Способ подготовки трансплантатов

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для пластической и реконструктивной хирургии радужки глаза. Сущность изобретения: кадаверную ткань после отмывки обезжиривают, выдерживают в растворе поверхностно-активного вещества, проводят щелочной гидролиз, повторно выдерживают в растворе поверхностно-активного вещества, затем проводят кислотный гидролиз с последующим выдерживанием в растворе поверхностно-активного вещества, после чего помещают в раствор перекиси водорода с концентрацией не менее 6% и закладывают в консервант - 70%-ный спирт. Применение трансплантатов из аллогенных тканей после обработки предложенным способом исключает воспалительные и аллергические реакции, реакции отторжения, а также позволяет добиться формирования дифференцированной структуры новообразованной ткани, увеличить срок годности и сохранности трансплантатов, снизить себестоимость.

Изобретение относится к медицине, а именно офтальмохирургии, и может быть использовано для пластической и реконструктивной хирургии радужки глаза.

На развитие пластической и реконструктивной офтальмохирургии, а именно иридопластики, отрицательно сказывается отсутствие оптимального трансплантационного материала.

Анализ известных способов и технологий подготовки трансплантатов из биологических тканей для иридопластики позволил отметить, что к настоящему времени ни один из существующих способов подготовки трансплантатов не позволяет получить трансплантационные материалы для иридопластики, близкие к оптимальным.

Прототипом изобретения является способ подготовки трансплантатов для иридоплатсики (авт. св. СССР N 1811831, кл. A 61 F 9/00, 1993), который осуществляется при обработке кадаверной сосудистой стенки в растворе солей азотно-кислого серебра. Аорту забирают в морге у донора и помещают в воду для отмывания от крови, затем переносят в раствор азотно-кислого серебра с концентрацией 2,5 50,0% и выдерживают в темноте 1 3 суток при температуре 18 23^oC, после чего ополаскивают в воде и помещают в 70%-ный спирт, оставляя на свету первые двое суток до проявления цвета.

Недостатками прототипа являются сложности планирования полного замещения трансплантатов точно в ожидаемые сроки и окончательной перестройки новообразованной ткани на его месте с формированием структуры соответствующей ткани реципиента, невозможность провести коррекцию и управление репаративной регенерацией.

Технический результат изобретения заключается в снижении послеоперационных осложнений и коррекции репаративной регенерации, повышении качества трансплантатов.

Технический результат достигается способом подготовки трансплантатов путем отмывки в воде кадаверных тканей и последующей их консервации в 70%-ном спирте, отличающийся тем, что кадаверную ткань после отмывки в воде обезжиривают, выдерживают в растворе поверхностно-активных веществ, проводят щелочной гидролиз, повторно выдерживают в растворе поверхностно-активных веществ, затем проводят кислотный гидролиз с последующим выдерживанием в растворе поверхностно-активных веществ, после чего помещают в перекись водорода с концентрацией не менее 6% Известно, что биопластические качества трансплантатов значительно улучшаются, если удалить из них низкомолекулярные белки и липиды, инактивировать протеолитические ферменты. Слабые растворы муравьиной кислоты оказывают на коллаген фиксирующее влияние, в результате обработанные трансплантаты подвергаются в организме реципиента более медленному рассасыванию и замещению. Поэтому изменяя pH и химические реагенты растворов, добиваются получения требуемых и оптимальных качеств трансплантатов. Опытным путем были найдены оптимальные сочетания химических реагентов и определены их концентрации. Полученные трансплантаты при правильном учете показаний и применении активно вступают во взаимодействие с тканевым ложем реципиента, рассасываются с одновременным замещением новообразованной специализированной и дифференцированной тканью, близкой по структуре к тканям ложа, и обеспечивают необходимый клинический эффект. Преимуществом трансплантатов, обработанных по предложенному способу, является высокая устойчивость к воздействию различных микроорганизмов. Этот эффект достигается за счет применения химических реагентов для обработки биологических тканей, оказывающих выраженное стерилизующее действие и обладающих консервирующими свойствами, универсальным бактерицидным действием, допустимой степенью токсичности, отсутствием выраженного последствия, простотой получения, хранения, практического использования, они не изменяются в присутствии белка. Использование химических реагентов, обладающих антисептическим действием, позволило значительно повысить устойчивость трансплантатов к инфекции.

Способ подготовки трансплантатов осуществляется следующим образом.

Кадаверные ткани (твердая мозговая оболочка, сосуды, широкая фасция бедра, фиброзная капсула почки, париетальная плевра и др.), проверенные на инфицирование сифилисом, вирусом гепатита и ВИЧ-инфекции, тщательно отмывают от крови, отживают и помещают в эфир в соотношении не менее 1:5 (вес/объем) и тщательно перемешивают в течение 6 ч при температуре 30 36^oC, затем отмывают дистиллированной водой при температуре 37 50^oC в течение 2 ч и тщательно перемешивают, далее помещают в 2%-ный раствор додецил сульфата натрия при температуре 37 50^oC на 1 ч, после чего промывают в воде до полного исчезновения запаха эфира. Биоматериал помещают в 0,3 1,0%-ный раствор аммиака на 5 12 ч при температуре 18 24^oC и постоянном перемешивании, отмывают в дистиллированной воде до удаления запаха аммиака и обрабатывают в 2,5%-ном растворе додецил сульфата натрия при температуре 40 - 50^oC в течение 30 мин, снова промывают в воде 30 мин при температуре 40 - 50^oC при постоянном перемешивании. После чего биоткань помещают в 0,2 - 1,0%-ный раствор муравьиной кислоты на 15 60 мин при температуре 18 - 24^oC при постоянном перемешивании, отмывают в 2%-ном растворе додецил сульфата натрия в течение 30 60 мин при температуре 36 40^oC, ополаскивают в дистиллированной воде и помещают в 6 10%-ный раствор перекиси водорода на 12 18 ч при температуре 18 24^oC и при постоянном перемешивании; затем помещают в 73%-ный спирт на ночь (12 18 ч при температуре 18 24^oC), утром переносят в 90 96%-ный этиловый спирт на 24 36 ч при температуре 18 24^oC. После чего трансплантаты закладывают в консервант 70%-ный спирт, где и хранят до реализации (в течение 1,5 -2,0 лет и более).

Пример. Аорту отмывают от крови водой, помещают в эфир на 6 ч при температуре 30^oC и тщательно перемешивают, затем отмывают в дистиллированной воде при температуре 37^oC в течение 2 ч и тщательно перемешивают, далее помещают в 2%-ный раствор додецил сульфата натрия при температуре 40^oC на 1 ч, после чего промывают в воде до исчезновения запаха эфира. Биоматериал помещают в 0,5%-ный раствор аммиака на 5 ч при температуре 24^oC и постоянном перемешивании, отмывают в дистиллированной воде до удаления запаха аммиака и обрабатывают в 2,5% -ном растворе додецил сульфата натрия при температуре 40^oC в течение 30 мин, снова промывают в воде 30 минут при температуре 40^oC при постоянном перемешивании. Далее ткань помещают в 0,5%-ный раствор муравьиной кислоты на 30 мин при температуре 24^oC при постоянном перемешивании, отмывают в 2%-ном растворе додецил сульфата натрия в течение 60 мин при температуре 40^oC, ополаскивают в дистиллированной воде и помещают в 10%-ный раствор перекиси водорода на 12 ч при постоянном перемешивании и при температуре 18^oC, затем помещают в 73%-ный спирт на 12 ч при температуре 18^oC, утром переносят в 90%-ный этиловый спирт на 24 ч при температуре 18^oC. После чего трансплантаты закладывают в консервант 70%-ный спирт, где и хранят до момента реализации (в течение 2 лет и более).

Экспериментальные исследования, проведенные на лабораторных животных, показали нетоксичность трансплантатов, обработанных по изложенной технологии (ЛД₅₀ > 5 г/кг при введении в желудок крысам, что позволяет отнести трансплантационные материалы к IV классу опасности веществ "малотоксичные и малоопасные"). При иридопластике трансплантатами в длительном хроническом опыте в течение 1 года были произведены наблюдения за животными кроликами, которые выводились из эксперимента на 3, 7, 14, 21, 30, 60, 90, 180, 360-е сутки. Морфологические исследования и клинические наблюдения показали, что трансплантируемые материалы из аллогенных тканей после обработки предложенным способом по биопластическим качествам почти не уступают аутотрансплантатам. Пересадка этих трансплантатов не вызывает нежелательных последствий, отсутствуют воспалительные и аллергические реакции, реакции отторжения, наблюдается ареактивное течение в послеоперационный период. Необходимые свойства трансплантатов достигаются путем многократной и многоэтапной обработки и очистки биологических тканей с помощью химических реагентов.

Способ подготовки трансплантатов позволяет в процессе обработки осуществлять стерилизацию с одновременным консервированием, что значительно улучшает их биопластические свойства и способствует оптимальному сочетанию в трансплантируемых материалах структурных, прочностных, биохимических и иммуногенных свойств. Эти качественные изменения в трансплантате достигаются за счет регулирования содержания гликопротеинов, протеогликанов, липидов, белков, определяющих в конечном итоге успех операции. Все это позволяет оказать целенаправленное и регулирующее влияние на процессы регенерации в радужке глаза при иридопластике трансплантатами, добиваясь при этом формирования дифференцированной структуры новообразованной ткани.

Предложенный способ подготовки трансплантатов с одновременным консервированием и стерилизацией позволяет полностью исключить из процесса заготовки биотканей в морге все элементы асептики, что имеет немаловажное значение для клиники. Трансплантаты, полученные данным способом, обладают по сравнению с прототипом следующими преимуществами: можно планировать полное замещение трансплантатов точно в ожидаемые сроки и окончательную перестройку новообразованной ткани с формированием структуры, соответствующей тканям ложа. Изменение режимов подготовки трансплантатов позволяет провести коррекцию и управление репаративными процессами с формированием функционально полноценных тканей. Способ подготовки трансплантатов позволяет повысить качество трансплантируемых материалов, регулировать биопластичность, увеличить срок годности и сохранности трансплантатов, снизить себестоимость.

Формула изобретения

Способ подготовки трансплантатов путем отмывки в воде кадаверных тканей и последующей их консервации в 70%-ном спирте, отличающийся тем, что кадаверную ткань после отмывки обезжиривают, выдерживают в растворе поверхностно-активного вещества, проводят щелочной гидролиз, повторно выдерживают в растворе поверхностно-активного вещества, затем проводят кислотный гидролиз с последующим выдерживанием в растворе поверхностно-активного вещества, после чего помещают в раствор перекиси водорода с концентрацией не менее 6%