ОСНЗ) и 1,44 (ЗН, т, J 7 Гц, СНз).

Б. 6-(3,4,5-Триметоксибенэилокси)имидазо(1,2-Ь)п иридази н-2-карбоновая кислота.

Продукт со стадии А (1.94 r, 5 моль) нагревают при кипячении с обратным холодильником при перемешивании с раствором гидроксида натрия (1 мл, 10 М, 10 ммоль), водой (9 мл) и метанолом (5 мл) в течение 20 мин. Полученную смесь охлаждают и подкисляют разбавленной соляной кислотой и фильтруют до получения твердого продукта, который сушат при 60 С в вакууме до получения указанного в заглавии соединения в виде порошка (1,5 г), т.пл, 22410 226 С (с разложением).

ЯМР дн (de-DMCO): 8,5 {1Н. с, ÇH), 8,07 (1Н, J АВ, 8,8 Гц), 7,05 (1H, j АВ 8,8 Гц, 7Н), 6,88 (2Н, с, ApH), 5,29 (2Н, с, СНгАр), 3,82 {6Н), с, ОСНз), 3.68 (ÇH, с, ОСНз) и 3,32 (1H, 15 шир. с. Согн).

В. 6-(3,4,5-триметоксибенэилокси)имидаэо(1,2-Ь)пиридазин-2-ка рбоновой кислоты азид.

Оксалилхлорид (0,13 мл, 1,5 ммоль) добавляют в продукт стадии Б (0,36 г, 1 ммоль), пиридин (0,079 г, 1 ммоль) в сухом бенэоле (5 мл) при перемешивании в атмосфере азота. Полученную смесь нагревают при кипении с обратным холодильником в течение 3

25 ч, охлаждают и выпаривают в вакууме до получения твердого продукта серого цвета, Этот продукт обрабатывают диоксаном (10 мл), водой (10 мл) и азидом натрия (в избытке) и интенсивно перемешивают в те30 чение ночи при комнатной температуре, Полученную смесь фильтруют и твердый продукт сушат в вакууме до получения укаэанного в заглавии соединения в вире порошка (0,29 г), т.пл, больше 139 С (с разложением).

ЯМРдн (СОС!з): 8,35 (1H, с, ÇH), 7,85(1Н, J АВ, 8,8 Гц, 8Н), 6,85 (1Н, J АВ 8,8 Гц, 7Н), 6,70 (2Н, с, АрН), 5,31 (2Н, с, СН Ар), 3,90 (6Н, с, ОСНз) и 3,88(ЗН, с. ОСНз).

40 Г. 2,2,2-трифторэтил-Щ6-(3,4,5-триметоксибензилокси)имидазо(1,2-Ь)пиридазин-2-ил)ка рбамат.

Продукт со стадии В (2,3 r, 6 ммоль)

2,2,2-трифторэтанол (примерно 3 мл) и толу45 ол (60 мл) нагревают при перемешивании в атмосфере азота при кипении с обратным холодильником до тех пор, пока реакция не завершится (по данным TCX) (приблизительноно 2 ч).

50 Полученную смесь охлаждают в течение ночи и фильтруют до получения твердого продукта, который промывают эфиром и сушат до получения указанного в заглавии соединения в виде порошка (0,43 r), т.плав55 ления 205-210 С (с разложением).

ЯМР дн (de-РМСО); 10,81 (1Н, шир. с, NH), 7,38 (1Н, J AÂ 8,8 Гц, 8Н), 7,85 (1Н, с, ЗН). 6,90 (1 Н, J AÂ 8 Гц, 7Н), 6,85 (2 Н, с, Ар Н), 5.52 (2Н, с, СНгАр), 4.83 (2Н, кв, J 9 Гц, l836372 добавляют порциями к перемешиваемой сус пе н зии метил-N-(6-(3,4,5-триметоксибензилокси)имидазо(1,2-Ь)пиридаэин-2-ил) 45 карбамата (9,51 г, 24,5 ммоль) в ДМЕИ (100 мл) в атмосфере азота при окружающей температуре. Полученную смесь обрабатывают йодометаном (4,9 r, 2,15 мл, 35 ммоль) и молярным эквивалентом гидрида натрия и 50 йодомвтана. Спустя 2 ч смесь выливают в воду (100 мл) и фильтруют до получения белого твердого продукта, который обрабатывают хроматографически íà SIOz, элюируя смесью 2 метанола/хлороформ. Продукт 55 перекристаллизовывают из ДМФ и воды до получения указанного в заглавии соединения в виде белого порошка (8,29 г), т.пл.

177-178 С.

CHzCFa}. 3,76 (6Н, с, ОСНз) и 3,65 (ÇH, с, ОСНз).

Пример 2. 2-Гидрооксиэтил-Щ6(3,4,5-триметоксибенэилокси)имидаэо(1,2Ь)пиридазин-2-ил)карбамат.

Способом, аналогичным способу примера 1 Г за исключением того, что неочищенный продукт хроматографируют на SIOz, элюируя смесью 5 метанола/хлороформ с последующей перекристаллизацией из смеси ДМФ/вода получают указанное в заглавии соединения в виде порошка, т.пл.

193-195 С.

ЯМР дн (бв-DMCO): 10,35 (1Н, шир, с, NH), 7,85 (1Н, J AB 8,8 Гц, 8Н). 7,83 (1H, с, 3H), 6,86 (1Н, J AB 8,8 Гц, ÇH), 6,84 (2Н, с, АрН), 5,25 (2Н, с, СН2Ар), 4,82 (1Н, т, J 4 Гц, ОН),4,15(2Н, м), 3,80(6Н, с, ОСНз) и 3,66(5Н, м, OCHz и ОСНз).

Пример 3. 2-(1-Морфолино)этил-N (6(3,4,5-триметоксибензилокси)имидазо(1,2Ь)пиридазин-2-ил)карбамат.

Способом, аналогичным описанному в примере 1 Г за исключением того, что неочищенный продукт хроматографируют на

$102, элюируя смесью 5 метанола/хлороформ, кипятят с небольшим избытком этанола до получения указанного в заглавии соединения в виде порошка, т.пл. 161162 С.

ЯМР дн (бв-DМСO): 10,30 (1Н, шир, с, NH), 7,88 (1 Н, с, ÇH), 7,85 (1 Н, J АВ 8,8 Гц, 8H), 6,78 (1Н, J АВ 8,8 Гц. 7Н), 6,85 (2Н, с, АрН), 5,26 (2Н, с, CHzAp), 4,22 (2Н, т, J 5Гц., СО OCHz), 3,80 (6Н, с, ОСНз), 3,68 (ÇH, с, ОСНз), 3,58 (4Н, м, CHzÎCHz), 2,59 (2Н, т, J

5 Гц, СО-OCHzCHzN) и 2,45 (м, СН2МСН2).

Пример 4. Метил-Щй-метил-6(3,4,5триметоксибензилокси)имидазо(1,2-b} пиридазин-2-ил)карбамат.

Гидрид натрия (1,26 г, 60 g, 31,5 ммоль) 5

ЯМР дн(бв-DMCO): 8.04 (1Н, с, ЗН), 7,96 (1Н. J АВ 8,8 Гц, 8Н), 6.92 (1H, J AB 8,8 Гц, 7Н), 6,86(2Н, с, АрН), 5,25(2H, ", CHz). 3,79 (9Н, с, ОСНз), 3,68 (ЗН. с, СО ОСНз) и 3,42 (3H. с, МСНз).

Пример 5, Метил-N-(N-этил-6-(3,4,5триметоксибензилокси)имидазо(1,2-Ь) пиридазин-2-ил)ка рбамат.

По способу, описанному в примере 4, получают указанное в заглавии соединение в виде белого твердого продукта, т.пл, 1531550 С.

ЯМР дн.(бв-ОМСО): 8,04 (1 Н, с, ÇH), 7,96 (1H, J.,AB 8,8 Гц, 8Н), 6,92 (1H, J АВ 8,8 Гц, 7Н),6,86(2Н, с, АрН),5,25(2Н, с, ApCHz), 3,90 (2Н, кв, СНрСНз), 3,78 (9Н, с, АрОСНз), 3.66 (3H, с, йСНз) и 1,19 (ЗН, т, СН2СНз).

Пример 6. Метил-Щ6-(3,4,5-триметоксибензилокси)имидазо(1,2-Ь)пиридаэин-2-ил)карбамат.

6-(3,4,5-Триметоксибенэилокси)имидаэо(1,2-Ь)пиридазин-2-карбоновой кислоты азид (пример 1) (1,0 r, 2,6 ммоль) нагревают при кипячении с обратным холодильником в течение 24 ч в смеси толуола (20 мл и метанола (примерно 1,5 мл). Полученную смесь охлаждают и выпаривают в вакууме до получения желтого твердого вещества. которое перекристаллизовывают из ДМФ и воды, получают указанное в заглавии соединение (1,05 г), т.пл. 213-215 С, а спектр RMP идентичен спектру продукта из примера 1.

Пример 7. 2,3-Дигидроксипропил-N(6-(3,4,5-триоксибензилокси)имидазо(1,2-Ь) пиридин-2-ил)карбамат.

Продукт примера 1 B подвергают взаимодействию с Солкеталем. полученным по способу примера 1 Г, эа исключением того, что после завершения реакции между ацилазидом и солкеталем неочищенную смесь выпаривают в вакууме, а затем нагревают при 60-70 С в течение получаса с разбавленной соляной кислотой и этанолом. Реакционную смесь нейтрализуют раствором бикарбоната натрия, выпаривают в вакууме и хроматографируют íà SIOz, элюируя смесью 77; метанола/хлороформ до получения укаэанного в заглавии соединения в виде белого твердого продукта, т. пл.

175-176 С.

ЯМР дн (бв-DMC0): 10,28 (1Н, шир. с, NH), 7,88 (1H, J AB 8,8 Гц, 8Н), 7,86 (1H, с, 3H), 6,87 (1Н. J AB 8,8 Гц, 7Н), 6,85 (2Н. с, АрН), 5.28(2Н, с, АрСН2),4,90(1Н, д, J 4Н, 2 -OH); 4,65(1Н, т„) 4 Гц, 1 -OH), 4,20-4,0 (2H, м, CÎ ОСН2), 3,80 (6Н, с, ОСНз), 3.80-3,70 (1H, м, HÎ-СН), 3,69 (ÇH. с. О СНз) и 3,40 (2 Н, т, J4Гц,,НОСН2).

1836372

Пример 8. 2-Диметиламиноэтил-N (6(3,4,5-триметоксибензилокси)имидазо(1,2Ь) пиридазин-2-ил)карбамат, Продукт примера 1 B подвергают взаимодействию с (2.-диметиламино)этанолом по способу примера 1Г, за исключением того, что неочищенный продукт обрабатывают хроматографически íà SION, элюируя смесью 5 метанола/хлороформ до получения твердого продукта, который промывают этанолом и сушат до получения указанного в заглавии соединения в виде белого порошка, т.пл, 185-186 С, ЯМР дн (бэ-ОМСО): 10,32 (1Н, шир, с, NH), 7,88 (1Н, J АВ 8,8 Гц,8Н), 7,85(1H, с, 3H), 6,89 (1Н, J АВ 8,8 Гц, 7Н), 6,85 (2Н, с.

АрН), 5,77 (2Н, с, АрСН2), 4,60 (2Н, т, J 4 Гц

СО ОСН2), 3,80 (6Н, с. ОСНз), 3,69 (3H. с, ОСНз), 2,50 (2Н, т, CHzN) и 2,21(6Н, с, NMeg), Пример 9. Фенил-N-(6-(3,4,5-триметоксибензилокси)имидазо(1,2-Ь)пиридазин-2-ил)ка рбамат.

Продукт примера 18 обрабатывают феНо/IoM по способу примера 1Г, за исключением того, что неочищенный продукт обрабатывают хроматографически на SION, элюируя смесью 5 метанола/хлороформ до получения твердого продукта, который промывают ацетонитрилом и сушат до получения указанного в заглавии соединения в виде белого порошка, т.пл. 210-213 С.

ЯМР дн (СОС!з): 10,12 (IH, шир, с, NH), 8,05 (1Н, с, ЗН), 7,80 (1Н, J АВ 8,8 Гц, 8Н), 7,55-7,15 (5Н, м, Ф), 6,69 (2Н, с, ApH), 6,67 (1Н, J AB 8,8 Гц, 7Н), 5,28 (2Н, с, ApCHz) и

3,90 (9Н, с, ОСНз}.

Результаты биологических тестов.

А. Анализ на полимеризацию тубулина.

1. Получение тубулина.

a) свежеполученный мозг лошади, в) буферы:

BBG . 10 мм MES*, 2 мМ EGTA*, 1 мМ

Mg(SO4), 4 M глицерина, 2 мМ дитеэритритола (pH 6,9 при 23 С), BB 1 NaOH;

BBZG как BBG, но без 8М глицерина, и

1 MM GTP*.

* MES-2(N-морфолино)этаносульфоноВэя кислота, EGTA — этиленгликоль-бис-P-аминоэтиловый эфир N,N,N,N -тетрауксусная кислота, GTP — гуанозинтрифосфат.

Все манипуляции осуществляют при

4 С, если нет других указаний. Лошадиный мозг промывают в ледяном BBG буфере и удаляют кровеносные сосуды и мозговые оболочки. После взвешивания кору мозга измельчают гомогениэируют в 75 мл BBG буфера на 100 г мозга, центрифугируют при

6500g в течение 15 мин и после удаления надосадочной жидкости снова центрифугируют при 100000g 75 мин, Измеряют объем

5 надосадочной жидкости (v, мл) и добавляют

10 мл (10 мМ) GTP (литиевая соль) в Н20.

Полученную смесь инкубируют в запаянных ампулах для центрифуги {30 мин при

34 С) во встряхиваемой водяной бане для

10 полимеризации тубулина, После полимеризации ампулы балансируют и центрифугируют при 100000g (1 ч при 27ОC) и предварительно нагретом роторе. Центрифугированной с высокой скоростью осадок

15 снова суспендируют в ч/4 мл ВВ буфера, препарат перемешивают на льду в течение

30 мин и центрифугируют при 100000g (1 ч при 4 С) для удаления стабилизированных на холоде микротубул. Равный объем BBZG

20 буфера добавляют к надосадочной жидкости, которую быстро замораживают в пластиковых чашках, плавающих на суспензии твердый COz/этанол, и хранят в течение ночи при -80 С. Примерно через 18 ч заморо25 женные образцы тубулина оттаивают, добавляют 10 мМ GTP в воде до получения конечной концентрации 1 мМ и измеряют новый объем (w мл).

Цикл полимериэации (деполимериза30 цию) повторяют точно в соответствии с приведенным ранее описанием, но заменяя нэ до получения дважды обработанного тубулина.

2. Турбидиметрический анализ полиме35 ризации тубулина.

Аппаратура: записывающий спектрофотометр с шестью положениями, термостэтированное кюветное отделение, полное отклонение шкалы 0,2 ед. поглощения.

40 B кювете спектрофотометра объемом 1 мл перемешивают 100 мкл 10 мМ GTP (литиевая соль) буферированного ВВ буфером, 10 мкл воды или ДМСО в зависимости от выбранного растворителя лекарства, ВВ бу45 фер и препарат тубулина так, чтобы окончательное повышение Аз5о нм составило,0,15 ед после 16 мин (приблизительное

100 мкл препарата турбулина или 2,5 мк протеина) в конечном объеме 1 Mll при 37 С.

50 Все реэгенты хранят на льду. Полимериэацию иницйируют, повышая температуру до

37 С, и-регистрируют возрастание Аз о нм трех образцов по сравнению с контрольной кюветой. Контрольный образец содержит

55 аналогичным образом инкубировэнную смесь либо без тубулина, либо с добавлением 1 мМ Са2 . Рассчитывают возрастание по сравнению начальным Аз5о нм через 10 мин после завершения 1 ag фазы (контрольная полимеризация ээ это время составляет

1836372

80%) и выражают как процент от контрольного значения для ряда концентраций препарата. Определяют концентрацию препарата, необходимую для 50% изменения (ИК о) в контрольном значении, Для соединения примера 6 полная полимеризация тубулина ИК о 0,42 мкм, В. Анализ на образование колоний

Р388Д1.

В этом анализе клетки из адаптированной 1и чего линии лимфовидных неоплазм мыши Р388 вначале экспонируют сериями разбавлений концентраций тестового соединения а течение 24 ч в культуре. После этого определяют способность обработанных таким образом клеток образовывать дискретные колонии за 14 дней после повторного суспендирования в полутвердой не содержащей препарата среде.

В начале клетки в Log роста помещают в отдельные 25 см складки для культуры з тканей, каждый из которых содержит конечный объем 5 мл, Через буферированного

RPMI 1640 культурэльной средой с добавлением 10% сыворотки плода теленка, антибиотиков и тестового соединения. Все соединения подготавливают вначале а соответствующих концентрациях в ДМСО, 25 мкл которого добавляют затем в каждую склянку. Все соединения оценивают при концентрациях, изменяющихся последовательно с коэффициентом 4, начиная с верхней концентрации в 4 раза большей, нежели та, о которой уже известно, что она ингибирует пролиферацию этих клеток на 8090% в предварительном пролиферативном анализе.

Через 24 ч экспонирования по тестовому соединению клетки считают и известное количество живых клеток переносят в 15 миллилитровую ампулу для центрифуги, в которую затем добавляют 4 мл 0,25%-ного агарозного раствора. желирующегося при низкой температуре в полной ЯРМ! тканевой культуральной среде. Через 13 дней инкубирования при 37 С в верхнюю часть, каждой ампулы добавляют 1 мл 1%-ного йодонитротетразолилвиолета и дают возможность проникнуть через агарозу в течение 24-28 ч. Этот краситель разлагается живыми клетками, давая нерастворимый красный кристаллический продукт, который облегчает счет колоний.

Образцы отбирают из каждой ампулы и считают количество колоний, содержащих минимум 50 клеток. Определяют концентрацию соединения, необходимую для ингибирования образования колонии íà 50% относительно контрольных клеток, инкуби5

55 рованных в тех же условиях. но без тестового соединения.

Результаты анализа на образование

Р388Д1, колоний: уля соединения примера

6 ИКао (М) 1,32х10

С. Тест на лимфоцитную лейкемию

Р 388/О, Мышей СД2-F одного пола весом 3-20 г использовали в этом опыте. Контрольным и тестовым животным вводили внутрибрюшинно суспензию 10 живых Р388/О опухоб левых клеток в день О. В каждом тесте исследовали несколько уровней доз, которые давали LDzp для соединения, каждый уровень доз вводили группе из шести животных. Тестовое соединение приготавливали либо а физиологическом растворе, содержащем 0,05% таина 80, либо в дистиллированной воде, содержащей 5% декстрозы, и вводили внутрибрюшинно в дни 1,5 и 9 после имплантации опухолевых клеток. Дозы рассчитывали в соответствии с индивидуальным весом животных, Фиксировали день гибели для каждого животного и для каждой группы определяли среднее значение. Разницу между средним значением времени выживания для контрольной и обработанной групп выражали как процент возрастания продолжительности жизни (IZS).

Данные приведены в табл.1.

Д. Тест мышей.

Тестовые соединения подготавливали, как описано для теста на лимфоцитную лейкемию Р388/О (С), и вводили внутрибрюшинно в различных уровнях доз группам из шести ОД2-F> мышей одного пола весом

20 + 3 г в дни 1,5 и 9. Мышей наблюдали вплоть до 14 дней (считая со дня 1) и определяли количество смертей в каждой группе и L02o, Результаты приведены в табл,2, Е. Активность (in vivo) против устойчивых к лекарствам опухолей.

Используя аналогичную методику с процедурой теста на лимфоцитную леккемию

Р388/0, соединение примера 6 оценивали против Р388/О опухолей, которые были сделаны устойчивыми к следующим стандартным клинически используемым антиопухолевым агентам; бис-хлоронитрозомочевина (BCNU), циклофосфамид (G PA), адриамицин (ADR), актиномицин 0 (Аст О), метотрексат (МТХ). 5-фтороурацил (5 FU), цис-платина (Cis/Pt), винкристин (VCR), Амсэкрин (AMSA).

Результаты приведены в табл,3, F. In vItro активность против линий опухолевых клеток человека, Линии опухолевых клеток человека

DZO-1. НСТ-116,m WiDr и А549 экспонировали концентрациями последовательных

1836372 разбавлений тестовых соединений после 96 ч культуры. Определяли способность таких клеток к пролиферации за тестовый период.

Клетки в Log роста помещали в чашки с множеством углублений для тканевой культуры (96 лунок) на 100 мкл/лунку RPMI 1640 культуральной среды с дополнением 10% сыворотки плода теленка, антибиотиков и тестового соединения. Все соединения приготовили вначале в соответствующих концентрациях в ДМСО. причем окончательная концентрация в этом растворителе была в

20 раз выше, чем нужно для пластин. Затем проводили 1 в 10 разбавление в полной среде перед добавлением 100 мл в каждую лунку пластины. Все соединения оценивали в концентрациях в интервале последовательных четырехкратных уменьшений с верхней концентрации, которая была в 4 раза больше, чем уже известная концентрация, ингибирующая пролиферацию клеток лимфоидной неоплаэмы мыши P388Dt на 80-90% в предварительном пролиферационном анализе, Через 96 ч пролиферацию клеток, экспонированных тестовому соединению, сравнивали с контрольными, необработанными клетками одним из двух способов.

1. Культуральную надосадочную жидкость отсасывают и клетки фиксируют и подкрашивают, добавляя раствор метиленового синего (5 г/л 50% этанола: вода, 100 мкл/лунку). Спустя 30 мин при комнатной температуре несвязанный краситель отмывают, погружая пластины в воду. Окрашенныее клетки солюбилиэируют в течение ночи, используя 1% Саркосил (Сигма) в фосфатнобуферированном солевом растворе (100 млк/лунку). Определяют поглощение на

ELZSA пластинах спектрофотометра на длине волны 620 нм. NKM определяют как концентрацию препарата, которая снижает поглощение до 50% от контрольного значения для культур без препаратов. Этот способ испольэовали для клеточной линии

0LD-1.

2. 20 мкл МТТ (5 мг/мл в РВ9 добавляют в каждую лунку, После инкубирования в течение 4 ч среду из каждой из лунок отсасывают и заменяют 200 мкл ДМСО для растворения Образовавшихся кристаллов формазана, Записывают поглощение на

ELZSA пластинах спектрофотометра на длине волны 540 нм. ИКАО определяют как концентрацию препарата, которая снижает поглощение до 50% от контрольного значения для культур без препарата. Этот способ использовалидля WIDr, НСТ-116 и А549 клеточных линий. Данные приведены в табл,4)

G. In vlvo активности соединения из

5 примера 1 против опухолей у мышей

Используя процедуру, аналогичную с процедурой лимфоцитной лейкемии

P388/О, тестовое соединение примера 6 оценивали по отношению к мышиным опу10 холям 816, L1210 и М5076. Суспензию 10 опухолевых клеток имплантировали внутрибрюшинно контрольным и тестовым животным в день О. 816 опухолевые клетки вводили внутрибрюшинно в виде 1:10 Brei

15 клеток в день О. Тестовое соединение вводили внутрибрюшинно в день 1,5 и 9. Для 816 и М5076 мышей в каждой группе было по 10, а для L 210 по 6 мышей в группе. Записывали день гибели каждого из животных и рассчи20 тывали процент повышения длительности жизни (LZS). Полученные результаты приведены в табл.5.

Формула изобретения

Способ получения имидазопиридази25 нов общей формулы 3

Й1 У ф-И-СО Р

2 2

30 где R> — фенильная,группа, необязательно замещенная 1-3-мя С1-С4-алкоксигруппами;

R2 — С1-С4-алкильная группа, необязательно замещенная С>-С4-галоидалкилом, гидроксильной групПой, алкоксильиой груп35 пой или азотом, входящим в морфолиновый цикл, или мОнО, или ди Cl С4 алкиламиног руппой, или фенил;

R3 водород или С1 С4 алкил;

Х вЂ” кислород;

40 Y — СН2, отличающийся тем, что соединение общей формулы где R<, Y и Х имеют указанные значения, подвергают взаимодействию с соответству50 ющим спиртом общем формулы

R2OH, где Rz имеет указанные значения, с последующим при необходимости алкилированием соединения, в котором R3—

55 водород, для получения соединения, в котором R3 — С1-С4-алкил.

1836372

Таблица l

Таблица 2

Таблица 3

1836372

Таблица 4

Таблица 5

Составитель С. Жукова

Техред М.Моргентал Корректор M. Максимишинец

Редактор Г. Бельская

Производственно-издательский комбинат "Патент". г. Ужгород, ул,Гагарина, 101

Заказ 3005 Тираж Подписное

В НИИПИ Государственного комитета hO изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Способ получения имидазопиридазинов Способ получения имидазопиридазинов Способ получения имидазопиридазинов Способ получения имидазопиридазинов Способ получения имидазопиридазинов Способ получения имидазопиридазинов Способ получения имидазопиридазинов Способ получения имидазопиридазинов 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к новому химическому соединению ряда триазиноиндола, а именно к гидрохлориду 3-/3-(4-метилпиперазин-1-ил)пропилтио/-1,2,4-триазино[5,6-b]индола формулы 1 , который защищает печень от отравления четыреххлористым углеродом

Изобретение относится к новым производным 1,2,4-триазиноиндола, конкретно к новому соединению гидрохлориду 3-(2-дипропиламиноэтилтио)-1,2,4-триазино(6,5-b)индола формулы I защищающему печень от отравления четыреххлористым углеродом

Изобретение относится к новым производным 1,2,4-триазино[5,6-b]индола, конкретно к новому соединению гидрохлориду 8-амино-3-(2-морфолиноэтилтио-(1,2,4-триазино[5,6-b]индола формулы I защищающему печень от отравления четыреххлористым углеродом и ускоряющему процессы восстановления после физических нагрузок

Изобретение относится к гетероциклическим соединениям, в частности к получению п-замещенных a феноксипропионовой кислоты формулы (см

Изобретение относится к гетероциклическим соединениям, в частности к получению N-бензоилмочевины фор-лы (X)N CH=CH-CH=CH-CH=C(CONHCONH - Q) (I) где X-H, галоген или нитрогруппа, N=1 или 2, или 3, Q - группа формул II @ или @ где Y<SB POS="POST">1</SB> - C<SB POS="POST">1</SB> - C<SB POS="POST">6</SB>-алкил, возможно замещенный C<SB POS="POST">1</SB> - C<SB POS="POST">3</SB>-алкоксилом, C<SB POS="POST">1</SB> - C<SB POS="POST">3</SB>-алктио-, циано-, тиоцианогруппой или галогеном, возможно замещенные галогеном C<SB POS="POST">1</SB> - C<SB POS="POST">6</SB>-алкоксил или C<SB POS="POST">1</SB> - C<SB POS="POST">6</SB>-алкоксикарбонил, Y<SB POS="POST">2</SB> - H, галоген, нитрогруппа, C<SB POS="POST">1</SB> - C<SB POS="POST">6</SB>-алкил, возможно замещенный галогеном C<SB POS="POST">1</SB> - C<SB POS="POST">3</SB>-алкоксилом, C<SB POS="POST">1</SB> - C<SB POS="POST">3</SB>-алктиоили цианогруппой, C<SB POS="POST">1</SB> - C<SB POS="POST">6</SB>-алкоксил или C<SB POS="POST">1</SB> - C<SB POS="POST">6</SB>-алкоксикарбонил, Z -H, галоген, трифторметил или нитрогруппа, A и B - группа -CH= или атом N и, если один из A и B является группой- -CH-, а другой является атомом N, при условии (I), что когда Q является группой ф-лы (II) где A-группа -CH=, указанная группа XN CH=CH-CH=CH-CH=C(CONHCONH -) является группой NO<SB POS="POST">2</SB>-C=CH-CX=CH-CH=C/CONHCONH-/, где X-H, а Y<SB POS="POST">1</SB> - C<SB POS="POST">1</SB> - C<SB POS="POST">6</SB>-алкил, Z - не является H, галогеном или трифторметильной группой, или Q - группа формулы I, где A - N, а Y - трифторметил, а Y<SB POS="POST">2</SB> - отличен от H, которые обладают противоопухолевыми свойствами и могут найти применение в медицине

Изобретение относится к гетероциклическим соединениям, в частности к получению 6-(ациламиноарил)-4,5-дигидро-3(2Н)-пиридазинопроизводных или их фармацевтически приемлемых солей

Изобретение относится к гетероциклическим соединениям, в частности к способу получения производных пиридазинона (ПД) или их водорастворимых солей с фармацевтически приемлемой кислотой, которые обладают кардиотонической активностью и могут найти применение в медицине
Наверх