Способ определения показаний к сквозной кератопластике

 

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии. Целью изобретения является повышение точности способа. Для этого по соотношению величин активности данных ферментов альфа-глицерофосфатдегидрогеназы и сукцинатдедегидрогеназы в лимфоцитах репициента судят показана ли сквозная кератопластика данному реципиенту.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для определения показаний к сквозной кератопластике.

Для определения показаний к сквозной кератопластике определяют активность ферментов альфа-глицерофосфатдегидрогеназы и сукцинатдегидрогеназы в лимфоцитах крови реципиента и при соотношении средних величин активности данных ферментов в пределах 0,45-0,6 и средней величине активности сукцинат-дегидрогеназы 20-23 операция показана.

В результате эмпирических исследований были установлены параметры для осуществления способа, при которых не происходило помутнение трансплантата, т. е. операция показана.

Динамика иммунной реакции требует предшествующего изменения метаболизма участвующих клеток. Общеизвестно, что лимфоциты - ведущие клетки трансплантационного иммунитета. Следовательно после выявления ранних сдвигов ферментного статуса лимфоцитов представляется возможным прогнозировать степень выраженности иммунной реакции.

Сукцинатдегидрогеназа - митохондриальный фермент, катализирующий в цикле Кребса превращение янтарной кислоты в фумеровую. По скорости окисления и образования богатых энергией соединений сукцинат опережает НАД - зависимые субстраты и выигрывает в конкуренции с ними за терминальные этапы дыхательной цепи.

СДГ принадлежит значительная роль в накоплении энергии, а ее уровень отражает функциональное состояние митохондрий лимфоцитов.

Помимо СДГ, большое значение в выработке энергии имеет и альфа-глицерофосфатдегидрогеназа. Изолированный в митохондрии цикл Кребса протекает нормально, если в интактную для крупных молекул митохондрию проникают электроны из гиалоплазмы, где они освобождаются в результате различных химических превращений.

Переносчиком электронов является альфа-ГФДГ, катализирующая восстановление фосфодиоксиацетона в альфаглицерофосфат (гиалоплазматическая альфа - ГФДГ) и его последующее окисление в митохондрии (митохондриальная альфа-ГФДГ). Данный глицерофосфатный шунт координирует процессы дыхания и гликолиза, а также отражает состояние клеточных мембран.

Исследуемую группу составили 30 реципиентов с болезнью трансплантата и помутнением трансплантата в сроки от 20 до 180 дн после сквозной субтотальной кератопластики.

Во всех 30 случаях было выявлено снижение средней активности сукцинатдегидрогеназы лимфоцитов ниже 20.

Коэффициент соотношения средней активности альфа-глицерофосфатдегидрогеназы и средней активности сукцинатдегидрогеназы в 8 случаях был ниже 0,45 (0,2-0,4) и в 22 случаях выше 0,6 (0,7-1,18).

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Свежеприготовленные два мазка из капли крови фиксируют 30 с в 60% -ном ацетон-трилоне, промывают в дистиллированной воде 1-2 мин и погружают один в инкубационную среду N 1, другой - в инкубационную среду N 2 на 1 ч при 37^oC в водяную баню.

Инкубационная среда N 1 Янтарно-кислый натрий 540 мг н-Нитротетразолий фиолетовый 13 мг Трилон Б 13 мг Фосфатный буфер 1/15 М 40 мл.

Инкубационная среда N 2 ДЛ- α -глицерофосфат натрия 630 мг н-Нитротетразолий фиолетовый 13 мг Трилон Б 13 мг Фосфатный буфер 1/15 М 40 мл.

Обе среды имеют рН 7,2-7,4, хранятся на холоде 2 недели.

После инкубации мазки снова промывают и докрашивают 10 с 0,5% -ным раствором януса зеленого или другим ядерным красителем. Под микроскопом (увеличение 10 х 40) с водной иммерсией считают в 50 лимфоцитах результат для двух ферментов. Сумму гранул (продукт реакции фиолетового цвета) делят на количество клеток и получают среднюю активность сукцинатдегидрогеназы и α -глицерофосфатдегидрогеназы в одном лимфоците. Затем вычисляют отношение средней активности α -глицерофосфатдегидрогеназы к средней активности сукцинатдегидрогеназы.

При соотношении средних величин активности данных ферментов в пределах 0,45-0,6 и средней величине активности сукцинатдегидрогеназы от 20 до 23 операция показана.

П р и м е р 1. Реципиент Д. , 43 г. Диагноз: эпителиально-эндотелиальная дистрофия, послеоперационная афакия. В первой половине дня берут каплю крови из пальца для двух мазков. После постановки двух реакций и подсчета результатов средняя активность сукцинатдегидрогеназы составила 21,6, альфа-глицерофосфатдегидрогеназы 10,9.

Затем вычисляют отношение средней активности α -глицерофосфатдегидрогеназы к средней активности сукцинатдегидрогеназы. Коэффициент отношения этих ферментов равен 0,5. Операция - сквозная кератопластика показана.

Операция произведена по общепринятой методике. Трансплантат сохраняет прозрачность в течение одного года.

П р и м е р 2. Реципиент К. , 55 лет. Диагноз: травматический рубец роговицы левого глаза.

В первой половине дня берут каплю крови из пальца для двух мазков. После постановки двух реакций и подсчета результатов средняя активность сукцинатдегидрогеназы составила 20, альфа-глицерофосфатдегидрогеназы 9. Отношение величин средней активности 0,45. Операция показана. Произведена по общеизвестной методике операция сквозной кератопластики. Трансплантат сохраняет прозрачность в течение 1,5 лет.

П р и м е р 3. Реципиент П. , 33 лет, диагноз: кератоконус.

В первой половине дня берут каплю крови из пальца для двух мазков. После постановки двух реакций и подсчета результатов средняя активность сукцинатдегидрогеназы составила 23, альфа-глицерофосфатдегидрогеназы 13,8. Отношение величин средней активности 0,6. Операция показана. Произведена сквозная субтотальная кератопластика на правом глазу, через год такая же операция произведена на левом глазу. Трансплантаты прозрачны при сроке наблюдения для правого глаза 2 года и для левого глаза 1 год.

Было обследовано 50 больных, готовящихся к сквозной кератопластике с заболеваниями роговицы различной этиологии.

Из них у 10 - отношение средних величин активности альфа-глицерофосфатдегидрогеназы и сукцинатдегидрогеназы составило менее 0,45 или более 0,6, а средняя величина активности была ниже 20. В послеоперационном периоде у этих реципиентов наблюдалось помутнение трансплантата.

А у 40 больных при отношении средних величин активности данных ферментов, лежащих в интервале от 0,45 до 0,6 и при средней величине активности сукцинатдегидрогеназы в интервале от 20 до 23, помутнение трансплантата при сроке наблюдения от трех месяцев до двух лет не наблюдалось.

Таким образом предложен оптимальный подбор параметров для определения показаний к сквозной кератопластике при заболеваниях роговицы различной этиологии с целью улучшения результатов хирургического лечения. (56) Mackensen. Advances in Ophthalmology 1972. - Surgery of the iris and cillar body. Symposium of the ophtolmic microsurgery study group.

Формула изобретения

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОКАЗАНИЙ К СКВОЗНОЙ КЕРАТОПЛАСТИКЕ путем клинико-анамнестического обследования, отличающийся тем, что, с целью индивидуализации способа, в лимфоцитах крови больного определяют активность альфа-глицерофосфатдегидрогеназы и сукцинетдегидрогеназы и при отношении активности первого к второму 0,45 - 0,6 операцию считают показанной.