Способ определения биологической активности инсектицидных препаратов на основе энтомопатогенных грибов

 

Использование: производство микробиологических средств защиты растений, тестирование грибных препаратов, таких как вертициллин, боверин. Сущность изобретения: в суспензию исследуемых энтомопатогенных препаратов погружают пупарии комнатной мухи, отобранные на восьмые сутки со дня закладки яиц, выдерживают инфицированные пупарии. Затем осуществляют учет гибели вылетевших имаго. 4 табл.

Изобретение относится к микробиологическим средствам защиты растений и может быть использовано для тестирования грибных препаратов вертициллина и боверина.

Известны способы оценки активности вертициллина на личинках тепличной белокрылки Trialeurodes Vaporaviorum Westw младших возрастов, а боверина с использованием гусениц яблонной плодожерки Carpocapsa pomonella L. Недостатками данных способов контроля являются их трудоемкость, длительность, составляющая от 17 до 22 сут от момента получения яиц белокрылки до появления визуальных признаков поражения личинок и не менее 28 сут в случае оценки боверина на гусеницах яблонной плодожерки, кроме того, отсутствует единый, универсальный тест-объект пригодный для биоиспытаний данных препаратов.

Известен способ, согласно которому в качестве тест-объекта для испытаний боверина используют имаго комнатной мухи Musca domestica L. Однако недостатком способа является зависимость значений ЛК₅₀ от продолжительности периода высокой влажности воздуха, близкой к 100% в течение первых суток, что вызывает определенные сложности при содержании инфицированных насекомых. Помимо этого, недостатком является и применение в качестве теста подвижной стадии-имаго, что создает дополнительные трудности. Учеты гибели имаго проводят на девятые сутки после их заражения.

Задачей изобретения является сокращение времени биоиспытаний, трудоемкости и повышение точности оценки активности препаратов.

Задача решается путем заражения тест-объекта и учета гибели особей, причем в качестве тест-объекта используют пупарии комнатной мухи, отобранные на восьмые сутки со дня закладки яиц, в качестве особей-имаго, при этом учет гибели имаго осуществляют на 5-7-е сут после заражения пупариев.

П р и м е р 1. Определение активности боверина и вертициллина проводят путем погружения, отобранных на восьмые сутки, пупариев в рабочие суспензии с исходными концентрациями, равными 0,4% и 4% соответственно. Исходные концентрации готовят с использованием размельчителя тканей РТ-2 в течение 2 мин при скорости 4000 об/мин. Суспензии других концентраций готовят путем последовательных десятикратных разведений. С целью увеличения прилипаемости применяют КМЦ в количестве 200 мг на 25 см³ суспензии, предварительно выдерживая его в воде перед гoмогенизацией в течение 1 ч.

Каждую из пяти используемых концентраций испытывают в трех повторностях. Отобранные пупарии по 15 шт. на каждую повторность, помещенные в пластмассовые стаканчики объемом 30 см³ с множеством мелких отверстий, инфицируют методом погружения в суспензии на 10 с. Для равномерности смачивания поверхности пупариев используют диск с мелкими отверстиями, укрепленный на стержне, препятствующий всплыванию пупариев на поверхность суспензии. Инфицированные пупарии раскладывают в подготовленные чашки Петри, на дне которых в качестве корма, а также с целью увлажнения размещены плотные ватные тампоны длиной 2,5 см и диаметром 1,0 см, смоченные в растворе с массовой долей сахарозы 2,5% а по краям 2-слойное кольцо из фильтровальной бумаги шииной 1,2 см. Одновременно с опытом ставят контроль в трех повторностях. Контрольные пупарии погружают в раствор с массовой долей КМЦ 0,8% а затем их переносят в чашки Петри с размещенными на их дне плотными ватными тампонами, смоченными в растворе с массовой долей сахарозы 2,5% и фильтровальной бумагой по краям. Чашки с пупариями помещают в термостат с температурой 28^оС. Учеты гибели вылетевших имаго проводят на 6-7-е сут при оценке боверина и 5-7-е сут при оценке вертициллина.

В опытах с боверином использованы препараты с сильно различающимися значениями титра спор. Для математической обработки данных использован регрессионный анализ. Коэффициент корреляции r T, 0,897. Полученное значение ко- эффициента корреляции свидетельствует о наличии хорошей корреляции между титром спор и значениями ЛК₅₀.

В опытах с вертициллином использованы препараты с близкими значениями титра спор. Среднее значение ЛК₅₀ 0,071. Среднеквадратичный разброс σ 0,0097. Ошибка вычислений равна 15% Результаты, полученные в примере 1, представлены в табл. 1-3.

П р и м е р 2. Были получены экспериментальные данные по способу-прототипу, согласно которому в качестве теста использовали имаго M. domectica. Результаты экспериментов представлены в табл. 4. Среднее значение ЛК₅₀ 0,0025. Среднеквадратичный разброс σ 0,001. Ошибка вычислений равна 40% что значительно превышает ошибку в расчетах, полученных по предлагаемому способу тестирования.

Таким образом, согласно полученным данным, проведение биооценки на неподвижной стадии развития пупарии уменьшает ошибку вычислений до 15% в сравнении с ошибкой 40% полученной по прототипу.

Предлагаемый способ также позволяет сократить время биоиспытаний.

Формула изобретения

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ИНСЕКТИЦИДНЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ЭНТОМОПАТОГЕННЫХ ГРИБОВ, включающий заражение тест-объекта и учет гибели особей, отличающийся тем, что в качестве тест-объекта используют пупарии комнатной мухи, отобранной на восьмые сутки со дня закладки яиц, в качестве особей имаго, при этом учет гибели имаго осуществляют на 5 7 сутки после заражения пупариев.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3