Способ получения гемоглобина
Изобретение относится к технологии выделения биологически активных соединений, а именно к выделению гемоглобина из крови сельскохозяйственных животных. Препарат гемоглобина применяют в диагностических исследованиях и научно-исследовательских работах. В последнее время к нему появляется интерес как к железосодержащей пищевой добавке. Целью предлагаемого способа является упрощение и удешевление процесса получения и одновременное увеличение выхода неденатурированного кристаллического гемоглобина, применяемого в качестве пищевой добавки, предназначенной для лечения и профилактики железодефицитных состояний человека и животных. Поставленная цель достигается получением гемолизата эритроцитов путем разбавления эритроцитарной массы дистиллированной водой в соотношении 1:2 - 1:4 и замораживания с последующим концентрированием гемолизата ультрафильтрацией и далее стерилизующей фильтрацией и лиофилизацией. Выход кристаллического гемоглобина с чистотой более 80% составляет свыше 95%. Предлагаемый способ позволяет увеличить выход и чистоту получаемого гемоглобина, с сохранением его нативных свойств. 1 табл.
Изобретение относится к выделению биологически активных веществ из животного сырья, а именно к выделению гемоглобина из крови сельскохозяйственных животных. Препарат гемоглобина применяют в диагностических исследованиях, научно-исследовательских работах, а также в качестве красителя в производстве продуктов питания.
Существующие способы [1-3] выделения гемоглобина из крови животных основаны на использовании в качестве осаждающих агентов сульфата аммония или ацетона. Даже незначительные примеси этих веществ в препарате гемоглобина, в случае использования его в качестве пищевой добавки, недопустимы и требуют тщательной и длительной очистки от них диализом или другими методами. Это приводит к значительным потерям гемоглобина и отрицательно сказывается на его физико-химических свойствах (снижается растворимость, разрушается тетрамерная структура, снижается общее содержание железа и увеличивается доля трехвалентного железа). Известен способ получения гемоглобина [4] включающий гемолиз эритроцитов в растворе хлористого натрия при соотношении эритроцитов и хлористого натрия 1: 10 с последующим добавлением аскорбиновой кислоты, центрифугированием и очисткой с помощью микро- и ультрафильтрации. Однако данный способ многоэтапен и требует значительных временных и трудовых затрат. Целью предлагаемого способа является упрощение и удешевление процесса получения и одновременное увеличение выхода неденатурированного кристаллического гемоглобина, применяемого в качестве пищевой добавки, предназначенной для лечения и профилактики железодефицитных состояний человека и животных. Поставленная цель достигается получением гемолиза эритроцитов путем разбавления эритроцитарной массы дистиллированной водой и замораживания с последующим концентрированием гемолизата ультрафильтрацией, стерилизующей фильтрацией и лиофилизацией. Пример. 10 л стабилизированной крови крупного рогатого скота или свиней сепарируют в течение 30 мин при 6000 об/мин при 4oС. Осадок, содержащий эритроциты, разбавляют дистиллированной водой в соотношении 1:2-1:4 и замораживают при -20oС После размораживания гемолизат сепарируют или центрифугируют при тех же условиях и супернатант после фильтрации подвергают концентрированию до объема 5 л на ультрафильтрационной половолоконной установке при 10-15oС и рН 6,8-7,2 с последующей стерилизующей микрофильтрацией и лиофилизацией. Выход кристаллического гемоглобина с чистотой более 80% составляет свыше 95% Физико-химические показатели гемоглобина представлены в таблице. Таким образом, предлагаемый способ позволяет получать в промышленных масштабах гемоглобин, очищенный от высоко- и низкомолекулярных примесных соединений и патогенных микроорганизмов, с чистотой свыше 80% и выходом 95% Литература 1. Авторское свидетельство СССР N 174326, 1965. 2. Украинский биохимический журнал N 1, с. 100, 1966. 3. Ферменты в экспериментальной и клинической онкологии и радиологии, вып. ХХ, ч.1, с. 26, Ленинград, 1967. 4. Авторское свидетельство СССР N 1205910, 1986.Формула изобретения
Способ получения гемоглобина из крови сельскохозяйственных животных путем разделения крови на плазму и эритроциты, получение гемолизата, очистку от балластных веществ фильтрованием, концентрирование с помощью ультрафильтрации с последующей фильтрацией, стерилизацией и лиофилизацией целевого продукта, отличающийся тем, что эритроциты разбавляют дистиллированной водой в соотношении 1 2 1 4 и замораживают при -20oС, затем после размораживания концентрируют ультрафильтрацией при 10 15oС при рН 6,8 - 7,2 и целевой продукт после стерилизующей фильтрации лиофилизируют.РИСУНКИ
Рисунок 1
