Гидрохлориды 2-стирил-бензимидазола, обладающие церебропротекторной, антиаллергической, антиоксидантной и желчегонной активностью

 

Использование: в качестве соединений, обладающих церебропротекторной, антиаллергической. антиоксидантной и желчегонной активностью. Сущность изобретения: продукт общей формулы I. где R NtCHJI- HCI R1-R2-OCH3 R-OCH3 R и R вместе -ОСИ О обладающие церебропротекторной , антиаллёргической, антиоксидантной и желчегонной активностью. 4 табл. Формула I име.ет вид HCI

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ вид

CH=CK° HCI

R г

Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам (21) 5027687/04 (22) 14.0292 (46)-15.1293 Бюл. Na 45-46 (75) Симонян АВ„ Сараф АС„Пышный В.О„Кульбеков ЕФ. (73) Пятигорский фармацевтический институт (54) ГИДРОХЛОРИДЫ 2-СТИРИЛ-БЕНЗИМИДАЗОЛА, ОБЛАДАЮЩИЕ ЦЕРЕБРОПРОТЕКТОРНОЙ, АНТИАЛЛЕРГИЧЕСКОЙ, АНТИОКСИДАНТНОЙ И ЖЕЛЧЕГОННОЙ АКТИВНОСТЬЮ (57) Использование: в качестве соединений, обладающих церебропротекторной. антиаллергической. (19) RU (1Ц 2004541 С1 (51) 5 C07D235 06 А61К31 415 антиоксидантной и желчегонной активностью.

Сущность изобретения: продукт общей формулы I, где R -N(CH ) ° HCI R -R -ОСН R -ОСН зг г 3 1 з

R u R вместе -uCH О обладающие церебропро1 г „г текторной, антиалпергической, антиоксидантной и желчегонной активностью. 4 табл. Формула имеет

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к новым биологически активным веществам, на основе которых могут быть созданы препараты, обладающие церебропротекторной, антиаллергической, антиоксидантной и желчегонной активностью.

Заявляемые соединения являются новыми производными 2-стирилбензилидазола общей формулы I где R1 — й(СНз)г HCI (соединение !а)

R1-ОСНз (соединение !б)

Я1=йг=ОСНз (соединение Is)

R1 и R2 вместе — ОСНгΠ— (соединение !г) везде неукаэанные R=H.

Приводимые в заявке производные 2стирилбензимидаэола, их свойства и биологическая активность в литературе не описаны.

Ближайшим аналогом по структуре к за° являемым соединениям является официальный препарат дибаэол, представляющий собой 2-бенэилбензимидазола гидрохлорид

G> / 5© нс обладающий сосудорасширяющим, спазмолитическим и гипотенэивным действием, Кроме того дибазол понижает тонус и вызывает расслабление сосудов мозга, однако этот эффект непродолжителен (2, 3).

Целью йзобретения является получение новых производных 2-стирилбензимидазола, обладающих более выраженным по сравнению с прототипом фармакологической активности, а именно антиаллергической, антиоксидантной и желчегон ной.

Поставленная цель достигается синтезом соединений формулы !, которые получены сплавлением соответствующих производных коричной кислоты с 1,2-фенилендиамином.

Пример 1. 2-(4-Диметиламинстирил)бензимидаэола гидрохлорид (соединение !а), 1,91 г (0.01 M) 4-диметиламинокоричной кислоты и 1,08 г (0,01 М) 1,2-фенилендиамина нагревают при 190-200 С при перемешивании в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждают до 110 С и приливают 3 мл воды и 4 мл 27,5ф> соляной кислоты. Смесь нагре5

45 веют до 9ООС и перемешивают до полного растворения плава. После охлаждения выделившийся осадок отделяют и перекристаллизовывают иэ водного этанола. Выход

2,2 г(65, ), Т,пл, 230 С.

Найдено, : С 60,89; Н 5,71; Cl 21,23, N 12,68.

С17Н 19С!2!чз.

Вычислено, 7ь: С 60,71; Н 5,65; CI 21,13;

N 12,50.

Данные спектров: УФ вЂ” 420, 260, 205 нм.

ИК 3400-2400, 1600, 1300, 1270, 1170, 980 см

Пример 2, 2 (4-Метиоксистирил)бензимидаэола гидрохлорид (соединение !6), 1,78 г (0,01 M) 4-метоксикоричной кислоты и

1,08 г (0,01 M) 1,2-фенилендиамина нагревают при 190-200 C при перемешивании в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждают до

110 С и приливают мл воды и 2 мл 27,5 g соляной кислоты, Смесь нагревают до 90 С и перемешивают до полного растворения плава. После охлаждения выделившийся осадок отделяют и перекристаллиэовывают иэ воды. Выход 1,72 г(60;ь). 7,пл, 224-225 С.

Найдено, 7: С 67,20; Н 5,37:, Ci 12,53;

К 9,92.

С16Н15 !МЛ, Вычислено, $: С 67,02; Н 5,24; С! 12,39;

К 9,. 7.

Данные спектров: УФ вЂ” 350, 205 нм;.

ИК вЂ” 3400-2400, 1640, 1600, 1560, 1510, 1300, 1255. 1170, 020, 975 см, Пример 3. 2-(3,4-диметоксистирил)бенэимидазола гидрохлорид (соединение !в).

2Я8 г (0,01 M) 3,4-диметоксикоричной кислоты и 1,08 r (0,01 М) 1,2-фенилендиамина нагревают при 190-2000С и рч r!epe eLU вании в течение 3 ч, охлаждают до 1!О С и приливают 3 мл воды и 2 M/l 27,5,/о соляной кислоты. Смесь нагревают до 90 С и перемешивают до полного растворения плаза.

После охлаждения выделившийся осадок отделяют и перекристаллизовывают иэ BOды, Выход 2,12 г (67;4). T.ïë. 246-247 С.

Найдено,ф,: С 65.31; Н 5,50; С! 11,37; и 9,02.

С17Н17С! Й2О2.

Вычислено, 7: С 64,46: Н 5,37: С! 11,22;

N 8,85, Данные спектров: УФ вЂ” 360, 205 нм.

ИК вЂ” 3400-2400, 1650, 1610, 1590, 1570, 1515, 1350, 1265, 1140, 1020, 970 см 1.

Пример 4, 2-(3,4-Метилендиоксистирил)-бензимидазола гидрохлорид (соединение Ir), 1,92 r (0,01 М) 3.4-метилендиоксикоричной кислоты и 1,08 r (0,01 М) (0,01 M) 1,2-фенилендиамина нагревают при 190-200 С

2004541 при перемешивании в течение 3 ч, охлаждают до 110 С и приливают 3 мл воды и 2 мл

27,5 (соляной кислоты. Смесь нагревают и перемешивают до полного раствореня плава при 90 С, После охлаждения выделившийся осадок отделяют и перекристаллиэовывают иэ воды. Выход 2,07 г (69%).

Т.пл. 215-216 С.

Найдено, : С 63.71: Н 4,19; CI 11,67:

N 9,49.

С16Н13С!Й202.

Вычислено, : С 63,89; Н 4,33; CI 11,81;

N 9,32. . Данные спектров: УФ вЂ” 350, 205 нм.

ИК вЂ” 3400-2400, 1625, 1570, 1480, 1295, 1240, 1025, 970 см

Исследования церебропротекторной активности соединения !а и !в проводили на модели циркуляторной гипоксии головного мозга по тесту выживаемости животных (крысы белые беспородные) при одномоментной окклюзии обеих сонных артерий (5). Исследуемые соединения вводили животным внутрибрюшинно за 60 минут до окклюзии в дозе 5 мг/кг. Результаты исследований приведены в табл. 1.

Полученные данные свидетельствуют о повышении устойчивости животных к гипоксии головного мозга под действием соединений la и !в, которые по активности превышают действие как структурного аналога — дибазола, так и аналога по действию— официнального препарата кавинтона. применяемого при нарушениях мозгового кровообращенияя.

Исследование антиаллергического действия веществ проводили на модели реакции пассивной кожной анафилаксии (РПКА), опосредованной антителами класса Ig Е (2), которая является одним иэ наиболее часто используемых методов для оценки антиаллергической активности соединений, Сыворотку, содержащую специфические гомоцитотропные антитела, получали на третьей неделе после сенсибилизации мышей линии СВА овальбумином (0,5 мкг) с гидроксидом алюминия (2.5 мг/мышь). Полученную сыворотку в разведении 1:200 вводили внутрикожно в 6 выстриженных участков кожи спины белых крыс-самцов линии Wistar (160-180 г) в количестве 50 мкл.

Через 24 ч крысам внутривенно вводили разрешающую дозу овальбумина (1 мг/кг) в

1 мл 0.5 -ного раствора красителя синего

Эванса на физиологическом растворе. Спустя 30 мин крыс под эфирным наркозом декапитировали, кожу выворачивали, прокрашенные участки вырезали и зкстрагировали краситель формамидом при 37 С в течение 4 сут. Количество красителя в экс5

20 в соответствующем разведении. Определе50 ние МДА проводили фотокалориметрически . после обработки реакционной смеси 40

45 траваэате определяли спектрофотометрически при 600 нм по калибровочному графику.

Исследуемые вещества вводили в дозе

10 мг/кг за 90 мин до разрешающей дозы антигена. В качестве объекта сравнения использовали антиаллергический препарат кромогликат натрия (интал), являющийся аналогом по действию.

Кромогликат натрия вводили в дозе

50 мг/кг(в 5 раз большей, чем исследуемые вещества, т.к. в дозе 10 мг/кг выраженного антиалле! гического действия он не проявлял) внутрибрюшинно за 90 мин до введения антигена. Контрольным крысам внутрибрюшинно вводили физиологический раствор. Процент ингибирования реакции вычисляли по формуле

A= OOВ где А — процент ингибирования РПКА;

С вЂ” мкг синего Эванса в участках кожи крыс, получивших препарат;

 — мкг синего Эванса в участках кожи контрольных крыс.

Результаты опытов статически обработаны и приведены в табл,2, Исследование антиоксидантной активности проводили на модели ингибирования накопления молонового диальдегида in

vitro.

В склянки из темного стекла помещали реакционную смесь 2 мл 1%-ного р-ра

ТВИН-80, 0.2 мл 1 мМ р-ра сернокислого железа II. 0,2 мл 10 мМ р-ра аскорбиновой кислоты и 0,2 мл раствора испытуемого вещества в концентрациях от 10 M/ë до 10 М/л.

Склянки помещали в термостат для инкубирования при температуре 40 С в течение 48 ч. Затем определяли концентрацию малонового диальдегида (МДА) в контрольной. опытной и эталонной сериях. В качестве эталона испольэовали официнальный препарат дибунол. По отсутствию МДА или низких его .концентрациях в разных сериях эксперимента судили о наличии антиоксидантной активности испытуемого вещества раствором Трихлоруксусной кислоты (1 мл), фильтрации, добавлении 0,25 р-ра (2 мл) Тиобарбитуровой кислоты к 2 мл фильтрата и нагревания в течение 15 мин на водяной бане с температурой 100 С. Антиоксидантную активность изучаемого вещества выражали в концентрации М/л, снижавшей оптическую плотность раствора с накопившимся МДА на 50 в сравнении с контро2004541 лем (без вещества), Результаты эксперимента приведены в табл, 3.

Результаты исследований показывают, что соединение la обладает выраженной антиоксидантной активностью, превышающей активность известного антиоксиданта дибунола.

Исследование желчегонной активности соединения 1в выполняли в остром опыте на

27 белых, беспородных крысах-самцах массой 180-200 г. В процессе операции у животных формировали искусственный желчный резервуар из участка двенадцатиперстной кишки в месте впадения в нее общего желчного протока. Резервуар дренировали пластиковой канюлей 8 течение 3 ч, При этом фиксировали количество желчи, отделяемой в течение каждого часа. В желчи спектðoôoтометрическим методом определяли концентрацию желчных кислот. Параллельно исследовали влияние на желчеотделение соединения Ia, официнального препарата циквалона — аналога по действию и растворителя — 1,5 р-ра крахмального клейстера (контроль). Доза соединения Ia: 20 мг/кг массы животного вносилась на 2 мл 1,5% крахмального клейстера; доза циквалона

20 мг/кг массы животного на 2 мл 1,5 крахмального клейстера; в контрольной группе использовали по 2 мл 1,5% крахмального клейстера, Все три группы крыс получали вещества в желудок за 30 мин до начала операции. Результаты исследований и риведен ы в табл.4.

Полученные результаты свидетельствуют о выраженной желчегонной активности, при этом наблюдается увеличение содержания желчных кислот по сравнению с официнальным желчегонным препаратом циквалоном.

Определение острой токсичности и расчеты L0go осуществляли по методу Кербера.

Белым мышам массой 18-20 г внутрибрюшинно вводили по 0,5 мл суспензии исследуемого вещества, На каждую дозу в опыте брали по 6 мышей. Установлено, что LDso исследуемых веществ составляет 450 мг/кг (соединение la), 475 мг/кг (соединение I6).

450 мг/кг (соединение! в), и 500 мг/кг (соединение Ir), что свидетельствует о том, что заявляемые соединения относятся к классу практически нетоксичных веществ.

Таким образом, результаты проведенных исследований показывают, что заявляемые соединения — производные

2-стирилбензимидазола обладают выраженным церебропротекторным, антиаллергическим, антиоксидантным и желчегонным действием, превышающим активность аналогов по действию лекарственных препара5 тов дибаэола, кавинтола, кромолина натрия, дибунала, циквалона и относятся к практически нетоксичным соединениям.

Все это свидетельствует о целесообраз10 ности проведения дальнейших исследований с целью создания на основе заявляемых соединений эффективных лекарственных препаратов.

15 (56) Машковский М.Д. Лекарственные средства, часть I, И. M.: Медицина, 1986.

Гаевый М.Д. Фармакол и токсикол., 1971, т.34, М 1, с. 42-45.

Макинский T.À. — Журн. Невропатол. и

20 психиатр., 1972, М 8, с. 1164-1166.

Рубцов М.В., Байчиков А.Г. Синтетические химико-фармацевтические препараты.

M.: Медицина, 1971, с, 170.

Гаевый M.Ä, и др. — Фиэиол, журн.

25 СССР, 1985, т. 71, М 6, с, 1173-1175.

Гущин М.С., Богуш Н.А., Алешкин В.А., Пучкова Н.Г. Иммунология, М.: l986, с. 6163.

Стрелков P.Â. Экспресс-метод стати30 стической обработки экспериментальных. и клинических данных. M.: 1986.

Першин Г,Н, Методы экспериментальной химикотерапии.М„1971, с. 526-531.

Сидоров К.К. О классификации токсич35 ности ядов при парентеральных способах введения. В кн.: Технология новых промышленных химических веществ. — Вып. 13. М,:

Медицина, 1973, с. 47-51.

Nadal H„Takizawa Т., Nakatoml I.//Jap.

40 S. Pharmacol. — 1983 — vol. 33, р. 349-355.

Hirol 1., Ohara К., Kobanashl К. et

aI.//Jap. J, Pharmacol. — 1988, vol. 46, р. 337-338, Vaz E.M., Vaz N.Ì., Levine

45 В,B,//Immunology. — I971, vol. 12, р. 11, Likke А.M., Cummings R,//Brit. J. Exp.

Path. — 1969, vol. 50, р, 309.

Благодаров С.Г., Шепелев А П., Дмитровская И.А. и др. — Хим. фарм. журн. 1987.

50 М3, с. 292-294.

Литвенчук M.Ä.. Новосилец 3.И. — Бюл. эксперим. биологии и медицины, 1980, М 6, с. 750-752.

Мирошниченко В.П., Громашевская

55 Л.Jl., Касаткина M.Г, и др. Лаб.дело, 1978.

М 3, с. 149.

2004541

Таблица 1

Влияние соединений на устойчивость животных к гипоксии головного мозга

Таблица 2

Влияние заявляемого соединения на проявление РПКА у крыс, опосредованной IgE-антителами

*Р<0,002.

Таблица 3

Концентрация вещества, снижающая оптическую плотность изучаемого раствора с МДА на

БОО по сравнению с контролем

Таблица 4

Формула изобретения

Гидрсхлориды 2-сти рил-бенэимидаэола, общей формулы! где R1- И(СНэ)2 ° НС! (1а);

R1 =.R2 - ОСНЗ (1в);

R) = ОСНэ(16);

R1 и R2 вместе -ОСН20 (1г),,обладающие церебропротекторной, антиаллергической,антиоксидантной и желче гонной активностью.

Q . с - Q ° к

R !

Влияние изучаемых соединений на суммарное выделение желчных кислот крысами на f00 г веса