Штамм микромицета trichoderma lignorum для производства препарата против фитопатогенных грибов

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для производства биопрепарата против фитопатогенных грибов и представляет новый штамм гриба для получения указанного препарата. Штамм микромицета Irihoderma lignorum ТБД-93 получен из штамма Irihoderma lignorum ТБ-10 путем селекции с последующим отбором однородных по культурально-морфологическим признакам колоний с учетом их продуктивности и эффективности, определяемой по отношению к фузариозу. Штамм депонирован в Центральной коллекции микроорганизмов государственного концерна "Биопрепарат" под N ЦКМ F-55 Ц. Полученный из штамма препарат может выпускаться в сухом виде, для этого в концентрат вводят наполнители, гранулируют и высушивают. 8 табл.

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для производства биопрепарата против фитопатогенных грибов и представляет новый штамм гриба для получения указанного препарата.

Известны штаммы грибов Trihoderma lignorum против фитопатогенных грибов.

Основным недостатком известных штаммов является недостаточно высокая продуктивность и эффективность.

Целью изобретения является устранение указанных недостатков.

Штамм микромицита Trihoderma lignorum ТБД-93 получен из штамма Trihoderma lignorum ТБ-10 путем селекции с последующим отбором однородных по культурально-морфологическим признакам колоний с учетом их продуктивности и эффективности, определяемой по отношению к фузариозу (Fusarium heterosporum (Г-4) Fusarium solani (Г-130), Fusarium monili forme (Г-131), Fusarium culmorum (Г-133).

Штамм депонирован в Центральной коллекции микроорганизмов государственного концерна "Биопрепарат" поз N ЦКМ F-55Ц.

Культурально-морфологические признаки штамма.

Культурально-морфологические признаки штамма Trihoderma lignorum ТБД-93 и известного ТБ-10 исследованы на различных плотных питательных средах в динамике роста и представлены в табл. 1.

Изучены морфологические признаки штамма ТБД-93 на различных жидких питательных средах в колбах вместимостью 750 мл, содержащих 100 мл питательной среды, на круговой качалке (N 220 об/мин) при Т 26-28^оС в течение 96 ч.

Данные световой микроскопии культуральной жидкости представлены в табл. 2.

Результаты сравнения, представленные в табл. 1, указывают на значительные изменения в морфологии гриба в различных средах в сторону "улучшения" и сужения диапазона гетерогенности колоний. Более однородные показатели получены на гидролизно-глицериновой среде.

В таблице 3 представлены результаты оценки продуктивности штамма ТБД-93 при глубинном культивировании.

Как видно из табл. 3 максимальный выход спор штамма наблюдается на гидролизно-глицериновой среде и среде на основе автолизата дрожжей и глицерина при значительном преимуществе в продуктивности (по показателю сухого веса биомассы).

Сухой вес определяли путем фильтрации через бумажный фильтр определенного объема культуральной жидкости с последующим высушиванием фильтра в сушильном шкафу до постоянной массы. Следует отметить, что на указанных средах продуктивность известного штамма ТБ-10 составляет 11-18 г/л (в среднем 14 г/л), а предложенного штамма 16-26 г/л (в среднем 21 г/л).

Проведена сравнительная оценка продуктивности известного (ТБ-10) и предложенного штаммов на гидролизно-глицериновой среде. Результаты представлены в табл. 4.

Полученные данные указывают, что предложенный штамм по продуктивности превышает известный на 20% Отношение к источникам углерода.

Оценка утилизации углеродов и глицерина произведена на полужидкой агаризованной среде, содержащей 0,8% агар-агара, в пробирках, путем внесения культуры штамма уколом иглой. Учет результатов проведен по изменению окраски среды и присутствию пузырьков газа. Данные представлены в табл. 5.

Отношение к источникам азота: утилизирует соли аммония, дрожжи и их гидролизаты, мясной бульон, рыбо-костную муку.

Оценка терморезистентности штамма ТБД-93.

Сравнительную оценку устойчивости штаммов к факторам внешней среды провели по двум показателям: устойчивости к нагреванию (80^оС) терморезистентности, и к высушиванию ксероустойчивости. Результаты представлены в табл. 6, из которых следует, что штамм ТБД-93 значительно превосходит известный ТБ-10 по устойчивости к температурному воздействию и высушиванию (обезвоживанию), что является существенным моментом при изготовлении, а главное применении препарата.

Таким образом, предлагаемый штамм ТБД-93 отличается от известного ТБ-10. Отличительные признаки представлены в табл. 7.

Как видно из таблицы биологическая активность штамма ТБД-93 превышает даже при низких концентрациях его суспензии (4-5 разведение).

Изучена биологическая активность штаммов ТБД-93 и ТБ-10 на фузариях и представлена в табл. 8.

Условия хранения штамма.

Штамм хранится в пробирке под резиновой пробкой, залитой парафином, на плотной агаризованной среде (2,5% агар-агара) в виде конидиальных спор при температуре (0-4^оС).

Пример получения препарата. В жидкую питательную среду, содержащую 0,3% глицерина, 3% зеленой патоки и 8% гидролизата БВК, соли магния, калия и аммония (0,2% ) вносят посевную мицелиальную культуру в дозе 7% и культивируют при 25^оС при аэрировании (объем:объем) и постоянном перемешивании в ферментерах объемом 50 л. После 4 сут роста культуры концентрируют в 10 раз, в концентрат вносят стабилизатор суспензии и получают препарат в жидком виде. Титр хламидоспор в препарате не менее 1 млрд. мл.

Препарат может выпускаться в сухом виде, для этого в концентрат вводят наполнитель, гранулируют и высушивают.

Формула изобретения

Штамм микромицета Trichoderma lignorum ЦКМК "Б" N ЦКМ F-55Ц для производства препарата против фитопатогенных грибов.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5