Способ получения препарата для токсикологических исследований объектов внешней среды

 

Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам (в) КЦ (п) (>) 3 18 (23 .5636982/13

ИФЫИ (48) ЗЙИМВ Бал.% 39-40 фЩ ЗЬ тпащри Дмитрий Олегович . Ииноходов

Видюир Ояагшвт (64) СЙОСЯВ ГИМВт И!МВ ПРЕПАРАТА ЦХИ

Яй©ИЙВОГИЧИЗИХ ИССЯЕДОМЙИЙ

ФВЬИМЯВ ВНВИНЕЙ ЮРЩЫ

@V) Исмтъзаиние: gym токсикологичеаех исследовекййобьааов вщыкей среды Сущность изобретении лрепарат содержит в качестве коьаонента. чувствительного к тохсинам, культуру инфузории

Оуро(Ь steinii сухую, в качестве объекта питания инфузории - споры бактерии Ва0605 505%% Культивирование инфузорий проводят до стадии цисть а питателцтото субстрата 8. SUh_#_is — до стадии спо м. ВЬЮ)йиивжй и социннют до момента использования Препарат длительное время сохраняетсл при комнатной температуре В процессе хранения чувствительность препарата к токсинам не изменлетса 4 таба

2002263

Изобретение относится к токсикологии и биотехнологии и может быть использовано при токсикологических исследованиях объектов внешней среды человека и животных, В современной токсикологии широко практикуются исследования объектов внешней среды с помощью диагностических препаратов, содержащих в качестве активно действующего начала инфузории, чувствительные к токсинам.

Известен препарат, используемый в животноводстве и содержащий в качестве чувствительного к токсинам компонента культуру инфузорий Tetrahlmena pyrlformls и ростовую питательную среду, Однако получение и поддержание препарата в рабочем состоянии требуют постоянного культивирования инфузорий, а это влечет за собой изменение их чувствитель5

20 ности к токсинам, а также дополнительные затраты труда и материалов.

Известен препарат для токсикологических исследований объектов внешней среды на основе культуры Paramecium

caudatum, приготовляемой в периодическом и непрерывном процессах.

Однако препарат и способ его получения обладают теми же недостатками, что и вышеописанный препарат. 0

Целью изобретения является повышение эффективности оксикологических исследований. объектов внешней среды человека и животных, за счет уменьшения затрат труда и материалов при получении диагностического препарата, увеличения срока его сохранения без изменения чувствительности к токсинам и необходимости постоянного культивирования, Это достигается тем, что диагностиче- 40 ский препарат для токсикологических исследований объектов внешней среды содержит в качестве компонента, чувствительного к токсинам, культуру инфузории

Colpoda steinli сухую, в качестве объекта 45 питания инфузории — споры бактерии

Bacillus subtilis. а в известном способе получения препарата для токсикологических исследований, включающем культивирование инфузорий, их доводят до стадии цисты, а питательный субстрат В.subtllis — до стадии споры, высушивают и сохраняют до момента использования.

Способ осуществляют следующим образом.

В стерильную углеводно-солевую дрожжевую среду комнатной температуры вносят культуру С.з е(пй в количестве

500 — 1000 экз./мл и культуру В.subtilis в количестве l,0-10,0 10 микообных тел/мл и культивируют при температуре 20,0 — 22,5 C и постоянной аэрации среды до конечной концентрации клеток С,stelnil не менее чем

10000 экз./мл.

Готовую культуру разливают по 0,5-2,0 мл в стеклянные флаконы и инкубируют при температуре 20,0-22,5 С до полного инцистирования инфузорий. Затем среду из фла конов удаляют, культуру инфузорий высушивают при той же температуре, флаконы герметично закрывают.

Таким образом, готовый препарат содержит 5-20 тыс.экземпляров С.stelnll u

В,зуЬМПз в остаточных количествах, достаточных для размножения бактерий после внесения питательной среды. Препарат готов к употреблению и сохраняет свои свойства в течение года хранения при температуре 15,0-25,0 С в сухом. защищенном от света месте.

С целью экспериментальной проверки заявляемый объект изобретения исследовали при различных значениях технологических параметров внешней среды, Результаты исследований приведены в табл. 1-4.

Из данных табл, 1 следует, что инокуляционная доза культур С,stein!i/В,subtllls ниже 1,0 . 10 /5,0 10 экз./мл давала кон3 -, б центрацию клеток инфузорий ниже требуемой для диагнастикума. Дозы ММ 3 — 5 давали концентрацию инфузорий, достаточнуа для приготовления диагностикума,—

10 — 11 10 экз./мл,однакоприиспользова3 нии дозы М 5 образовалось избыточное количество питательного субстрата, что отрицательно сказывалось на времени инцистирования С.stenii.

Таким образом„данные табл. 1 свидетельству;от о том, что оптимальные инокуляционные дозы С.stelnil/В.sybtilis лежат в и редел ах 1 0-1,5 10 /5 0 — 10 0 . 10 экз./мл.

Из данных табл. 2 следует, что температура культивирования ниже 20Я С и выше

25,0 С давала концентрацию С,stelnii ниже необходимой для диагностикума, а оптимальные температурные пределы лежали между 20,0 С и 25,0 С.

Результаты исследований зависимости времени инцистирования С.stelnii от температуры окружающей среды, приведенные в табл. 3, показали, что оптимальные пределы находятся между 20.0 С и 22,5ОС; При более низких и более высоких температурах инцистирование шло свыше 30 ч, При отработке условий хранения готового препарата (табл, 4) выяснилось; что при температуре 20,0-22,5 С выживаемость

2002263

С.stetnil после 3 месяцев хранения достигала 957, концентрация после инцистиравания при этом была в пределах 8,5 — 9,5 10 экз./мл.

При температуре вне этих пределов выживаемость и концентрация в питательном растворе после инцистирования инфузорий была ниже. в процессе хранения в высушенном виде на стадии цисты не изменяет чувствительности к токсинам, тогда как с видами-аналогами это происходит;

5 предлагаемый способ получения препарата несложен в исполнении и требует в отличие от аналогов однократных затрат труда и материалов. (56) Спесивцева Н.А. Микоэы и микотокси10 козы животных. М. . Сельхозгиз. 1960, с. 402, 409.

АгеевВ.,Долторнияэов И. Определение токсичности корма. Птицеводство, 1988, М

8, с. 42.

15 Кокова В.E. Непрерывное культивирование простейших. Протозоология. вып,12.

Л;: Наука, 1989, с. 132, 114. 116- 120, Приведенные результаты лабораторных исследований препарата и способа его получения показывают следующие его преимущества перед аналогами: препарат длительное время сохраняется при комнатной температуре, при этом не требуется затрат труда и материалов на его поддержание;

Таблица 1 ение ко ционной ьтурэ С s

0.2 1

0,5 . 1

1.0 10

1.5 10

5,5 10

Зависимость накопления биомассы инфузории С.stelnii от инокуляционной дозы инфузории и В.subtilis

2002263

Таблица 2

Накопление биомассы инфузории С,вте!и(! при различных температурах культивирования при инокуляционной дозе С.stelnll / В.subtills, равной 1.0 10з/6.0 10" зкз,/мл с

Таблица 3

Время инцистирования инфузории С.stelnH при различных значениях температуры окружающей среды рования С.$(Р

84

30 бб

Таблица 4

Влияние температуры окружающей среды на выживаемость цист С.stein!i в высушеном состоянии (начальная концентрация 10000 экз./мл)

92

2002263

Продолжение табл.4

Формула изобретения

Составитель Д. Виноходов

Техред М.Моргентал Корректор H. Король

Редактор Л. Павлова

Тираж Подписное

НПО "Поиск" Роспатента

113035. Москва, Ж-35, Раушская наб.. 4/5

Заказ 3172

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород. ул. Гагарина. 101

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА

ДЛЯ ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ ОБЪЕКТОВ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ, включающий культивирование инфузорий в питательной среде, отличающийся тем, что культивируют инфузории Cotpoda

steinii в исходной концентрации 1000

1506 экз/мл при 20 - 22.5 С в углеводно-со- . левой дрожжевой среде. дополнительно содержащей Bacillus subtllis в концентрации 5,0 - 10,0 10 микробных тел/мл, до

6 конечной концентрации не менее 10000 экз/мл, затем разливают во флаконы в объеме 0.5 - 2,0 мл, инкубируют до полного инцистирования инфузорий. удаляют сре5 ду, высушивают, герметично укупоривают препарат и хранят его в темном сухом месте.