Антиген для диагностики сапа

 

Использование: ветеринарная иммунология , антиген, обнаружение агглютининов в сыворотке крови садзараженных животных. Сущность изобретения: антиген для диагностики сапа представляет собой гомогенную взвесь в буферном растворе инактивированной автоклавированием культуры штамма Pseudomonus mallei № 5584, выращенной на синтетической питательной среде и окрашенной органическим красителем. Антиген предназначается для экспресс-метода исследования сыво отки крови лошадей на сап в пластинчатой реакции агглютинации. Комиссионные проверки пластинчатой РА с цветным сапным антигеном при исследовании здоровых и больных сапом лошадей показали ее эффективность и пригодность для практического применения в лабораторных и полевых условиях, возможность выявления лошадей в ранней стадии заражения, до появления состояния повышенной чувствительности к маллеину, и при хроническом течении болезни. 1 табл. качестве разбавителя - Ьуферный раствор, включающий молочную кислоту, гидроокись натрия, хлорид натрия, фенол в дистиллированной воде с рН 3,0-4,0 при следующем соотношении компонентов: Окрашенные клетки штамма Pseudomonas mallei № 5584 Молочная кислота Гидроокись натрия Хлорид натрия Фенол

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

Е ПАТЕНТНОЕ

1: (50 — 170) х х10 кл/мл

120,0 — 350,0 г

18,0 — 22,0 г.

8,0-9,0 г

4,5 — 5,5 г

До1л

1) 4920937/13

2) 16.01,91

6) 30.08,93. Бюл. № 32

1) Всесоюзный государственный научноонтрольный институт ветеринарных препаатов, Бурятский сельскохозяйственный нститут и Государственная курская биоабрика

2) А.Н.Шаров, Н.К.Букова, А.И.Климанов, И.Коровенков и B.Ï.Ñóõàíîâ

3) Всероссийский государственный науч-исследовательский институт контроля, андартизации и сертификации ветеринарх препаратов

56) Ветеринарные препараты./Под ед.Д.Ф.Осидзе. M.: Колос, 1981, с.293 — 294.

Владимиров А.А, Об агглютинации бакериальными фильтратами сапных кульур. — Мед.обозрение, 1900, с.12, Изобретение относится к ветеринарной ммунологии, в частности к антигену для бнаружения противосапных агглютининов сыворотке крови зараженных животных и иагностики болезни серологическим метоом.

Цель изобретения — повышение активости и специфичности антигена для диагнотики сапа, повышающего эффективность сследования лошадей íà can.

Это достигается тем, что антиген для иагностики сапа из клеток возбудителя соержит суспензию окрашенных клеток тамма Pseudomonas mallei N 5584, а в Ж 1837889 АЗ (Я)5 А 61 К 39/02, G 01 N 33/531 (54) АНТИГЕН ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ САПА (57) Использование: ветеринарная иммунология, антиген, обнаружение агглютининов в сыворотке крови сапзараженных животных.

Сущность изобретения: антиген для диагностики сапа представляет собой гомогенную взвесь в буферном растворе инактивированной автоклавированием культуры штамма Pseudomonus ваИе) № 5584, выращенной на синтетической питательной.среде и окрашенной органическим красителем.

Антиген предназначается для экспресс-метода исследования сыво отки крови лошадей на can в пластинчатой реакции агглютинации. Комиссионные проверки пластинчатой PA с цветным сапным антигеном при исследовании здоровых и больных сапом лошадей показали ее эффективность и пригодность для практического применения в лабораторных и полевых условиях, возможность выявления лошадей в ранней стадии заражения, до появления состояния повышенной чувствительности к маллеину, и при хроническом течении болезни, 1 табл. качестве разбавителя — Ьуферный раствор, включающий молочную кислоту, гидроокись натрия, хлорид натрия, фенол в дистиллированной воде с рН 3,0 — 4,0 при следующем соотношении компонентов:

Окрашенные клетки штамма

Pseudomonas mallei

¹ 5584

Молочная кислота

Гидроокись натрия

Хлорид натрия

Фенол

Дистиллированная вода

1837889

Антиген предназначен для применения в пластинчатой реакции агглютинации для выявления противосапных агглютининов в сыворотке крови животных и таким образом иммунодиагностики сапа.

Штамм Рзенбоаопаз mallei !Ф5584 применяется для изготовления противосапных диагностикумов (Инструкция по изготовлению и контролю антигена сапного для реакции связывания комплемента, утв. ГУВ MCX

СССР 17.08.84).

Пример 1. Для изготовления антигена культуру возбудителя сапа штамма

Pseudomonas malleI hL 5584 выращивают на синтетической питательной среде Сотона, инактивируют прогреванием при температуре 90-100 С в течение 1 ч. Бактерийную массу отделяют центрифугированием, осадок промывают дистиллированной водой, центрифугируют и суспендируют в физиологическом растворе с 0,5 (, фенола.

Определяют концентрацию клеток во вэеси в международных единицах мутности (MEM) по стеклянному единому стандарту мутности для бактерийных вэвесей, подсчитывают количество клеток в 1 мл из расчета, что 10 MEM составляют 1,65 млрд/мл, Для окрашивания, клеток используют раствор органического красителя на дистиллированной воде. Количество красителя, необходимое для окрашивания полученной массы клеток, определяют титрованием.

Взвесь клеток возбудителя Pseudomonas

maNel с установленным количеством красителя выдерживают при температуре

20-25 С, затем отделяют жидкость центрифугированием, осадок ресуспендируют s буферном растворе следующих образцов; рН 3,0-4,0 (120,0-350,0 г молочной кислоты, 18,0 — 22,0 r гидроокиси натрия, 4,5-5,5

r фенола, 8,0-9,0 хлорида натрия, дистиллированной воды до 1 л).

Образцы испытаны в PA с позитивной сапной сывороткой из расчета содержания в 1 мл 50-170 млрд микробных клеток.

Получают следующие серии антигена:

Г! родолжение таблицы

Пример 2. Для диагностики сапа одну каплю сыворотки крови животного смешивают с одной каплей антигена на белой эмалированной пластинке с лунками и учитывают реакцию в течение 4 мин. При наличии противосапных агглютининов в те15 чение 0,5-4 мин в лунке происходит образование окрашенных хлопьев агглютинина различной окраски в зависимости от используемого красителя, жидкость просветляется. Окрашенные образцы

20 антигенов испытывают в пластинчатой PA c позитивной сапной сывороткой. Во всех случаях наблюдался крупный агглютинат, соответствующего цвета с полным просветлением жидкости в лунке. При испытании образцов с негативной сывороткой реакции не наблюдалось.

Пример 3. Проводят проверку видо.вой специфичности антигена I, И и И!серий испытанием его с сывороткой крови 420

30 лошадей благополучных по сапу хозяйств разных районов страны, а также с гипериммунными поливалентными сыворотками разных серогрупп и вариантов: Π— и Н-сальмонеллеэными, лептоспирозными, О-коли сывооотками, сибиреязвенной, листериозной, противорожистой, псевдомонозной, бруцеллезной, туберкулезной, овисной и др.

Во всех случаях при наблюдении за ре40 акцией в течение 4 мин получены отрица- тельные результаты, указывающие на высокую степень видовой специфичности антигена, Слабые признаки агглютинации проявляются при выдерживании смеси

45 антигена с некоторыми сыворотками более

4 мин, Положительный результат получен при испытании антигена с мелиоидозной сывороткой в течение 0,5-4 мин, что обьясняется

50 очень близкой антигенной структурой возбудителя сапа и мелиоидоза, Пример 4. Чувствительность реакции агглютинации с цветным сапным антигеном определяют при исследовании 2535 проб сыворотки крови лошадей в стране, неблагополучной по сапу. Живогных одновременно обследуют на can двукратной внутрикожной маллеиновой пробой и клиническим осмотром, кровь исследуют в PCK с сапным антигеном для PCK.

1837889 с

P ло (с ва ж ня ся н м те

4 и р

ro ти с

Составитель Н. Букова

Техред М.Моргентал

Корректор Н. Кешеля дактор

Результаты исследования представлев таблице.

Иэ полученных данных следует, что PA азработанным антигеном в сравнении с

К выявляет вдвое большее количество адей, зараженных возбудителем сапа ответственно, 4.6 и 2,2ф к числу обследоных), а также определенное количество вотных, которые по результатам примещихся методов исследования считаютздоровыми.

Пример 5. Проводят проверку активти антигена испытанием его с гиперимнными сапными сыворотками при пературе 4-6 и 20-25 С. В течение 0,5ин появились практически равноценные ожительные реакции при обеих темперах во всех разведениях сывороток, что орит о возможности использования анена для постановки PA при любых плюых температурах.

Использование пластинчатой реакции лютинации с цветным сапным антигеном етеринарной практике позволяет повыь эффективность экспресс-диагностики лезни, расширить ассортимент высокоэффективных диагностикумов, пригодных к использованию в лабораторных и полевых условиях.

5 Формула изобретения

Антиген для диагностики сапа, содержащий клетки возбудителя Pseudomonas

mallei в разбавителе, отл и ч а ю щи и с я тем, что, с целью повышения активности и

10 специфичности. из клеток возбудителя он содержит окрашенные клетки штамма

Pseudomonas mallei М 5584, а в качестве раэбавителя — буферный раствор, включающий молочную кислоту, гидроокись натрия, 15 хлорид натрия и фенол в дистиллированной воде, с рН 3,0-4,0 при следующем соотношении компонентов:

Окрашенные клетки штамма

Pseudomonas mallei

М 5584 (50 — 170)х х10 кл/мл

Молочная кисло а 120-350 г

Гидроокись натрия 18-22 г

Хлорид натрия 8,0--9,0 г

Фенол 4,5-,5,5 г

Дистиллированная вода До 1 л.