Производные 1,3,4-тиодиазол-2-карбоновых кислот

 

Использование: в качестве гипотензивных средств для лечения гипертонии. Сущность изобретения: продукт S-трет-бутил-3-[N-(1-(S)- этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L- аланил]-2,3-дигидро-1,2,3,-тиадиазол-2-(S)-карбоновая кислота, т. пл 165 8°С [α]²_D^2,5 252,8 (в 2%-ном эталоне) БФ C₂₂H₃₁N₃O₅S 5-трет-бутил-3-[Nʺ (1-(S)-карбокси-3-фенилпропил-L- лизил]-2,3 дигидро-1,3,4-тиадозол-2-(S)- карбоновая кислота. т. пл. 180 190°С, БФ C₂₃H₃₄N₄O₅S. 2 з. п. ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к новой группе соединений, имеющих полезные свойства, например, в качестве ингибиторов АСЕ.

Согласно изобретению предусматриваются соединения формулы I: ZchrCOH₂)_n (I) где Y-S, или NR9; n-0 или 1; R₉-водород, алкил С_1-10; R₃-водород, алкил С_1-10, циклоалкил С_3-10, CF₃, SR₁₀, 5- или 6-членная гетероциклическая группа, содержащая 1 или более атомов, S, 0 или N, NR₄R₅, фенил или фенилалкил С_7-12, причем фенильная, фенилалкильная и гетероциклическая группы необязательно сконденсированы с другой фенильной группой, гетероциклическая группа, и любая фенильная группа, необязательно замещены алкилом С_1-6, галогеном, алкокси С_1-6, нитро, нитрилом, СF₃, SR₆, NR₇R₁₁ или гидрокси; R₆, R₇ и R₁₁, которые могут быть одинаковыми или различными, каждый означает водород, алкил С_1-10 или фенил; R₄ и R₅, которые могут быть одинаковыми или различными, каждый означает водород, алкил С_1-10 или фенил; R₁₀-алкил С_1-10; R-водород, алкил С_1-10 или алкил С_1-6 замещенный группой NH₂; Z-R₂CH(COOH)NH- или R₁SCH₂-;
R₁-водород или R₈CO-;
R₂-алкил С_1-10 или фенилалкил С_7-12;
R₈-алкил С_1-10 или фенил; и их фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры и амиды.

Соединения могут быть получены по предлагаемому способу, включающему:
а) удаление защитной группы из соединения формулы I, у которого одна или более из групп амино, тиола или карбоновой кислоты;
в) реакцию соединения формулы II:
NH₂)_n (II)
или его соли, сложного эфира, амида, таутомера или защищенного производного, где R₃, Y и n указаны, с соединением формулы III:
ZchrCOX (III) где Z и R указаны, а Х означает свободно удаляемую группу;
с) превращение соединения формулы I, в котором асимметрический атом углерода у Y содержащего гетероциклического кольца находится в R конфигураций, в соответствующее соединение, в котором упомянутый атом углерода находится в S конфигурации;
d) реакцию соединения формулы II, в котором R₃, Y и n определены, как указано выше, с соединением формулы VI:
ZchrCOOH (VI) где Z и R указаны, или
е) получение фармацевтически приемлемой соли соединения формулы I посредством обработки соединения формулы I или его другой соли, сложного эфира или амида соединением, содержащим фармацевтически приемлемый ион и способным превращать соединение формулы I или его соль, сложный эфир или амид в фармацевтически приемлемую соль соединения формулы I; и если желательно или необходимо, снятие защиты у полученного соединения, или превращение соединения формулы I в фармацевтически приемлемую соль, сложный эфир или амид или наоборот.

По способу а) защитная группа может быть любой подходящей защитной группой, обычно используемой в синтезах пептидов. Такая группа может быть удалена путем использования технических приемов, обычных для применения в синтезах пептидов. Примерами служат: прямоцепная или разветвленная алкокси С_1-6 группа, такая как трет-бутокси; или фенилалкокси С_7-12, например бензилокси. Такие группы можно удалять гидролизом, например основным гидролизом или отщеплением с использованием, например, трифторуксусной кислоты; или гидрированием, например с применением палладия на активированном угле. Амино-защищающие группы включают алкилоксикарбонил С_2-7, например трет-бутилоксикарбонил, или фенилалкилоаксикарбонил С_8-13, например бензилоксикарбонил. Предпочтительно использовать исходные материалы, у которых карбокси группы являются защищенными.

По способу в) группа Х может быть галоидом, например бром или хлор. Реакцию можно проводить в растворителе, инертном в условиях реакции, например в ацетонитриле, при температуре от 0 до 100^оС, предпочтительно при температуре около 30^оС. Реакцию предпочтительно проводить в основных условиях, например при наличии триэтиламина или поливинилпиридина.

Реакцию по способу с) возможно проводить в растворителе, инертном в условиях реакции, например в ацетонитриле, при температуре от 0^оС до точки кипения растворителя, предпочтительно от 20 до 30^оС. Реакцию можно осуществлять в безводных условиях, напpимеp в присутствии молекулярных сит и в присутствии основания, например пирролидина.

При реакции по способу d) можно использовать любые общепринятые способы синтеза пептида. Реакция может включать образование, необязательно ин ситу, активированного производного кислоты, например, ангидрида или дициклогексилкарбодиимида. Реакцию можно проводить в растворителе, инертном в условиях реакции, например в дихлорметане или этилацетате, при температуре от минус 10^оС до точки кипения растворителя, предпочтительно от 0 до 30^оС. Реакция может проводиться в присутствии основания, например триэтиламина. Если реакция включает дициклогексилкарбодиимид, то реакцию можно проводить в присутствии активирующего агента, например гидроксибензотриазола. Реакция конечно варьирует в зависимости от применяемого конкретного активированного производного.

По способу е) соли могут образовываться при реакции свободной кислоты или ее соли, сложного эфира, амида или его производного, или свободного основания, или его соли, или производного с 1 или более эквивалентами соответствующего основания или кислоты. Реакцию можно проводить в растворителе или в среде, в которой соль не растворима, или в растворителе, в котором соль растворима, например в этаноле, тетрагидрофуране или диэтиловом эфире, которые могут быть удалены в вакууме или посредством сушки вымораживанием. Реакция может также быть обменным процессом или же реакцию можно проводить на ионообменной смоле.

Приемлемые соли соединений формулы I включают обычные известные соли.

Исходные материалы для указанных способов являются или уже известными, или их можно получать из известных соединений, используя обычные способы. В частности, соединения формулы II, у которых __→ n=0, можно получить реакцией соединения формулы IV:
R₃C(=Y)NHNH₂ (IV)
или его соли, где R₃ и Y имеют указанные значения, с глиоксиловой кислотой или ее солью, сложным эфиром, амидом или защищенным производным, например, в алканоле, таком как этанол, при комнатной температуре.

Соединения формулы II могут существовать в таутомерной форме формулы VII:
(VII)
или в виде ее соли сложного эфира, амида или защищенного производного, где R₃ и Y указаны.

Соединения формулы II, где n= 1, можно получить реакцией соединения формулы IV или его соли с соединением формулы V:
С₂=С(Х)СООН (V)
или его солью, сложным эфиром, амидом или защищенным производным, где Х указан например, в растворителе, инертном в условиях реакции, таком как бензол, при температуре от 0 до 100^оС и в присутствии основания, например 1,5-диазабицикло [4,3,0] ___→ нон-3-ена.

Соединения формулы III можно получить из соответствующей кислоты или ее производного с применением известных способов.

Соединения формулы I и их производные могут быть выделены из реакционных смесей путем применения обычных технических приемов, которые сами по себе известны.

Предусматриваются также соединения формулы II и их соли, сложные эфиры, амиды и защищенные производные, которые полезны в качестве промежуточных продуктов. Приемлемые сложные эфиры включают С_1-6алкиловые эфиры и эфиры с бензиловым спиртом. Амидами могут служить, например, незамещенные или же моно- или ди-С_1-6 алкил-амиды, которые можно получить обычными техническими приемами. Предпочтительны те соединения формулы I, в которых Z означает R₂CH(COOH)NH-. Когда Z означает R₂CH(COOH)NH-, предпочтительно, чтобы частичная структура -NHchrCO- в формуле I была частью аминокислоты, встречающейся в природных условиях. Группа СООН в заместителе Z предпочитается в форме алкил С_1-6 сложного эфира, например сложного этилового эфира, или амида. Когда любые из R, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉, R₁₀ или R₁₁представляют алкил, они могут быть каждый отдельно прямоцепным, разветвленным или циклоалкилом, например содержащим до 6 атомов углерода включительно. Предпочтительно, чтобы R являлся алкилом С_1-6 или аминоалкилом С_1-6, например метилом или -СН₂СН₂СН₂СН₂NH₂. Предпочтительно, чтобы R₂ представлял н-пропил или фенилэтил. Предпочтительно, чтобы R₈ и R₁₀ являлись метилом. Если R₃ означает алкил, то он может быть прямоцепным, разветвленным или моно-, ди- или три-циклоалкилом, например, содержащим до 10 атомов углерода включительно. Когда R₃ означает 5-членную гетероциклическую группу, предпочтительно, чтобы присутствовал лишь I гетероатом. Если R₃означает 6-членную гетероциклическую группу, предпочтительно наличие 1 и 2 гетероатомов, предпочтительно выбранных из N и 0. Предпочтительно, чтобы R₃ являлся С_1-10 алкилом или С_3-10 циклоалкилом, более предпочтительно С_1-6 алкилом и С_3-6 циклоалкилом. Особенно предпочтительно, чтобы R₃ был трет-бутилом или циклогексилом. Y является предпочтительно 0, или более предпочтительно S. Предпочтительно, чтобы n равнялось 0. Предпочтительно, чтобы заместитель -СООН у гетероциклического кольца, содержащего Y, не был превращен в производное. R₁ является предпочтительно водородом. Особенно предпочтительна конкретная группа соединений формулы I, в которой Z-R₂CH(COOH)NH-, Y=S, R=метил или аминобутил, n=0, R₂= н-пропил или фенилэтил и R₃=трет-бутил, и их соли, сложные эфиры и амиды. Предпочтительными солями соединений формулы I являются малеаты, гидрохлориды, соли аммония или дициклогексиламмониевые соли.

Соединения формулы I могут содержать I или более симметричных атомов углерода и, следовательно, могут проявлять оптический и/или диастерео изомеризм. Диастерео- и оптические изомеры могут быть разделены с помощью обычных технических приемов, по существу известных. Предпочтительны такие соединения формулы I, у которых любые асимметрические атомы углерода находятся в S конфигурации. Соединения по изобретению благоприятны в виду того, что они более эффективны, дают меньше побочных эффектов обладают более продолжительным действием, легче абсорбируются, менее токсичны, распределяются в тканях организма различным образом или имеют другие преимущественные свойства по сравнению соединениями сходной структуры. Соединения по изобретению полезны вследствие ингибирования ими ангиотензинпревращающего энзима. Таким образом, соединения по изобретению полезны в качестве гипотензивных средств для лечения пациентов, страдающих гипертонией.

Изобретение поясняется, однако не ограничивается в какой-либо степени, примерами, у которых значения температуры выражены в градусах 100-градусной шкалы.

П р и м е р 1. 5-трет-Бутил-3-[N-(1-(S)-этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-аланил]-2,3-дигидро -1,3карбоновая кислота.

а) Бензил 5-трет-бутил-2,3-дигидро-1,3,4-тиадиазол-2-карбоксилат.

Раствор гидразида трет-бутилкарботиокислоты (0,7 г) и бензил глиоксилата (1 г) в этаноле (15 мл) перемешивают в атмосфере азота 16 ч. Растворитель удаляют выпариванием и остаток очищают с помощью мгновенной хроматографии (петролейный эфир этилацетат в качестве растворителя для элюирования), что дает указанный в заголовке продукт (1,1 г) в виде смолы.

в) Бензил 5-трет-бутил-3-[N-(1-(S)-этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-аланил]-2,3-дигидро -1,3карбоксилат.

Перемешиваемую смесь N-(1-(S)-этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-аланина (0,57 г) и 1-гидроксибензотриазола (0,28 г) в дихлорметане (40 мл) обрабатывают раствором продукта со стадии а) (1,14 г) в дихлорметане (5 мл). Добавляют дициклогексилкарбодиимид (0,42 г), и смесь перемешивают при комнатной температуре 16 ч в атмосфере азота. Суспензированное твердое вещество удаляют фильтрованием, и фильтрат выпаривают до остатка в виде смолы. Остаток очищают мгновенной хроматографией, что дает указанное в заготовке соединение (0,8 г) в виде масла. Масс-спектр (FAB) показал МА⁺540 (основной пик 91) С₂₉Н₃₇N₃O₅ требует мол.м. 539.

с) Бензил-5-трет бутил-3-[N-(1-(S)-этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-аланил]-2,3-дигидро-1,3,4- тиад
Раствор продукта со стадии в) (1,0 г) и пирролидина (1 г) в сухом ацетонитриле (30 мл) обрабатывают измельченными молекулярными ситами 3, и смесь перемешивают при комнатной температуре 6 ч. Летучие материалы удаляют выпариванием и отделяют изомер S, S, S, от более полярного изомера S, S, R посредством мгновенной хроматографии (петролейный эфир этилацетат как растворитель для элюирования). Указанный в заголовке продукт (0,4 г) изолирован в виде прозрачной смолы.

Масс-спектр показал МА⁺539 (основной пик 234).

С₂₉Н₃₇N₃O₅S требует мол.м. 539.

d) 5-трет-Бутил-3-[N-(1-(S)-этоксикарабонил-3-фенилпропил)-L-аланил]-2,3-дигидр о- 1,3,4-тиадиазол-2-(S)-карбоновая кислота.

Раствор продукта со стадии с) (0,67 г) в этаноле (100 мл) обрабатывают 10%-ным палладием на угле (0,6 г), и смесь перемешивают с водородом при давлении 98,0 кПа (1 ат) 16 ч. Катализатор удаляют фильтрованием, и фильтрат уменьшают по объему до 2 мл упариванием. Охлажденный раствор дает указанный в заголовке продукт (0,3 г) в виде белых кристаллов, т.пл. 165-8^о. [α]_D ^22.5 -252,8 (в 2% этаноле).

С₂₂Н₃₁N₃O₅S.

Вычислено, С 58,80; Н 6,90; N 9,35; S 7,13.

Найдено, С 58,87; Н 6,89; N 9,34; S 7,21.

Масс спектр (FAB) показал М⁺450 (основной пик 234).

С₂₂Н₃₁N₃O₅S требует мол.м. 449.

П р и м е р 2. 5-трет-Бутил-3-[N²-(1-(S)-карбокси-3-фенилпропил)-L-лизил]-2,3-ди-гидро-1,3, 4-тикислота.

а) Бензил 2-гидрокси-4-фенилбутаноат.

Раствор 2-окси-4-фенилмасляная кислоты (20,4 г), триэтиламина (15,9 мл) и бромистого бензила (12,75 мл) в этилацетате (64 мл) нагревают с обратным холодильником 16 ч. Раствор охлаждают и выливают в смесь воды с эфиром. Отделившийся органический экстракт промывают насыщенным раствором бикарбоната натрия и водой, высушивают над сульфатом магния и фильтруют. Фильтрат выпаривают, и остаток очищают мгновенной хроматографией (петролейный эфир этилацетата как растворитель для элюирования), что дает продукт, указанный в заголовке, в виде желтого масла (14 г).

Масс спектр показал М⁺270 (основной пик 91).

С₁₇Н₁₈О₃ требует мол.м. 270.

в) N⁶-бензилоксикарбонил-N²-(1-(S)-бензилоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-лизил гидрохлорид.

Раствор продукта после ступени а) (13,8 г) и пиридина (6,6 мл) в дихлорметане (136 мл) добавляют в течение 0,5 ч в атмосфере азота к перемешиваемому раствору трифторметансульфоангидриду (12,9 мл) в дихлорметане (136 мл), охлажденного до 5^оС. После дополнительного 0,5 ч раствор промывают водой, высушивают над сульфатом магния, фильтруют, и фильтрат выпаривают. Остаток берут в дихлорметан (136 мл) и добавляют к раствору N⁶-бензилоксикарбонил-L-лизил-трет-бутилового эфира (15,5 г) и триэтиламина (6,5 мл) в дихлорметане (136 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре 1 ч, нагревают с обратным холодильником 2,5 ч, охлаждают, промывают водой, высушивают над сульфатом магния и фильтруют. Фильтрат выпаривают и остаток очищают мгновенной хроматографией (эфир-петролейный эфир как растворитель для элюирования) для отделения и изолирования более полярного SS изомера.

Раствор SS-трет-бутилового эфира (0,5 г) в эфире (15 мл) охлаждают до 5^оС и насыщают хлористым водородом в течение 2 ч. Раствор перемешивают при комнатной температуре дополнительно 18 ч, и растворитель удаляют выпариванием. Растирание остатка в эфире дает продукт, указанный в подзаголовке, в виде белого твердого вещества (0,39 г).

Масс-спектр, полученный бомбардировкой быстрыми атомами, показал М⁺533 (основной пик 91).

С₃₁Н₃₆N₂O₆ требует мол.м. 532.

с) Бензил 3-[N⁶-бензилоксикарбонил-N²-(1-(S)-бензилоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-лизил -5-трет-бутил-2,3-дигидро-1,3,4-тиадиазол-2-(R)-карбоксилат.

Перемешиваемый раствор продукта SS со стадии в) (5,68 г) и 1-гидроксибензотриазола (1,35 г) в дихлорметане (85 мл) обрабатывают раствором продукта по примеру 1, стадия а) (5,87 г) в дихлорметане (60 мл). Раствор дициклогексилкарбодиимида (2,1 г) в дихлорметане (85 мл) добавляют в течение 5 мин и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч в атмосфере азота. Добавляют триэтиламин (1,4 мл), и суспендированное твердое вещество удаляют фильтрованием. Фильтрат выпаривают, и остаток очищают мгновенной хроматографией, что дает продукт, указанный в заголовке, в виде масла (2,1 г).

Масс-спектр, полученный бомбардировкой быстрыми атомами, показал М⁺793 (основной пик 91).

С₄₅Н₅₂N₄O₇S требует мол.м. 792.

d) Бензил-3-[N⁶-бензилоксикарбонил-N²-(1-(S)-бензилоксикарбонил-3-фенилпро- пил)- L-лизил]-5-трет-бутил-2,3-дигидрo-1,3,4-тиадиазол-2-(S)-карбоксилат.

Раствор продукта стадии с) (2,1 г) и пирролидина (1,6 мм) в сухом ацетонитриле (60 мл) обрабатывают измельченными молекулярными ситами 3А, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч в атмосфере азота. Летучие продукты удаляют выпариванием и отделяют SSS изомер от более полярного SSR изомера посредством испарительной хроматографии. Указанный в подзаголовке продукт SSS (0,47 г) изолируют в виде прозрачного масла.

Масс-спектр, полученный бомбардированием быстрыми атомами, показал М⁺793 (основной пик 91).

С₄₅Н₅₂N₄O₇S требуют мол.м. 792.

е) 5-трет-Бутил-3-[N²-(1-(S)-карбокси-3-фенилпропил)-L-лизил]-2,3-дигидро-1,3,4 -тиакислота.

Раствор продукта со стадии d) (1,1 г) в этаноле (90 мл) обрабатывают 10% -ным палладием на угле (0,9 г), и смесь перемешивают с водородом под давлением 98,0 кПа (1 ат) 1 ч. Кристаллизатор удаляют фильтрованием и фильтрат выпаривают. Остаток перекристаллизовывают из смеси тетрагидрофурана с этанолом, что дает продукт, указанный в заголовке, в виде твердого белого вещества (0,24 г), т.пл. медленно разлагается при 180-190^оС.

С₂₃Н₃₄N₄O₅S ˙ 0,77 Н₂О
Вычислено, С 56,11; Н 7,23; N 11,39; S 6,51; Н₂О 2,82.

Найдено, С 55,86; Н 6,97; N 11.24; S 6,56; H₂O 2,83.

Масс-спектр, полученный бомбардировкой быстрыми атомами, показал М⁺479 (основной пик 84).

С₂₃Н₃₄N₄O₅S требует мол.м. 478.

П р и м е р 3. 5-трет-Бутил-3-[N-(1-(S)-этоксикарбонилбутил)-L-аланил] -2,3-дигидро-1,3,4- -тиадиазол-2-(S)-карбоновая кислота.

а) Этил 2-([(трифторметан)сульфонилокси)]пентаноат.

В атмосфере азота, раствор пиридина (11,9 г) в сухом дихлорметане (500 мл) быстро перемешивают при минус 22^оС, при этом добавляют по каплям ангидрид трифторметансульфокислоты (40,5 г). После добавления белую суспензию перемешивают при минус 22^оС 15 мин, затем при этой же температуре добавляют в течение 2 мин, раствор этил-2-гидрокси пентаноата (16,8 г) в дихлорметане. Далее дают температуре повыситься до комнатной, и смесь энергично перемешивают 1 ч по прошествии этого времени твердое белое вещество отфильтровывают, тщательно промывают дихлорметаном, объединенные промывные жидкости и фильтрат выпаривают досуха. Полученное маслянистое твердое вещество берут в петролейный эфир (60-80^оС) и пропускают по направлению сверху вниз через короткую прокладку из силикагеля, при элюировании дополнительным количеством петролейного эфира. Раствор в петролейном эфире выпаривают досуха остается масло (23,4 г).

ЯМR, дейтерированный хлороформ, дельта 1,0 (3Н, триплет); 1,32 (3Н, триплет); 1,5 (2Н, мультиплет); 2,0 (2Н, мультиплет); 5,12 (1Н, триплет).

b). N-(1-Этоксикарбонилбутил-L-аланил бензиловый сложный эфир.

Гидрохлорид бензилового эфира L-аланила (10,0 г) превращают в свободное основание в дихлорметане, применяя триэтиламин. Полученную смесь выпаривают досуха, и остаток суспендируют несколькими порциями диэтилового эфира. Объединенные эфирные растворы упаривают досуха, и остается свободное основание в виде масла. Масло растворяют в дихлорметане (200 мл) и добавляют триэтиламин (7,2 г). Полученный раствор перемешивают в атмосфере азота при комнатной температуре, при добавлении по каплям в течение 30 мин раствора продукта со стадии а) (12,8 г) в дихлорметане. Полученную смесь перемешивают 2 ч при комнатной температуре. 2 ч с обратным холодильником, после чего выпаривают досуха. Остается маслообразный остаток, который очищают с помощью мгновенной хроматографии на силикагеле, используя для элюирования смесь петролейного эфира (60-80^оС) с диэтиловым эфиром 5:1, что дает диастереизомеры R, S (4,8 г; 34%) и S,S (4,7 г, 33%) по ходу элюирования.

R, S
ЯМR, дейтерированный хлороформ, дельта: 0,9 (3Н, триплет); 1,24 (3Н, триплет); 1,30 (3Н, дублет); 1,38 (2Н, мультиплет); 1,6 (2Н, мультиплет); 1,27 (1Н, триплет); 3,4 (1Н, квартет), 4,12 (2Н, мультиплет), 5,15 (2Н, квартет); 7,35 (5Н, синглет).

ЯМR, дейтерированный хлороформ, дельта; 0,9 (3Н, триплет); 1,28 (3Н, триплет); 1,38 (3Н, дублет); 1,3-1,8 (4Н, мультиплет). 3,28 (1Н, триплет); 3,4 (1Н, квартет); 4,18 (2Н, мультиплет); 5,17 (2Н, квартет); 7,35 (5Н, синглет).

с) N-(1-(S)-Этоксикарбонилбутил)-L-аланин.

S. S диастереоизомер сложного бензилового эфира после стадии в) (6,2 г) в этаноле (250 мл) гидрируют при 294 кПа (3 ат) при комнатной температуре 30 мин над 10%-ным палладием на активированном угле (0,6 г). Катализатор удаляют фильтрованием, и фильтрат упаривают почти досуха. Остаток суспендируют в диэтиловом эфире, белое твердое вещество отфильтровывают и высушивают, что дает требуемый продукт (3, 8 г), т.пл. 133-4^оС.

С₁₀Н₁₉NO₄.

Вычислено, С 55,29; Н 8,75; N 6,45.

Найдено, С 55,62; Н 8,46; N 6,32.

d) Бензил 5-трет-бутил-3-[N-(1-(S)-этоксикарбонилбутил)-L-аланил]-2,3-дигидро-1, 3,4-тиадиазол-2(Н)-карбоксилат.

В атмосфере азота, при комнатной температуре смесь аминокислоты по стадии с) (0,62 г) и 1-гидроксибензотриазол (0,45 г) в сухом дихлорметане (125 мл) перемешивают 30 м с бензил 5-трет-бутил-2,3-дигидро-1,3,4-тиадиазол-2-карбоксилатом (1,6 г). Затем добавляют дициклогексилкарбодиимид (0,6 г), и полученную смесь перемешивают 18 ч, фильтруют и фильтрат упаривают досуха. Остаток очищают колоночной хроматографией на силикагеле, причем для элюирования применяют диэтиловый эфир петролейный эфир (60-80^оС), 1:1, что дает требуемый диэфир в виде масла (1,1 г).

ЯМR, дейтерированный хлороформ, дельта: 0,9 (3Н, триплет), 1,2-1,7 (19Н, мультиплет); 3,3 (1Н, триплет); 4,2 (3Н, мультиплет); 5,2 (2Н, квартет); 6,18 (1Н, синглет); 7,35 (5Н, синглет).

е) Бензил 5-трет-бутил-3-[N-(1-(S)-этоксикарбонил бутил)-L-аланин]-2,3-дигидро-1,3,4-тиадиазол-2-(S)-карбоксилат.

В атмосфере азота пирролидин (1,5 мл) добавляют к раствору 'S, S, R¹ сложного эфира (ступень d) (1,6 г) и полученный раствор перемешивают при комнатной температуре 24 ч. Полученную таким путем смесь 1:1 S, S, R и S, S, S сложных эфиров разделяют с помощью мгновенной хроматографии на силикагеле, элюируя смесью этилацетат петролейный эфир (60-80^оС) 1:3, что дает 0,65 г каждого изомера. Изомер S, S, R рециркулируют так, что общая степень конверсии составляет 81%
ЯМR, дейтерированный хлороформ, дельта:
0,9 (3Н, триплет); 1,2-1,7 (19Н, мультиплет), 3,3 (1Н, триплет); 4,2 (3Н, мультиплет); 5,17 (2Н, синглет); 6,18 (1Н, синглет), 7,35 (5Н, синглет).

f) 5-трет-Бутил-3-[N-(1-(S)-этоксикарбонилбутил)-L-аланин] -2,3-дигидро-1,3,4- тиадиазол-2-(S)-карбоновая кислота.

S, S, S бензиловый эфир со стадии е) (1,8 г) в этаноле (500 мл) гидрируют над 10%-ным палладием на активированном угле (1,8 г) при атмосферном давлении и комнатной температуре 5 ч. Катализатор удаляют фильтрованием, и фильтрат упаривают досуха. Остаток растирают с 1:1 смесью эфира с петролейным эфиром 60-80^оС, что дает требуемую кислоту в виде твердого белого вещества (1,3 г). Т.пл. 183-5^оС.

С₁₇Н₂₉N₃O₅S ˙ 2,5 H₂O
Вычислено, С 47,22; Н 7,87; N 9,72; S 7,41.

Найдено, С 47,13; Н 7,89; N 9,31; S 7,12.

П р и м е р 4. 3-[N-(1-(S)-Этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-аланил]-2,3-дигидро-5- (морфолин-4- ил)-1,3,4-тиадиазол-2-(S)-соль карбоновой кислоты и малеиновой кислоты.

Раствор 3-[N-(1-(S)-этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-аланил]-2,3-дигидро-5-(морфолин- 4-илвой кислоты (0,47 г) (полученной из соответствующих исходных материалов по примеру 1) в этаноле (25 мл) обрабатывают малеиновой кислотой (0,11 г). Растворитель удаляют выпариванием. Растирание остатка с ацетонитрилом приводит к указанному в заголовке продукту в виде белого твердого вещества (0,31 г), т.пл. 174-5^оС. [α]_D ^22,5-153,2.

П р и м е р 5. Аммоний 2,3-дигидро-3-(3-меркапто-2-(S)-метил-1-оксопропил)-5-фенил-1,3,4-тиадиазол- 2-(Sмоногидрат
а) Бензил-3-(3-ацетилтил-2-(S)-метил-1-оксопропил)-2,3-дигидро-5-фенил-1,3,4- тиадиазол-2-карбоксилат.

3-Ацетилтио-2-(S)-метилпропаноил хлорид (2,3 г) в дихлорметане (30 мл) добавляют в течение 5 мин к перемешиваемой смеси бензил 2,3-дигидро-5-фенил-1,3,4-тиадиазол-2-карбоксилата (приготовленного по примеру 1а с применением соответствующих исходных материалов) (3,6 г) и поливинилпиридина (2,4 г) в дихлорметане (60 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре 20 ч и затем добавляют 3-ацетилтио-2-(S)-метилпропаноил хлорида (1,2 г). Смесь перемешивают дополнительно 2 ч, фильтруют, и фильтрат перемешивают с насыщенным раствором бикарбоната натрия в течение 1 ч. Органическую фазу отделяют, промывают водой, высушивают и упаривают до смолы. Остаток очищают с помощью мгновенной хроматографии, что дает указанный продукт в виде масла (4,4 г).

в) 2,3-Дигидро-3-(3-меркапто-2-(S)-метил-1-оксопропил)-5-фенил-1,3,4-тиадиазол -2- (S)-карбоксилат аммония.

Раствор продукта стадии а) (2,8 г) в метаноле (50 мл) в атмосфере азота обрабатывают каплями раствора гидроокиси калия (1,3 г) в воде (100 мл). Смесь перемешивают дополнительно 4 ч, затем распределяют между эфиром и водой. Отделенную водную фазу подкисляют 2 н. хлористоводородной кислотой и экстрагируют эфиром. Органическую фазу промывают водой, высушивают и упаривают до масла. Остаток очищают обратно фазной тонкослойной хроматографией, проводимой под повышенным давлением (HPLC), что дает указанный в заголовке продукт (0,023 г) в виде белого твердого вещества, т.пл. 194⁺7^оС.

Масс-спектр показал М⁺310 (основной пак 163).

С₁₃Н₁₄N₂O₃S₂ требует мол.м. 310.

Следующие соединения примера 6 получают по способам, изложенным в предшествующих примерах.

П р и м е р 6. а) 3-[N-(1-(S)-Этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-аланил]-2,3-дигидро-5-фенил-1,3, 4- -тиадиазол-2-(S)-карбоновая кислота, т. пл. 180,5-182^оС. [α]_D^22,5-256,5.

в) 3-[N-(1-(S)-Этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-аланил]-2,3-дигидро-5-фенил-1,3, 4-тиадиазол-2-(S)-карбоновая кислота М⁺, (FAB), 470, т.кип. 234.

с) 2,3-Дигидро-3-(3-меркапто-1-гидроксипропил)-5-фенил-1,3,4-тиадиазол-2-кар- боновая кислота, т.пл. 145-6^оС.

d) 3-[N-(1-(S)-Этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-аланил]-2,3-дигидро-5-[4-(метил- тио)фенил] -1,3,4-тиадиазол-2-(S)- карбоновая кислота, т. пл. 163-4^оС.

е) 2-Циклогексил-5,6-дигидро-4-(3-меркапто-1-оксопропил)-4Н-1,3,4-тиадиазин-5- карбоновая кислота, т.пл. 95-7^оС.

f) 2,3-Дигидро-3-(3-меркапто-1-оксопропил)-5-фенил-1,3,4-оксадиазол-2-карбоно-в ая кислота, т.пл. 106-9^оС.

д) 2,3-Дигидро-3-(3-меркапто-1-оксопропил)-5-[4-(трифторметил)фенил]-1,3,4-тиад иазокислота, т.пл. 93-5^оС.

h) Бензил-4-3-ацетилтио-1-оксопропил-5,6-дигидро-1-метил-2-фенил-4Н-1,3,4-триаз ин-5М⁺ 439 т.кип. 93^оС.

i) 5-трет-бутил-3-[N-(1-(S)-этоксикарбонилбутил)-L-аланил] -2,3-дигидро-1,3,4-ти адиазол-2-(R)-карбоновая кислота, т.пл. 67-9^оС.

j) Дициклогексиламиновая соль 2,3-Дигидро-3-(3-меркапто-1-оксопропил)-5- метил-1,3,4-тиадиазол-2-карбоновой кислоты, т.пл. 150-3^о.

к) 5-трет-Бутил-3-[N-(1-(R)-этоксикарбонилбутил)-L-аланил] -2,3-дигидро-1,3,4-ти адиакислота, т.пл. 124-5^оС.

l) 3-[N-(1-(S)-карбокси-3-(фенилпропил)-L-аланил]-2,3-дигидро-5-фенил-1,3,4-тиа диазкислота т.пл. 165-170^оС (разложение).

m) 5-трет-Бутил-3-[N-(1-(S)-карбокси-3-фенилпропил)-L-аланил]-2,3-дигидро-1,3,4 -тиакислота, т.пл. 179-184^оС (разложение).

n) 5-трет-Бутил-3-[N-(1-(S)-карбоксибутил)-L-аланил] -2,3-дигидро-1,3,4-тиадиазо л-2-кислота, т.пл. 156-9^оС.

о) 5-Циклогексил-3-[N-(1-(S)-этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-аланил]-2,3-дигидр о-1,кислота, т.пл. 136-8^оС.

р) 3-[N-(1-(S)-Этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-аланил]-2,3-дигидро-5-(пиридин-3 -ил)кислота, т.пл. 160-3^оС.

q) 3-[N-(1-(S)-Этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-аланил]-2,3-дигидро-5-изопропил- 1,3,кислота, т.пл. 151-2^оС [α]_D ^22,5-318,8.

r) 3-[N-(1-(S)-Этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-аланил]-2,3-дигидро-5-метил-1,3, 4-тикислота, т.пл. 161-2^оС.

s) 5-трет-Бутил-3-[N²-(1)-(S)-этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-лизил]-2,3-дигидр о-1,кислоты гидрохлорид, М⁺ (FAB) 507, т.кип. 84^оС, [α] _D^22,5-143,0.

t) 5-трет-Бутил-3-[N-(1-(S)-этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-аланил] -2,3-дигидро -1,3кислота, т.пл. 60-3^оС.

u) 5-трет-Бутил-2,3-дигидро-3-(3-меркапто-1-оксопропил)-1,3,4-тиадиазол-2-карбо новакислота, т.пл. 128^оС.

v) 2,3-Дигидро-3-(3-меркапто-1-оксопропил)-5-(4-метоксифенил)-1,2,4-тиадиазол-2 -каркислота, т.пл. 164^оС.

w) Этил-3-(3-ацетилтио-1-оксопропил)-2,3-дигидро-5-метиламино-1,3,4-тиадиазол-2 -карт.пл. 102-34^оС.

х) 2,3-Дигидро-3-(3-меркапто-1-оксопропил)-5-(2-метилфенил)-1,3,4-тиадиазол-2-к арбокислота, т.пл. 118-120^оС.

y) 5-(Фуран-2-ил)-2,3-дигидро-3-(3-меркапто-1-оксопропил)-1,3, 4-тиадиазол-2-карбоновая кислота, т.пл. 105-8^оС.

z) Этил-3-(3-ацетилтио-1-оксопропил)-5-(4-хлорфенил)-2,3-дигидро-1,3,4-тиадиазо л-2-ЯМR (дейтерированный хлороформ), характерные пики при дельта 7,50 (4Н, квартет, ароматический СН синглет), дельта 2,34 (3Н, синглет, SCOCH₃) и дельта 6,30 (1Н, синглет, гетероциклический СН).

аа) Бензил 3-(3-ацетилтио-1-оксопропил-5-бензил-2,3-дигидро-1,3,4-тиадиазол-2-карбоксил ат, ЯМR (I дейтерированный хлороформ), характеристические пики при дельта 6,17 (1Н, синглет, гетероциклический СН).

ав) Бензил 3-(3-ацетилтио-1-Оксопропил)-2,3-дигидро-5-(2-фенилэтил)-1,3,4-тиа- диазол-2-карбоксилат, ЯМR (дейтерированный хлороформ, характеристические пики при дельта 6,10 (1Н, синглет, гетероциклический СН).

ас) Этил-3-(3-ацетилтио-1-оксопропил)-2,3-дигидро-5-(нафталин-2-ил)-1,3,4-тиадиа зол-т.пл. 107-8^оС.

ad) 5-(Адамант-1-ил)-2,3-дигидро-3-(3-меркапто-1-оксопропил)-1,3,4-тиадиазол-2-к арбокислота, т.пл. 183-4^оС.

ае) 5-трет-Бутил-3-[N-(1-(R)-этоксикарбонилбутил)-L-аланил]-2,3-дигидро-1,3,4-ти адиакислота, т.пл. 67-9^оС.

af) 3-Циклогексил-2,3-дигидро-3-(3-меркапто-1-оксопропил)-1,3,4-тиадиазол-2-карб оновкислоты дициклогексиламиновая соль, т.пл. 174-6^оС.

ag) 2,3-Дигидро-3-(3-меркапто-1-оксопропил)-5-метилтио-1,3,4-тиадиазол-2-карбоно вой кислоты дициклогексиламиновая соль, т.пл. 150-3^оС.

ah) Бензил 3-[N-(1-(S)-этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-аланил]-2,3-дигидро-5-метилтио-13,4ЯМR (дейтерированный хлороформ), характеристические пики спектра при дельта 2,55 (3Н, синглет, SCH₃) и 6,32 (1Н, синглет, гетероциклический СН).

П р и м е р 7. 5-трет-Бутил-3-[N-(1-(S)-этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-аланил]-2,3-дигидро -1,3кислота
а) Гидрохлорид N-(1-(S)-этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-аланилхлорида.

2,5 г N-(1-(S)-этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-аланина суспендировался в 20 мл сухого дихлорметана, через который с перемешиванием пропускался ток газообразного хлористого водорода, в результате чего получался раствор гидрохлоридной соли. Раствор осаждали до температуры 0^оС в течение 2-3 мин, добавляли 2,3 г пентахлорида фосфора. Затем смесь перемешивали в течение 5 ч, и перегонкой под пониженным давлением удаляли растворитель. Остаток промывали 60 мл сухого диэтилового эфира, фильтровали и сушили под пониженным давлением, получая 2,9 г продукта, указанного в подзаголовке примера, с температурой плавления 83-85^оС.

в) Бензил-5-трет-бутил-3-[N-(1-(S)-этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-аланил]-2,3- диги
1,9 мл триэтиламина добавлялось в раствор, содержащий 1,8 г 5-трет-бутил-2,3-дигидро-1,3,4-тиадиазол-2-(S)-карбоксилата в 15 мл сухого этанола и смесь охлаждалась до температуры 40^оС.

В течение приблизительно 6 мин при температуре 40^оС при непрерывном перемешивании добавлялось 2,21 г соединения примера 1а в виде его суспензии в 15 мл сухого дихлорметана. Далее эту смесь перемешивали при той же температуре в течение 1 ч. Жидкостная хроматография с высокой разрешающей способностью показывала, что образовывался продукт, указанный в подзаголовке примера. Реакционную смесь выливали в воду, органический экстракт выделяли, сушили над сульфатом натрия, и органический раствор выпаривали при пониженном давлении. Остаток очищался с помощью мгновенной (испарительной) хроматографии с получением 2,12 г соединения, указанного в подзаголовке примера, в виде масла.

Масс-спектр (FAB) показал М⁺ 540 (основной пик 91).

с) Бензил-5-трет-бутил-3-[N-(1-(S)-этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-аланил]-2,3- диги
Раствор 1,5 г продукта со стадии в) и 1,5 г пирролидина в 45 мл сухого ацетонитрила обрабатывался измельченными молекулярными ситами 3, и смесь перемешивалась при комнатной температуре в течение 7 часов. Летучие материалы удалялись испарением, и с помощью испарительной хроматографии с использованием в качестве элюента смеси петролейного эфира с этилацетатом отделялся S, S, S-изомер от более полярного S, S, R-изомера. Продукт, указанный в подзаголовке (0,65 г) отделялся в виде светлой смолы (камеди).

Масс-спектр показал М⁺ 539 (основной пик 234).

d) 5-трет-бутил-3-[N-(1-(S)-этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-аланил] -2,3-дигидро -1,3кислота.

Раствор 0,45 г продукта со стадии с) в 70 мл этанола обрабатывался 0,4 г 10% -ного палладия на угле, и смесь перемешивалась под давлением водорода 1 атм в течение 16 ч. Смесь фильтровалась для удаления катализатора, и объем фильтрата уменьшался выпариванием, которое после охлаждения давало целевой продукт (0,2 г) в виде белых кристаллов, т.пл. 165-167^оС.

Для оценки биологической активности соединения изобретения подвергались следующим испытаниям.

Группам крыс с самопроизвольно повышенным давлением (спонтанно гипертензивные крысы SHP) давали возможность полностью привыкнуть ко всем экспериментальным процедурам, с помощью тренировки в течение периода времени не менее трех недель. Были использованы только крысы, которые нормально реагировали на стандартное соединение нифедипии при его введении пеpоpально в дозе 10^-5 моль/кг. Животным перед испытанием в течение ночи не давали пищи, но обеспечивали свободный доступ к воде и 6% раствору глюкозы. Двенадцать SHP помещали в изолированные клетки, которые помещали в подогреваемый инкубатор при 30 ± 2^оС на 20 мин, чтобы достичь пульсации хвоста. Систематическое кровяное давление крыс регистрировалось с использованием сфигмоманометрической манжетки, расположенной вокруг передней части хвоста. Манжетка у хвоста раздувалась с использованием автоматического сфигмоманометра, соединенного с самописцем. Точка, в которой сигнал кровяного давления исчезает при раздувании манжета, используется как мера систолического кровяного давления. Крыс затем разделяли на две группы по шесть штук с приблизительно равным средним значением систолического кровяного давления. Обеим группам перорально давали 2х10 м^-5 моль/кг гидрохлортиазида. Одной группе (контрольной) давали носитель (полиэтиленгликоль с м. в. 300). 1 мл/кг перорально, а другой группе (испытуемой) давали испытуемое соединение, растворенное в полиэтиленгликоле (1 мл/кг п. о.). Измерения систолического кровяного давления производились через 24 ч после введения испытуемого соединения или носителя. Соединения сравнивались непосредственно с каптоприлом, эналаприлом и делаприлом.

По описанной процедуре испытывались следующие соединения и показали результаты, данные в таблице.

Формула изобретения

1. ПРОИЗВОДНЫЕ 1,3,4-ТИОДИАЗОЛ-2-КАРБОНОВЫХ КИСЛОТ общей формулы

где R₁ метил или группа (СН₂)₄-NH₂;
R₂ С₁-С₆-алкил или фенил(С₁-С₆)алкил;
R₃ С₁-С₁₀-алкил, морфолинил,
или их фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры или амиды.

2. Производные кислот по п. 1, в которых R₂ Н-пропил или фенилэтил;
R₃ трет-бутил и все асимметрические атомы углерода находятся в S-конфигурации.

3. Производные кислот по п. 1, представляющие собой 5-трет-бутил-3-[N-(I-( S )-этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-аланил-2,3-дигидро-1,3,4-тиадиазол-2-( S )-карбоновую кислоту, 5-трет-бутил-3-[ N²-1-(S)-карбокси-3-фенил-пропил )-L-лизил -2,3-дигидро-1,3,4-тиадиазол-2-( S )-карбоновую кислоту, соль 3-[ N-(I-(S)-этоксикарбонил-3-фенилпропил)-L-аланил -2,3-дигидро-5-(морфолин-4-ил )-1,3,4-тиадиазол-2-( S )-карбоновой кислоты с малеиновой кислотой, 5-трет-бутил-3-[ N-(I-( S )-карбокси-3-фенил-пропил)-L-аланил-2,3-дигидро-1,3,4-тиадиазол-2-( S )-карбоновую кислоту, 5-трет-бутил-3-[ N-(I-(S)-карбоксибутил)-L-аланил-2,3-дигидро-1,3,4-тиадиазол-2-( S )-карбоновую кислоту или 3-[ N-(I-(S)-этокси-карбонил-3-фенилпропил)-L-аланил-2,3-дигидро-5-изопропил-1,3,4-тиадиазол-2-( S )-карбоновую кислоту и их фармацевтически приемлемые соли.

РИСУНКИ

Рисунок 1