Способ хранения проб желчи для микроскопических исследований

 

Использование: в медицине, в частности в гастроэнтерологии. Сущность изобретения: в нативную пробу желчи последовательно вводят 1%-ный раствор метиленовой сини в соотношении 1 :4 - 2 :8 с последующим добавлением через 10 - 20 мин безводного глицерина в соотношении 1 4-2:8, после чего полученную смесь содержат при 4-8 °С. Способ позволяет проводить микроскопическое исследование желчи в течение 5-7 сут после дуоденального зондирования 3 табл

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН

К ПАТЕНТУ

ЬЭ

С>

ЬЭ

4:ь

Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам

1 (21) 4948751/14 (22) 25.06.91 (46) 15.11.93 Бюл. Na 41-42 (71) Московская медицинская академия им.И.M.Сеченова (72) Галкин ВА; Асельдеров П.Ш. (73) Галкин Всеволод Александрович (54) СПОСОБ ХРАНЕНИЯ ПРОБ ЖЕЛЧИ ДЛЯ

МИКРОСКОПИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ (57) Использование: в медицине, в частности в (В) RU (11) 2002469 Cl (51) 5 А б1 N 1 28 гастроэнтерологиа Сущность изобретения: в нативную пробу желчи последовательно вводят

1%-ный раствор метиленовой сини в соотношении

1: 4 — 2: 8 с последующим добавлением через 10 — 20 мин безводного глицерина в соотношении 1:

4 — 2: 8, после чего полученную смесь содержа. при 4-8 С. Способ позволяет проводить микроскопическое исследование желчи в течение 5 — 7 сут после дуоденального зондирования. 3 табл

2002469

Изобретение относится к гастроэнтерологии, а именно к лабораторным (микроскопическим) методам исследования дуоденального содержимого.

Микроскопическое исследование желчи представляет определенные трудности в связи с тем, что процедура дуоденального зондирования весьма продолжительна по времени и клеточные элементы, простейшие, присутствующие в патологической желчи In vitro под действием ферментов, желчных кислот быстро разрушаются. Поэтому непременным условием микроскопического анализа дуоденального содержимого служит незамедлительное его исследование по мере получения каждой очередной порции., Известен метод Зрлиха е модификации

Ромейса суправитального окрашивания метиленовым синим или изучения периферических нервных окончаний, Мелкие кусочки или тонкие срезы помещают при 37 в 0,10,25% раствор метиленового синего на 1 — 2 ч. с последующей фиксацией в течение 3060 мин свежеприготовленным раствором молибденовокислого аммония, затем промывают водой в течение 1 — 6 ч, обезвоживают 95 и 100% этиловым спиртами до 2 ч.

Просветляют в 2 сменах терпинеола, промывают ксилолом и заключают в бальзам.

Известен также способ приготовления препаратов периферической нервной ткани по Догелю, при котором окрашенные срезы метиленовым синим фиксируют в течение

24 ч насыщенным раствором пикрата аммония с последующим заключением в смесь равных объемов глицерина и раствора пикрата аммония.

Известен способ приготовления препаратов периферической нервной ткани по

Шабадашу (1;2). Окрашенные срезы метиленовым синим фиксируют в течение 3 — б ч при

35 смесью пикрата аммония с раствором йодита аммония (или с раствором тиоцината аммония), выдерживают при определенных условиях в течение нескольких дней с последующим заключением в смесь равных объемов химически чистого глицерина, насыщенного раствора пикрата аммония и

10% раствора желатина.

Однако известные способы не используются для хранения проб желчи с целью последующего микроскопического исследования и не позволяют сохранить пробы желчи из-за разрушения форменных элементов, простейших, Известен способ хранения проб желчи для микроскопического исследования, при котором с целью сохранения клеточных элементов добавляют 5 — 8 капель формалина на

1:4 — 2:8 с последующим добавлением через

10 — 20 мин безводного глицерина в соотношении 1:4 — 2:8 и далее содержат при 4 — 8 С.

Обработанные таким образом пробы желчи в течение 5 — 7 сут можно использовать для микроскопического исследования.

Пример 1. Больная f1, 43 года. Клинический диагноз: обострение хронического холецистита, При дуоденальном зондировании забор желчи производили из пузырной фракции в три пробирки по 4 мл в каждую с каждые 10 мл полученной при зондировании желчи.

Известен способ хранения желчи для микроскопического исследования, который заключается в следующем. Добавляют 1 мл трасилола или тцалола на каждые 10 мл желчи.

Известен также способ хранения проб желчи для микроскопического исследования, который заключается в том, что с целью сохранения форменных элементов желчи добавляют ЗДТА (2мл 10% раствора на 1020 мл желчи).

Недостатком всех этих способов является то, что длительность хранения проб желчи не превышает 1 — 1,5 ч, а затем присутствующие в желчи клеточные элементы, простейшие, разрушаются.

Известен способ хранения проб желчи

20 с целью последующего микроскопического анализа, состоящий в том, что желчь обрабатывают 10%-ным раствором нейтрального формалина, добавляемого в соотношении

1:3.

Недостатком данного способа является то, что при его использовании удается сохранить патологические элементы желчи (клеточные элементы, простейшие) только в течение 2 ч, что требует проведения микроскопического .исследования дуоденального содер>кимого в данном отрезке времени.

Данный способ принят за прототип— базовый объект;

Цель изобретения — удлинить сроки хра35 нения проб желчи для микроскопического исследования.

Цель достигается тем, что в исследуемую пробу нативной желчи последовательно вводят при перемешивании 1%-ный раствор метиленовой сини в соотношении (1;4 — 2:8) с последующим добавлением через 10-20 мин безводного глицерина в соотношении 1:4 — 1:8 и далее содержат при

4 — 8 С, Отличие предложенного способа от прототипа заключается в том, что в исследуемую пробу нативной желчи последовательно вводят при перемешивании 1%-ный раствор метиленовой сини в соотношении

2002469

40 таблица !

Результаты микроскопического исследования пробы пузырной желчи больной П.

Количество клеточных злементов в поле зрения че еза емя,ч

Проба желчи

144 168

120

72

24 сразу

3 з после получения

25-30 ! 5-20

20-25 20-25

3.5 3-5

25.30

20-25

25-30

20-25

25-ЗО

20-25

20-25

20-25 го-зо

20-25

25-30

20-25

5-6

5-6

5-6

5-6

25-30

25-30

Лейкоциты

Лейкоцитоиды

Широкий апителий

Узкий цилиндрический апителий

Мелкий зпителий

Эритроциты

Лямблии

4-6

4-6

5-6

4-6

2-3

1-2

4-6

3-5 3-5

2-3 (1-5

О О

О О

3-5

4-5 о

5-10

5-6

4-5

О

5-10

3-5

З-5 о

10-15

3-5

3-5 о

10-15

3-5 г-з о

3-5

З-5

5-10 ! 0-15

2-З

1-2

3-5

2.3

1-2

1-2

3-5

1-2

3-5

3-5

5-10

10-15

10-15

П р и м е ч а н и е. - номера проб желчи (1-натианая; 2-обработанная по прототипу; 3-желчь, консервированная по предлагаемому способу) наибольшим количеством хлопьев. В первой пробирке желчь не обрабатывали. Во второй пробирке желчь обрабатывали по прототипу с добавлением 10% нейтрального формалина в соотношении 1;3. B третьей пробирке желчь обрабатывали по предлагаемому способу, а именно к содержимому пробирки при перемешивании добавляли

1%-ный водный раствор метиленовой сини в соотношении 1:4, Для перемешивания пробирку вращали вокруг вертикальной оси, избегая вэбалтывания с целью предотвращения образования пузырьков воздуха, затрудняющих микроскопический анализ.

Все три пробирки хранили в холодильнике при 4 С, Микроскопическое исследование проводили сразу после забора, после обработки по прототипу и предлагаемому способу, через 2 ч и через каждые 24 ч. Результаты исследования представлены в табл.1.

Как видно из табл.1 в нативной желчи (первая пробирка) и пробе желчи, обработанной по прототипу (вторая пробирка) клеточные элементы, простейшие количественно уменьшались к концу 2 ч, исчезали к концу 1 суток. Проба желчи, обработанная по предлагаемому образцу(третья пробирка), содержала клеточные элементы, простейшие в течение 7 сут. Исследование помогло диагностировать лямблиоз и назначить адекватную терапию.

Пример 2, Больная К. 36 лет, Клинический диагноз: обострение хронического холецистита. Забор и обработка пузырной желчи, полученной при дуоденальном зондировании, проводилась также как описано в примере 1. Результаты исследования представлены в табл.2. Как видно из таблицы, сохранение лейкоцитов в третьей пробирке, обработанной по предлагаемому способу, в течение 7 сут дало воэможность. подтвердить наличие воспалительного про5

35 цесса в желчном пузыре. и кроме гого, сделать процедуру микроскопического исследования независимой от времени проведения дуоденального зондирования, Пробы желчи в 1- и 2-й пробирках дают низкую диагностическую информативность на содержание лейкоцитов.

П 0 и м е р 3. Больная T., 54 года, Клинический диагноз: обострение хронического холецистита. Забор и обработку проб пузырной желчи, полученной при дуоденальном зондировании проводили как описано в примере 1. Результаты представлены в табл.3. Как видно из табл.3, в натиьной желчи (1 пробирка) и в желчи, обработа,!ной по прототипу(2 пробирка), сохранность клеточных элементов была низкой, Диагностическая ценность пробы желчи, обработанной по предлагаемому способу, не изменилась о течение 5 — 7 сут.

Микроскопические исследования проб желчи, обработанной по заявленному способу, проведены у 31 больного и у 10 здоровых людей, У всех больных перед зондированием был поставлен диагноз: обострение хронического холецистита, По результатам микроскопического анализа у

17 пациентов подтвержден диагноз воспаления желчного пузыря (на основании наличия лейкоцитов в пуэь|рной порции желчи), у 6 пациентов поставлен диагноз лямблиоза (по наличию лямблий в пробе желчи), что дало воэможность своевременно назначить адекватную терапию, Таким образом, предлагаемый способ хранения проб желчи для микроскопического исследования позволяет повысить диагностическую ценность микроскопического анализа, проведенного более чем через 2« после дуоденального зондирования. (56) Скуя Н.А. Хронические заболевания желчных путей, М.; Медицина. 1972, с.122.

2002469

Таблица 2

Результаты микроскопического исследования пробы пузырной желчи больной К по предлагаемому способу) Таблица 3

Результаты микроскопического исследования пробы пузырной желчи больной Т, количество клеточных элементов в пале зрения че ез,ч

Проба желчи

120

144

72 сразу

2 после получения

15-20

10-15

15-20

15-25

15-20

15-20

15-20

15-20 l0-15

10-15

15-20

15-20

20 25

10-15

О

О.

5-6

5-6

10-15

20-25

3-4

5-6

15-20

15-30

6-8

3-4

2-3

6-8

3-4

3-4

-7

5-6

3-4

6-8

5-6

2-3

3-4

6-8

3-4

1-2

6-8

4-5

1-2

0

О

О

5-7

34

3-4

5-7

3-4

3-4

6-8

4-5

2-3

3-4

6-8

5-6

-3

3-4

6-8

5-6

2-3

10-15

ll р и м а ч а н и e. + - номера проб желчи (1-нативнвя желчь; 2-желчь, обработанная по прототипу: З-желчь, консервированная по предлагаемому нами способу) 30

Формула изобретения

СПОСОБ ХРАНЕНИЯ ПРОБ ЖЕЛЧИ!

ДЛЯ МИКРОСКОПИЧЕСКИХ ИССЛЕДО-. . ВАНИЙ. включающий обработку ее натив- 35 ного раствора консервантом, отличающийся тем, что, с целью удлинения сроков

Составитель Н.Зенитов

Техред М.Моргентал Корректор С,Патрушева

Редактор А.Зробок

Заказ 3200

Тираж Подписное

НПО "Поиск" Роспатента

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Лейкоциты

Лейкоцитоиды

Широкий эпители*

Узкий эпигелий

Мелкий зпителий

Э ит иты хранения, в нативную желчь последовательно вводят 1%-ный раствор метилено-, вой.сини в соотношении 1: 4 - 2: 8 и:, безводный глицерин в соотношении 1: 42: 8 с последующим содержанием полученной смеси при 4- 8 С.