Способ получения полимерной и олигомерной фракций столбнячного анатоксина

 

Изобретение относится к медицинской промышленности, а именно вакцино-сывороточному делу и касается совершенствования производства прививочных препаратов. Способ предусматривает освобождение полимерной и олигомерной фракций столбнячного анатоксина от антигено-неактивных примесей путем эксклюзионной мембранной фильтрации. Предлагается использовать для профилактики столбняка смесь полимерной и олигомерной фракций, очищенную методом ультрафильтрации на полых волокнах на основе полиметафенилентереизофталамида с содержанием концевых карбоксильных групп - (6,2-14,8)· 10^-5 г/моль/г, модифицированное дестранами с молекулярной массой 50-500 кД и эпоксидной смолой (УАВ-0,2 100М), после чего дополнительно очищают полимерную фракцию ультрафильтрацией через мембрану на основе полиакрилонитрила с эксклюзионным пределом до 300 кД. 2 табл.

Изобретение относится к медицинской промышленности, а именно вакцино-сывороточному делу и касается совершенствования производства прививочных препаратов, в частности, получения очищенных полимерной и олигомерной фракций столбнячного анатоксина с молекулярной массой 300 кД и 100-300 кД, соответственно, способом двухступенчатой ультрафильтрации через полупроницаемые мембраны.

Известен способ разделения столбнячного анатоксина, полученного при культивировании Clostridium tetani штамма Колле, позволяющий в некоторых случаях получать необходимую удельную активность во фракции концентрата ХМ-300 (молекулярная масса 300 кД).

Однако, воспроизведение такого способа ультрафильтрационной очистки столбнячного анатоксина из фильтрата культуры Clostridium tetani штамма Копенгаген, выращенного на отличающихся от болгарского варианта питательных средах, не привело к достижению желаемого результата.

Этой цели удалось, однако, достигнуть путем выделения полимерной и олигомерной фракций столбнячного анатоксина способом двухступенчатой ультрафильтрации с использованием мембран в виде полых волокон, на первой стадии на основе полиметафенилентереизофталамида (6,2-14,8)·10^-5 г/моль/л модифицированных декстранами с молекулярной массой 50-500 кД и эпоксидной смолой, на второй на основе полиакрилонитрила с экскобзионным пределом до 300 кД.

Пример.

Ультрафильтрацию проводят на установках АУФ-01 с половолоконной мембраной УАВ-0,2 100 М на основе полиметафенилентереизофталамида, модифицированной водорастворимым реагентом и эпоксидной смолой. Исходный анатоксин с удельной специфической активностью от 500 до 750 ЕС/мг белкового азота берут в объеме 10-12 литров. Фильтрацию проводят при рабочем давлении 0,6-0,7 МПа. Сконцентрированный в 5 раз анатоксин промывают двукратными объемами 0,05 М раствором фосфатного буфера 8-10 раз, контролируя степень отмывки по изменению величины оптической плотности промывочного фильтрата. После этого собирают концентрат. Фильтрат отбрасывают. В результате такого разделения в части случаев (см. опыты 1, 3 и 4 в табл. 1) удается получить концентраты, удельная специфическая активность которых превышает 1000 ЕС/мг белкового азота. Такие итоговые препараты можно выпускать в виде смеси полимерной и олигомерной фракций столбнячного анатоксина. Если же удельная активность после такой фильтрации не превышает 1000 ЕС/мг белкового азота (см. опыты 2, 5 и 6 табл. 1), то концентрат УАВ-0,2 100 М подвергают дополнительной ультрафильтрации через мембрану с эксклюзивным пределом до 300 кД.

В качестве примера могут служить опыты (см. табл. 2), когда в ячейку аппарата Amicon 2000 с мембраной Diaflo ХМ-300 заливают 2 литра концентрата, очищенного на половолоконном аппарате УАВ-0,2 100 М. Включают магнитную мешалку с 30-40 об/мин и азотом создают в ячейке давление 0,06-0,07 МПа. Фильтрат, продавленный через мембрану, собирают в мерный цилиндр. В ячейке оставляют 500-700 мл концентрата, который промывают 3-5 раз 0,05 М фосфатным буферным раствором. Таким методом последовательной ультрафильтрации удается во всех случаях повысить удельную активность анатоксина до 1000 ЕС/мг белкового азота при выходе 70% получив в изолированном виде полимерную фракцию столбнячного анатоксина (табл. 2). Препараты столбнячного анатоксина, дополнительно очищенные по вышеописанному способу, прошли комиссионную проверку в ГИСК им. Тарасевича. Подтверждена их высокая удельная специфическая и протективная активность. ГИСК им. Тарасевича согласовал дополнение к регламенту производства столбнячного анатоксина, предусматривающее возможность использования для доочистки двухступенчатой ультрафильтрации. При этом на первом этапе используют мембраны из полых волокон на основе полиметафенилентереизофталамида, модифицированные декстранами с молекулярной массой 50-500 кД и эпоксидной смолой (УАВ-0,2 100 М), а на втором этапе мембрану на основе полиакрилонитрила с эксклюзионным пределом до 300 кД.

Формула изобретения

Способ получения полимерной и олигомерной фракций столбнячного анатоксина проведением двухступенчатой фильтрации через полупроницаемые полимерные мембраны, отличающийся тем, что на первой стадии используют мембраны из полых волокон на основе полиметафенилентереизофталемида с содержанием концевых карбоксильных групп (6,2 14,8)10^-5 г/моль/г, модифицированные декстранами с молекулярной массой 50 500 кД и эпоксидной смолой УАВ 0,2 100 М, а на второй стадии мембрану на основе полиакрилонитрила с эксклюзионным пределом до 300 кД.

РИСУНКИ

Рисунок 1