Способ получения аденозинтрифосфата

Авторы патента:

C12P19/32 - имеющие конденсированную циклическую систему, содержащую шестичленное кольцо, например пуриновые нуклеотиды, никотинамидадениндинуклеотиды

Использование биотехнология Сущность изобретения получение АТФ биофосфорилированием аденозина с помощью клеток Saccharomyces cerevisiae, предварительно высушенных при 25 - 37° С Способ позволяет при сохранении высокого выхода АТФ устранить токсичность производства, улучшить условия труда, использовать в дальнейшем отработавшую биомассу дрожжей, например, в качестве кормовых добавок. 2 табл

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам (21) 4856563/13 (22) 01.08.90 (46) 15.1 0.93 Бюл йд 37-38 (71) Химический факультет MCY имМ.ВЛомоносова (72) Симанова Н.С„Райнина ЕИ.; Раппопорт АИ.

Синицын АП. (73) Райнина Евгения Исаковна (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АДЕНОЗИНТРИФОСФАТА (19) RU (И) 20011О4 Cl (51) 5 C12Р19 32 (57) Использование: биотехнология. Сущность изобретения: получение АТФ биофосфорилированием аденозина с помощью клеток Saccharomyces

cerevisiae, предварительно высушенных при 25вЂ”

37 С. Способ позволяет при сохранении высокого выхода АТФ устранить токсичность производства, улучшить условия труда, использовать в дальнейшем отработавшую биомассу дрожжей, например, в качестве кормовых добавок 2 табл.

2001104

Изобретение относится к биотехнологии. а точнее к способу получения аденоэинтрифосфата (АТФ) с помощью клеток дрожжей рода Saccharomyces. Изобретение наиболее эффективно может быть использовано в фармацевтической промышленности и медицине, где аденозинтрифосфат применяется в качестве лекарственного препарата„.а также для получения реактивов для научнуцФщсследований.

Наиболее близким к заявляемому изобретению является способ получения АТФ из аденозина с помощью пивных дрожжей в реакционной среде, содержа цей глюкозу, неорганический фосфат, сог.ь магния, толуол, Недостатком данного способа является использование в составе реакционной среды в качестве агента, повышающего клеточную проницаемость, толуола. Присутствие высокотоксичного толуола не только ухудшает условия труда при производстве АТФ, но и значительно усложняет выделение конечного продукта, так как известно, что удаление органического растворителя, тем более токсичного. из микробной реакционной смеси представляет собой серьезную проблему. Кроме того, в присутствии толуола возникает проблема обезвреживания и утилизации микробной биомассы, тогда как не содержащую толуола дрожжевую биомассу можно использовать в качестве кормовых добавок.

Целью изобретения является повышение безопасности производства при сохранении высокой эффективности биофосфорилирования, защита окружающей среды.

Цель достигается тем, что в способе получения АТФ биотрансформацией аденозина клетками дрожжей Saccharomyces

cerevis lac в среде, содержащей 0,55-0,85 M неорганического фосфата при рН 7,0-7,5 в присутствии углевода и соли магния, повышение клеточной проницаемости достигается путем предварительного высушивания клеток. Известно влияние высушивания на проницаемость клеточных стенок, обусловленное изменениями в их структуре, Однако воздушно-термическое воздействие на клетки, имеющее место при высушивании, приводит к значительному снижению активности большинства ферментов. В данном случае активность ферментов, осуществляющих биофосфорилирование, не отличается от таковой в нативных клетках, и обеспечивает волную конверсию аденозина в АТФ.

Способ осуществляют следующим образом, выращенную в известных условиях биомассу дрожжей Saccharomyces

cerevlslae сушат в потоке горячего воздуха (конвективным способом) или в термостате при 25-37 С. Использование температуры сушки клеток ниже и выше укаэанного интервала нецелесообразно, так как приводит к значительному снижению выхода целевого продукта. Экспериментально показано, что сушить клетки можно практически любым известным способом (в термостате, конвективно, лиофильно), Оптимальным в данном случае является высушивание клеток дрожжей в потоке горячего воздуха при

37 С в течение 40 мин. Высушенную биомассу переносят в реакционную среду, со15 держащую аденозин, фосфат, глюкозу и соль магния, В результате удается обеспечить полную, 100-ную конверсию аденозина в АТФ, Пример 1, Культивирование

Saccharomyces cerevlslae проводили на среде следующего состава (r/ë дистиллированной воды): глюкоза 2,5; дрожжевой экстракт

2,0; КНрРО4 1,0; NaCI 1,0; MgSO4 Н О 0,5; (ИН4)2504 0,5; рН 6,5, в качалочных колбах объемом 750 мл (объем среды 200 мл) при

30 С и скорости вращения качалки 180 об/мин. Выращенную в течение 20 ч культуру фильтровали на фильтрах "Sinpor d-.0,85 мм и полученную биомассу сушили при 37 С

30 конвективным способом в течение 40 мин.

Сухие клетки переносили в реакционную среду следующего состава: 0,6 М К-фосфатный буфер рН 7,2; аденозин 9,3 мМ; глюкоза

0,55 М; MgS04 7Н20 20 мМ. Биотрансформацию проводили в колбах объемом 100 мл (объем среды 25 мл) при 30 С и скорости вращения качалки 200 об/мин. При этом из

2,5 г/л эденозина было получено 5,14 г/л

АТФ (степень конверсии 98,6/).

40 Пример 2. Условия культивирования дрожжей и проведения биофосфорилирования такие же, как в примере 1 но варьировали температуру и продолжительность конвективного высушивания. Результаты

45 приведены в табл. 1.

Пример 3. Условия культивирования дрожжей и проведения биотрансформации такие же, как в примере 1, но высушивание биомассы проводили в термостате, варьировали температуру и продолжительность высушивания. Результаты приведены в табл, 2.

Таким образом, отличительным признаком изобретения является предварительное высушивание используемой для биофосфорилирования биомассы дрожжей с целью эффективного повышения клеточной проницаемости, В сравнении с прототипом заявляемый способ позволяет получать АТФ иэ аденоэина беэ добавления в среду реакции токсичных соединений, благодаря чему уст2001104 (56) Авторское свидетельство СССР

5 N 722920, кл. С 07 Н 19/20, 1978.

Таблица 1

Таблица 2

Составитель О. Скородумова

Техред M.Moðãåíòàë Корректор О. Кравцова

Редактор

Тираж Подписное

НПО "Поиск" Роспатента

113035. Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Заказ 3112

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 раняется необходимость удаления органического растворителя из реакционной смеси; улучшаются условия труда при производстве АТФ; возникает возможность использовать отработавшую микробную биФормула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АДЕНОЗИНТРИФОСФАТА биофосфорилированием аденозина клетками дрожжей в среде, содержащей неорганический фосфат, в присутствии углеводов и соли магния, отличающийся тем, что, с целью повышения безопасности производства и защиты окружающей среды при соомассу, например, в качестве кормовых добавок. хранении высокой эффективности биофосфорилирования, используют клетки дрожжей Saccharomyces cerevlslae, предварительно высушенные при 25 - 37 С, и процесс проводят при рН 7,0 - 7,5 и содержании неорганического фосфата в среде

0.55 - 0,85 моль.

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается питательной среды для культивирования штаммов Corynebacterium (Brevlbacterium) ammoniagenes - продуцентов уридин-5 -монофосфата (УМФ) и урацила

Штамм соrynевастеriuм аммоniаgеnеs - продуцент инозин-5 @ - монофосфата // 1806200

Штамм соrynевастеriuм аммоniаgеnеs - продуцент инозин-5 @ - монофосфата // 1806199

Способ получения инозина // 1755583

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается способа получения инозина (рибоксина) методом микробиологического синтеза

Способ получения аденозинтрифосфата // 1740420

Изобретение относится к биотехнологии , а точнее к способу получения аденозинтрифосфата

Способ получения аденозин-5-трифосфата // 941384

Способ получения рибоксина // 790781

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам для получения рибоксина (инозина), используемого в медицине при терапевтическом лечении ряда болезней сердца, печени и при нарушениях клеточного метаболизма, таких как лейкопении и др

Способ получения аденозин-5 -трифосфата // 722920

Способ получения пуриновых дезоксинуклеозид-5 - трифосфатов // 660976

Патент 395082 // 395082

Способ получения ксантозин-5'-монофосфата, штамм corynebacterium ammoniagenes - продуцент ксантозин-5'- монофосфата (варианты) // 2209249

Изобретение относится к биотехнологии

Способ получения пуриновых нуклеозидов и нуклеотидов, штамм-продуцент пуриновых нуклеозидов (варианты) // 2239656

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения пуриновых нуклеозидов, таких как инозин и ксантозин, а также способ получения пуриновых нуклеотидов, таких как инозин-5'-фосфат, ксантозин-5'-фосфат и гуанозин-5'-фосфат, в качестве продуцентов используют штаммы бактерий, принадлежащих как к роду Escherichia, так и роду Bacillus, в которых продукция пуриновых нуклеозидов указанными бактериями увеличена за счет увеличения активности белка, кодируемого геном rhtA (ybiF)

Белок ydhl из bacillus amyloliquefaciens, фрагмент днк, бактерия, принадлежащая к роду escherichia или bacillus, - продуцент пуриновых нуклеозидов, способ получения пуриновых нуклеозидов и нуклеотидов // 2294962

Изобретение относится к биотехнологии

Способ продукции пуриновых нуклеозидов и нуклеотидов методом ферментации с использованием бактерий, принадлежащих к роду escherichia или bacillus // 2365622

Изобретение относится к биотехнологии и предоставляет собой способ получения пуриновых нуклеозидов, таких как инозин и гуанозин, а также способ получения 5'-инозиновой кислоты или 5'-гуаниловой кислоты, с использованием бактерий, принадлежащих как к роду Escherichia, так и к роду Bacillus, в котором продукция пуриновых нуклеозидов указанными бактериями увеличена за счет увеличения активности белка, кодируемого геном yeaS (leuE)

Способ получения пуриновых рибонуклеозидов и рибонуклеотидов // 2422510

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к бактерии, принадлежащей к роду Bacillus, обладающей способностью к продукции пуриновых нуклеозидов, способу получения пуринового нуклеозида и способу получения пуринового нуклеотида

Усиливающая вкус натуральная вкусовая основа и способ ее изготовления // 2505095

Группа изобретений относится к пищевой промышленности, а именно к усиливающей вкус натуральной вкусовой основе, способу её получения и применению. Основа содержит органические кислоты, аминокислоты, пептиды, ароматические вещества и от 0,01 мас.% до 80 мас.% соединений, получаемых экстракцией сырья растительного, животного или микробиологического происхождения, ферментацией или биокатализом, выбранных из группы, состоящей из глутамата, инозина монофосфата и гуанозина монофосфата. Способ получения натуральной вкусовой основы предусматривает ферментацию на субстрате с применением микроорганизмов рода Corynebacterium, Brevibacterium, Bacillus и разрушение клеток, приводящее к получению первичного экстракта, включающего клеточный детрит. Применяют основу в различных пищевых продуктах, например бульонах, супах, соусах, напитках. Натуральную вкусовую основу добавляют к пище в количестве от 0,01 до 50 мас.% от общей массы пищи. Вкусовая основа является натуральной, не имеет химического остаточного привкуса, обладает длительным сроком хранения. 4 н. и 24 з.п. ф-лы, 5 пр.

Натуральная пикантная основа для усиления вкуса и способ ее приготовления // 2532274

Изобретение относится к пищевой промышленности, а именно к пикантной основе, способу её получения и применению, а также к кулинарному пищевому продукту, содержащему такую основу. Основа включает органические кислоты и их соли, аминокислоты, пептиды и ароматические соединения и от 8 до 80 мас.% натуральные соединения, взятые из группы, состоящей из глутамата, инозин монофосфата и гуанозин монофосфата. Основу получают путем прокариотической ферментации с бактериями, взятыми из группы, состоящей из Corynebacterium glutamicum, Corynebacterium ammoniagenes, Corynebacterium casei, Corynebacterium efficiens, Brevibacterium lactofermentum и Bacillus subtilis, и указанная основа является неочищенной. Применяют основу в различных пищевых продуктах, например бульонах, обезвоженных супах, соусах, напитках, зерновых, бисквитах. Кулинарный пищевой продукт содержит пикантную основу в количестве от 0,01 до 50 мас.%. Вкусовая основа используется для усиления вкуса, является натуральной, устойчивой при хранении, не обладает дрожжевым послевкусием. 5 н. и 22 з.п. ф-лы, 5 пр.