Способ получения твердофазного реагента

 

Использование: синтез реагента для синтеза в твердой фазе пептидов, гликопептидов и протеинов. Сущность изобретения: взаимодействие органического полимера, содержащего радикалы с концевыми аминометильными группами с соединением формулы BCR2-CR1-CH2-CH2X, где В2 - органический радикал с концевой карбоксильной группой, RI и R2 имеют одинаковые или различные значения и означают водород , алкил; X - гидроксил или галоген.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ. Й л ЧЕФИИ ::::. . ИОТЕ1 А

6 (21) 4355871/05 (22) 09.06.88 (46) 30.08.93. Бюл. % 32 (31) P 3720269.3 (32) 19.06.87. (33) 0Е (71) Орпеген Медициниш"Молекулярбиологише Форшунгсгезельшафт мбХ (DE) (72) Хорст Кунц и Бертольд Домбо (DE) (56) Ходж П. и др. Реакции на полимерных подложках в органическом синтезе. M.:

Мир, 1983, с.432 — 433.

Изобретение относится к способам получения твердофазного реагента, который содержит аллиловые боковые цепи, предназначенного для синтеза пептидов, гликопептидов или протеинов.

Целью предлагаемого изобретения является получение твердофазного реагента для синтеза в твердой фазе пептидов и гликопептидов, при котором пептиды и гликопептиды могут быть отщеплены от полимерного носителя селективно и в таких мягких условиях, при которых никакого расщепления гликозидных связей или аномеризаций не происходит, Поставленная цель достигается предлагаемым способом получения твердофазного реагента, заключающимся в том; что органический полимер, содержащий аминометильные группы, обрабатывают соединением формулы: В - CRz = CR> - СН2Х, где В— органический радикал с концевой карбоксильной группой, Ri и В имеют одинаковые или различные значения и означают водород, алкил, а Х вЂ” гидроксил или ranore, В результате синтези руют полимер, содержащий боковые аллиловые группы, формулы

„„5U„„1838329 АЗ (я)5 С 08 F 12/14, 8/10; С 07 К 1/04 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТВЕРДОФАЗНОГО РЕАГЕНТА (57) Использование: синтез реагента для синтеза в твердой фазе пептидов, гликопептидов и протеинов, Сущность изобретения: взаимодействие органического полимера, содержащего радикалы с концевыми аминометильными группами с соединением формул ы В С Кг-CR1-CHz-CHzX, гд е В2 органический радикал с концевой карбоксильной группой, R< и Rz имеют одинаковые или различные значения и означают водород, алкил; Х вЂ” гидроксил или галоген.

Р+ Вз - СВ2= CR1- CHzX/n, (1) где Вз — спейсер, R<, Rz и Х имеют указанные выше значения.

С использованием синтезированного реагента осуществляют синтез незащищенных или частично защищенных пептидов, гликопептидов, нуклеотидов, гидроксикарбоновох кислот, бикарбоновых кислот или трикарбоновых кислот, .

Вследствие исключительно мягких условий отщепления по изобретению возможно селективно отщеплять пептиды, нуклеотиды и другие остатки, беэ разрыва гликозидных связей или аномериэиции, или изомеризации, Твердофазный реагент по изобретению можно использовать также в качестве твердой фазы в других технологиях в твердой фазе, например, для синтеза олигонуклеотидов, которые при необходимости могут . быть дополнительно нарощены энзимным путем, например. до определенных последовательной ДНК, для последовательного анализа, а также при реакциях, при которых энзимы, каталитически действующие кислоты

Льюиса, редоксинные системы и тому подо1838329 35 бное за счет иммобилизации в результате адсорбции, полимеризации, пробкообразования и т,п. приводятся к твердому виду, что облегчает дозировку; дальнейшую обработку и отделение продуктов реакции.

Синтез полимерных носителвй с аллиловыми анкерными группами, Для синтеза полимеров общей формулы

1 с боковыми цепочками, которые несут аллиловые группы, можно использовать, например, хлорметилированный полистирол, который с помощью фталимид-калия через производные фталоиламида переводят в аминометил полистирол.

Аминометилированный полистирол превращают в соединение общей формулы

1, при реакции с соединениями ацила и алкила, которые имеют терминальную группу аллил-галогенида, - сложного эфира или спирта, например, с 4-бромкротоновой кислотой, в присутствии дициклогексилкарбодиимида (DCC) и 4-диметиламинопиридина (DMAP).!

СН O СН2NH2+ВГСН2-СН—

1 сн, -eOOH CH O eH2 лефиля

Вместо бромкротоновой кислоты можно использовать более длинноцепочечные замещенные аллилом алкенкарбоновые кислоты, например, с формулой X-CHz-CH=CH-(CHz)<-CÎ0Í, где Х вЂ” является бромом, а к — например, равен 0 или 7, Для иллюстрации изобретения приведены следующие примеры.

Пример 1. 2 r аминометилированного полистирола (0,8 мэквив. N Hz/г смолы) в 40 мл абсолютного метиленхлорида перемешивают при комнатной температуре в течение около 16 часов с N-Br-9-ундеценовой кислотой (6 ммоль) в присутствии дициклогексилкарбомида (DCC) (7,5 ммоль) и (4-диметиламинопиридана (DMAP) (1,65 ммоль).

При этом согласно приведенному ниже уравнению реакций получают твердую фазу с аллильной боковой цепью. После отфильтровывания продукта реакции последний промывают метиленхлоридом, метанолом, диметилформамидом и еще раз метиленхлоридом, после чего проводят сушку в высоком вакууме при температуре 30 С.

ОН2

Ен О Енгинг+з енг- бн=СН®2

- сн, -соон — сн©лСС/лчю

СН2В

-сн,-кнсо- & I— - сн = сн

2 7

Пример 2. Способ осуществляют в соответствии с примером 1, но только с тем отличием, что вместо N-бром-9-ундеценовой кислоты применяют 4-хлоркротоновую кислоту, 6Н2 ! Я 2 2 Н ®

Пример 3. Способ осуществляют в соответствии с примером 1., но с тем отличием, что вместо N-бром-9-ундеценовой кислоты применяют 4-гидроксикротоновую кислоту, 4-гидроксикротоновую кислоту в форме третичного бутилового эфира, который получают из 4-бромкротоновой кислоты

45 при помощи трет.бутилата калия.

Сн О Сн,вн,+ Сн,,евСн,- н=

СН2

„= к-ооон сн

36С/ВмАР сн хнсО-OH=oH н,о (Сн,),.

1838329

Формула изобретения

Составитель Г. Русских

Редактор В. Трубченко Техред M.Ìîðråíòàë Корректор Т. Вашкович

Заказ 2901 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комит та по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. ужгород, ул.Гагарина. 101

Пример 4. Синтез активированного или способного к активации полимерного носителя с аллиловыми анкерными группами, N-(4-бромкротоноил)-аминометилполистирол 5

2 г аминометилполистирола (0,8 моля эквив. Nkz) г смолы размешивают в 40 мл абсолютного дихлорметана с 1,02 г (6,2 милимоля) 4-бромкротоновой кислоты, 0,2 r (1,65 миллимоля) 4-диметиламинпиридина и

1,53 г (7,5 ммоля) N,N-дициклогексилкарбодиимида в течение-12 часов при комнатной температуре; Затем полимер отфильтровывают, промывают дихлорметаном, метанолом, диметилформамидом и снова дихлорметаном и сушат под высоким вакуумом при 30 С.

Способ получения твердофазного реагента взаимодействием органического пол5 имера, содержащего радикалы с концевыми аминометильными группами; с органическим соединением, взаимодействующим с указанными группами, отличающийся тем, что, с целью улучшения технологии син10 теза пептидов.с использованием реагента, в качестве органического соединения используют соединение общей формул ы

В - CRz = СВ1- СН2Х, где  — органический радикал с концевой

15 карбоксильной группой;

R> и К вЂ” одинаковые или различные значения и означают водород, алкил;

Х вЂ” гидроксил или галоген.