Штамм вируса гриппа а (нзn2) для получения живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и детей

 

Использование: медицинская вирусология. Сущность изобретения: вакцинный штамм А/З/17/89 - рекомбинант, полученный скрещиванием эпидемического вируса А/Закарпатье/354/89 (НЗ N 2) с холодоадаптированным температурочувствительным штаммом А/Ленинград/134/57/17 (Н 2 N 2) - донором аттенуации, безвредным для взрослых людей и детей. Штамм А/3/17/89 активно репродуцируется в развивающихся куриных эмбрионах при оптимальной температуре (32°С), разность в показателях инфекционной активности при 32 и 40°С - 6,75 lg ЭИД 50/0,2 мл. Рекомбинат унаследовал от актуального эпидемического вируса 2 гена, кодирующих поверхностные белки (геммаглютинин и нейраминидазу), и 6 генов, кодирующих внутренние белки от донора аттенуации. По данным рекомбинационно-комплементационного анализа в геноме штамма А/3/17/89 имеется 3 ts-мутации, характерные для донора аттенуации А/Ленинград/134/57/17 (Н 2 N 2). Штамм А/3/17/89 ареактогенен для взрослых и детей 3 - 15 лет при интраназальном введении и вызывает четырехкратный прирост антител в крови у 60,0% взрослых и у 73,0% детей, привитых однократно. Штамм включен в ГКВ. Депонент N 2275.

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано для профилактики эпидемического гриппа.

Известный штамм А/Л/134/37/88/17 (положительное решение по заявке N 4758677 от 14.05.90), использовавшийся для получения живой гриппозной вакцины для взрослых людей и детей, существенно отличается по антигенным свойствам от современных эпидемических вирусов гриппа A(H3N2), рекомендованных в состав гриппозных вакцин ВОЗ.

Целью изобретения является получение вакционного штамма актуальной разновидности на основе эпидемически значимого вируса, а именно А(Закарпатье)354/89 (H3N2).

Вакционный штамм А(З)17/89 (H3N2) получен в результате рекомбинации эпидемического вируса А(Закарпатье)354/89 (H3N2) с холодоадаптированным температурочувствительным штаммом А(Ленинград)134/57/17 (H2N2) с последующей селекцией в присутствии антисыворотки А(Ленинград)134/57/17. Штамм А(З)17/89 (H3N2) унаследовал от донора аттенуации гены 1, 2, 3, 5, 7 и 8, кодирующие белки PB₂,PB₁,NP, M и NS соответственно, и 2 гена от эпидемического вируса, кодирующих поверхностные белки (гемагглютинин и нейраминидазу). Температурочувствительный холодоадаптированный рекомбинант А(З)17/89 (H3N2) унаследовал 3 ts-мутации в генах 1, 5 и 7 от донора аттенуации, которые обеспечивают высокую степень безвредности и стабильности рекомбинанта. Таким образом, указанный рекомбинантный вакцинный штамм характеризуется сочетанием полученных признаков родительских вирусов, необходимых вакцинному штамму, антигенной специфичностью поверхностных белков актуального эпидемического вируса А(Закарпатье)354/89 (H3N2) и температурочувствительностью, характерной для штамма А(Ленинград)134/57/17 (H2N2).

Морфология штамма А(З)17/89 (H3N2) полиморфная, типичная для вируса гриппа.

Штамм А(З)17/89 (H3N2) накапливается в куриных эмбрионах до 7,5-8,0 lg ЭИД 50/0,2 мл в течение 48 ч при 32^оС, агглютинирует эритроциты кур в разведении 1:512. Проявляет стабильность биологических признаков после пятикратного пассивирования в развивающихся куриных эмбрионах. Обладает ареактогенностью и выраженной иммуногенностью при однократном интраназальном введении взрослым и детям 3-15 лет.

П р и м е р 1. Группе из 5 серонегативных лиц (с исходным титром антител в сыворотке 0-1: 16) ввели интраназально двукратно с интервалом 28 дней в объеме 0,5 мл вакцинный штамм А(З)17/89 (H3N2) с инфекционным титром 7,25 lg ЭИД 50/0,2 мл. Среди привитых не было зарегистрировано ни одной температурной реакции. При обследовании в РТГА парных сывороток этих лиц четырехкратный прирост антител был зарегистрирован у 4 из 5 двукратно вакцинированных.

По данным неврологического, биохимического, иммунологического исследования функции внешнего дыхания кандидат в вакцинные штаммы А(З)17/89 (H3N2) оказался безвредным для людей.

П р и м е р 2. Группе из 103 серонегативных лиц ввели интраназально однократно в том же объеме вакцинный штамм А(З)17/89 (Н3N2), Среди привитых была зарегистрирована температурная реакция средней тяжести (повышение температуры до 38,4^оС, что составило менее 1%). Слабые температурные реакции (до 37,5^оС) были незначительны (1,7 в опыте и 8,6 в контроле) и более выраженными в группе людей, получивших плацебо. Показатель реактогенности (0,9) ниже предельно допустимого (2%).

При исследовании парных сывороток 87 человек с исходным уровнем <1:8 отмечен четырехкратный прирост антител у 52 человек, что составило 60,0% П р и м е р 3. Серонегативные дети 3-15 лет (20 человек) были иммунизированы однократно штаммом А(З)17/89 (H3N2), 10 детей получили плацебо. В течение 5 дней не было отмечено температурных реакций (показатель реактогенности 0).

П р и м е р 4. Группа из 117 детей 3-15 лет получила однократно интраназально вакцинный штамм А(З)17/89 (H3N2), а 69 детей получили плацебо. При наблюдении после иммунизации не выявлено температурных реакций средней и сильной степени (показатель реактогенности 0). В РТГА четырехкратный и более прирост антител из 78 привитых однократно детей с исходным титром <1:8 выделен у 57 человек (73,0%).

Таким образом, результаты изучения кандидата в вакцинные штаммы А(З)17/89 (H3N2) на взрослых и детях показали, что штамм соответствует требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам МРТУ-42 N 373-70 на живую гриппозную вакцину для интраназального применения взрослым и детям.

Штамм депонирован в коллекцию ГКВ, депонент N 2275.

Решением Комиссии по гриппозным вакцинным штаммам МЗ СССР от 20 февраля 1990 г. штамм А(З)17/89 (H3N2) рекомендован для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых. Решением Комиссии от 12 сентября 1990 г. штамм рекомендован как вакцинный штамм для детей.

Формула изобретения

Штамм вируса гриппа А(Н3N2) ГКВ N 2265 для получения живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и детей.