Способ получения 3'-азидо-2',3'-дидезокситимидина

 

Изобретение относится к органической химии, конкретно к способу получения 3-азидо-2,3-дидезокситимидина, который используется в качестве препарата для лечения СПИДа. Согласно заявленному способу 3-азидо-2,3-дидезокситимидин получают путем взаимодействия 1,2-изопропилиден-α-D-ксилофуранозы последовательно с хлористым бензоилом при мольных соотношениях 1:0,7-1,2 моль, метансульфохлоридом (1:1-2,5 моль), затем получающийся продукт ацилируют уксусным ангидридом в уксусной кислоте с добавлением H₂SO₄ при мольных соотношениях 1:3 - 1:20 - 50:1 - 5. Конденсация полученного вещества с силилированным тимином проводят в присутствии S_nCl₄ в растворе ацетонитрила, где выход промежуточного нуклеозида составляет 90%. Дезацилирование последнего проводят нагреванием при 75^oC в растворе ацетонитрила и IM водного раствора H₂SO₄ с выходом 89%. Кипячение дезацилированного соединения SOCl₂ в среде ацетонитрила дает хлорпроизводное нуклеозида с выходом 80%, обработка которого трибутилоловогидридом в присутствии AlBN приводит к 2-дезоксипроизводному с выходом 90%. Нагревание последнего с NaN₃ при 150^oC в ДМФА и обработка избытком MeONa в метаноле дает целевой продукт. Общий выход 3-азидо-2,3-дидезокситимидина в расчете на D-ксилозу составляет 25,16%. 4 табл.

Предполагаемое изобретение относится к органической химии, к способу получения модифицированных нуклеозидов, конкретно 2,3-дидезокси-3-азидотимидина.

Предлагаемое соединение используется в качестве препарата для лечения СПИДа.

Известен способ получения 2',3'-дидезокси-3'-азидотимидина (АЗТ, retrovir, zidovudin), исходя из D-ксилозы [1] 1,2,3,5-Тетра-O-ацетилксилофураноза, используемая в три стадии из D-ксилозы, конденсируется в присутствии SnCl₄ в растворе дихлорэтана с образованием 1-(2',3',5'-три-O-ацетил- β -D-ксилофуранозил) тимина с выходом 99% Снятие защитных групп осуществляется обработкой MeONa в метаноле с выходом 98% последующее выдерживание при комнатной температуре в присутствии п-толуолсульфокислоты в растворе ацетона приводит к 1-(3,5-0-изопропилиден-b-D-ксилофуранозил) тимину с выходом 93% из последнего соединения обработкой PhOCSCl в растворе ацетонитрила получают 2-фенокситиокарбоксипроизводное (выход не указан), которое при кипячении в растворе толуола с Bu₃SnH образует 1-(2'-дезокси-3', 5'-0-изопропилиден-b-ксилофуранозил)тимин с выходом 91% Схема синтеза известного способа [1] Из полученного соединения в пять стадий получается целевой продукт 2,3-дидезокси-3-азидотимидин.

Известен способ [2] где в качестве исходного продукта используют 1,2-изопропилиден-a-D-ксилофцранозу (II), полученную из D-ксилозы с общим выходом 82,2% [3] которая бензоилирована 2,5-3 моль хлористого бензоила в растворе пиридина при 0-20^oC, ацилирована уксусным ангидридом (4,5-5 моль) в смеси уксусной и серной кислот с выходом 60% при 0^oC. Полученную таким образом 1,2-ди-O-ацетил-3,5-ди-O-бензоил-D-ксилофуранозу (IV) конденсируют с 1-1,2 моль силилированного тимина в растворе дихлорэтана или ацетонитрила в присутствии SnCl₄ с образованием 1-(2-O-ацетил-3,5-ди-O-бензоил-b-D-ксилофуранозил)тимина (V), который дезацилируется нагреванием 0,1-0,2 моль водного раствора серной кислоты в ацетонитриле при 70-80^oC, полученный при этом 1-(3,5-ди-O-b-D-ксилофуранозил)тимин (VI), хлорируется кипячением с хлористым тионилом и после обработке реакционной смеси получили 1-(2-хлор-3,5-ди-O-бензоил-b-D-ксилофуранозил)тимин (VII) с выходом 52,5% (в расчете на 1,2-ди-O-ацетил-3,5-ди-O-бензоил-D-ксилофуранозу). Этот продукт дезоксигенерируют обработкой Bu₃SnH в присутствии бис(азоизобутиронитрила) кипячением в растворе толуола или бензола, выход 1-(3,5-ди-O-бензоил-b-D-трео-пентафуранозил)тимина (VIII) составляет 97,2% Перемешивание указанного соединения в растворе MeONa в метаноле приводит к 1-(2-дезокси-b-D-трео-центрафуранозил)тимину (IX) с выходом 95% Общий выход соединения IX в расчете на D-ксилозу составляет 24% Далее полученное вещество IX превращается в целевой 3-азидо-2,3-дидезокситимидин в 4 стадии. Данные по выходу целевого продукта не приводятся.

Известен также способ получения 3-дезокси-3-азидотимидина [4] где исходным соединением является тимидин, который при взаимодействии с трифенилметилхлоридом в сухом пиридине при 100^oC дает 5'-O-тритилтимидин (2) с выходом 86% Мезилирование соединения 2 проводят в растворе пиридина, с выходом вещества (3) 96% согласно работе [5] Обработка последнего избытка NaOH в этиловом спирте и воде в течение 4 ч дает 1-(2'-дезокси-5'-O-тритил-b-D-ликсофуранозил)тимин (4) с выходом 90% [6] Мезилирование соединения 4 в сухом пиридине при 0^oC в течение 16 ч приводит к продукту 5, где выход составляет 80% Взаимодействием 1-(2'-дезокси-5'-O-тритил-3-O'-мезил-bD-ликсофуранозил)тимина (5) с LiN₃ в растворе диметилформамида получен 5'-O-тритил-3'-азидотимидин (6), обработка которого сухим HCl в хлороформе дает целевой продукт 7 с выходом 62% в расчете на вещество 5. Общий выход целевого продукта в расчете на тимидин (1) составляет 36,85% Общими недостатками известного способа являются, во-первых, труднодоступность исходного соединения-тимидина, получаемого из природного сырья, т.е. ДНК, где содержание тимидина очень низкое (примерно 5%); во-вторых, путь его получения технологически очень сложен из-за трудности очистки тимидина; в-третьих, получение тимидина синтетическим путем усложняется вследствие образования смеси a- и β- аномеров (примерно 1:1) тимидина, где нужным веществом является только β-аномер, выделение которого предлагает проведение сложных технологических приемов, в частности хроматографическое разделение a- и β- аномеров тимидина. Указанные технологические сложности приводят к удорожанию и труднодоступности исходного тимидина.

В заявленном техническом решении предложено новое исходное соединение - D-ксилоза, которая характеризуется дешевизной, доступностью и производится отечественной промышленностью в больших количествах. Кроме того, ее использование позволяет получить целевое соединение в более мягких режимах условиях с получением необходимого β-аномера производного тимидина, что исключает использование трудоемкого хроматографического разделения.

Согласно предложенному взаимодействием 1,2-O-изопропилиден-D-ксилофуранозы (1), получаемой в две стадии из D-ксилозы с общим выходом 82,3 [4] с хлористым бензоилом, затем метансульфохлоридом в растворе CH₂Cl₂/C₅H₅N (4:1) получена 5-O-бензоил-3-метансульфонил-1,2-ди-O-изопропилиден-a-D-ксилофураноза (II), выход которой составляет 85% Соединение (II) ацилируется при обработке уксусным ангидритом в уксусной кислоте и серной кислоте с образованием 1,2-ди-O-ацетил-3-O-метансульфонил-5-O-бензоил-D-ксилофуранозы (III) с выходом 98% При конденсации соединения III силилированным тимином в растворе ацетонитрила в присутствии SnCl₄ образуется 1-(2'-O-ацетил-3'-O- метансульфонил-5'-O-бензоил-b-D-ксилофуранозил)тимин (IV) с выходом 90% Дезацелирование соединения IV нагреванием в ацетонитриле в присутствие 0,06 М водного раствора серной кислоты дает 1-(5-O-бензоил-O-метансульфонил-b-D-ксилофуранозил)тимин (V) с выходом 89% Хлорирование соединения V нагреванием с хлористым тионилом при кипении в ацетонитриле в течение 3 ч приводит к 1-(2'-дезокси-2'-хлор-3'-O-метансульфонил-5'-O-бензоил-b-D-ксилофуранозил)тимину (VI). Полученное хлорпроизводное нуклеозида VI подвергают дезоксигенированию при обработке трибутилоловогидридом в присутствии азоизобутиронитрила при 85-105^oC с образованием 1-(2'-дезокси-3'-O-метансульфонил-5'-O-бензоил-b-D-ксилофуранозил)тимина (VII), выход которого составляет 90% Нагревание соединения VII с 1 5 моль азида натрия в диметилформамиде при 130 150^oC в течение 3 10 ч приводит к 5'-O-бензоил-3'-дезокси-3'-азидотимидину (VIII) с выходом 67% Снятие защитной бензольной группы осуществляется MeONa в MeOH, где выход конечного продукта 3-дезокси-3'-азидотимидина (IX) составляет 95% Общий выход целевого вещества в расчете на D-ксилозу составляет 25,16% T тимин Bz бензоил Ms метансульфохлорид Ac ацетил
Способ поясняется примерами конкретного выполнения
Пример 1. К раствору 19 г (0,1 моль) 1,2-изопропилиден-a-D-ксилофуранозы (I)b 200 мл смеси CH₂Cl₂/ пиридин (4:1) прикапывают при охлаждении водой 14,2 г (0,102 моль) хлористого бензоила в 15 мл толуола. Реакционную смесь оставляют при комнатной температуре на 20 ч, затем упаривают, добавляют 100 мл пиридина, 13,4 мл (0,2 моль) метансульфохлорида и оставляют на 24 ч. Затем к смеси добавляют 20 мл H₂O, растворитель упаривают в вакууме, остаток экстрагируют этилацетатом (3х200 мл), промывают водой (3х200 мл) и упаривают при пониженном давлении. Остаток перекристаллизовывают из этанола. Выход продукта 31,6 г (85% ). Т.пл. 83 85^oC. Спектр ПМР (CDCl₃, d м.д.): 1,10 с (3H, CH₃), 1,23 с (3H,CH₃), 2,85 с (3H,CH₃), 5,78 д (1H, J_1,2 1,34 Гц, H-1), 4,93 д (1H, J_2,3 3,03 Гц, H-2), 4,62 дд (1H, J_3,4 3,60 Гц, H-3), 4,42 м (1H, H-4), 4,30 м (2H,H-5а,б), 7,20 7,90 м (5H,ArH) Спектр ЯМР¹³C (CDCl₃, d м.д. ): 25,15 (CH₃, 26,89 (CH₃), 38,76 (CH₃), 105,66 (C-1), 81,60 (C-2), 77,23 (C-3), 83,96 (C-4), 61,48 (C-5), 113,59 (C-2'), 129,37; 130,36; 130,68, 134,29 (C-аромат. ), 167,16 (PhC= 0). Найдено% C 51,34; H 5,11; S 8,28. C₁₆H₂₀O₈S. Вычислено% C 51,61; H 5,38; S 8,60.

Зависимость выхода 1,2-O-изопропилиден-3-O-метансульфонил-5- O-бензоил-d-D-ксилофуранозы (II) от мольного соотношения компонентов (см. табл. 1)
Стадия ацилирования.

К раствору 63 г (169 ммоль) соединения II в 390 мл CH₃COOH и 96 мл уксусного ангидрида при перемешивании и охлаждении водой по каплям прибавляют 37,5 мл концентрированной H₂SO₄. Реакционную смесь оставляют при комнатной температуре без доступа влаги на 22 ч, выливают в охлажденную воду (400 мл), экстрагируют этилацетатом (3·100 мл), органическую фазу промывают водой (300 мл), 5%-ным раствором NaHCO₃ (3·150 мл), вновь водой и высушивают над MgSO₄. После удаления растворителя в вакууме и высушивания остатка при пониженном давлении (35^oC) получают 69 г (98%) сиропообразной массы соединения III.

Примеры 2 и 3 стадии ацилирования проводятся, как описано выше для примера 1.

Зависимость выхода 1,2-ди-O-ацетил-3-O-метансульфонил-5-O-бензоил--α, β--D-ксилофуранозы (III) от мольного соотношения компонентов реакции (см. табл.2).

Стадия конденсации.

1-(2'-O-ацетил-3'-O-метансульфонил-5'-O-бензоил-β-D-ксилофуранозил)тимин (IV).

К раствору 6,5 г (15,6 ммоль) соединения III и 5,1 (18,7 ммоль) бис(триметилсилил)тимина в 100 мл сухого ацетонитрила добавляют 2,69 мл (22,4 ммоль) SnCl₄. Реакционную смесь выдерживают при комнатной температуре 2 ч, выливают в 20%-ный раствор NaHCO₃ (150 мл), перемешивают 30 мин и отфильтровывают. Осадок промывают этилацетатом. Объединенные фильтраты промывают 5%-ным раствором NaHCO₃, водой и высушивают над MgSO₄. После упаривания растворителя при пониженном давлении и перекристаллизации сухого остатка из этанола получают 6,77 г (90%) нуклеозида IV. Т.пл. 88 - 91^oC. Спектр ПМР (CDCk₃, d м.д.): 1,57 с (3H, CH₃), 2,20 с (3H, CH₃), 3,21 с (3H, CH₃), 6,13 д (1H, J_1',2', 2,99 Гц, H-1'), 5,30 дд (1H, J_2',3' 1,43 Гц, H-2'), 5,16 дд (1H, J_3',4' 2,78 Гц, H-3'), 4,61 м (1H,H-4,), 4,77 дд (1H, J_5а',4' 5,37 Гц, H-5а'), 4,71 дд (1H, J_5б',4' 6,04 Гц, J_гем-12,04 Гц, H-5б'), 7,41-8,10 м (6H,H-6,ArH), 10,12 с (1H,NH). Спектр ЯМР¹³C (CDCl₃, d м.д.): 12,58 (C-5''), 87,70 (C-1'), 78,23 (C-2'), 80,02 (C-3'), 80,46 (C-4'), 61,13 (C-5'), 20,60 (C-2''), 36,72 (C-3''), 150,35 (C-2), 163,58 (C-4), 112,16 (C-5), 134,58 (C-6), 128,59; 129,17; 129,82; 133,62 (C-аромат.), 166,09 (PhС=0), 169,76 (AcC= 0). Найдено% C 49,47; H 4,39; N 5,60; S 6,38. C₂₀H₂₂N₂O₁₀S. Вычислено% C 49,79; H 4,56; N 5,81; S 6,64.

Примеры 2 и 3 стадии конденсации проводятся как описано выше для 1.

Зависимость выхода 1-(2'-O-ацетил-3'-O-метансульфонил-5'-O-бензоил-b-D-ксилофуранозил)тимина (IV) от мольного соотношения реагентов (см. табл. 3)
Стадия дезацилирования
1-(3'-O-метансульфонил-5'-O-бензоил- b -D-ксилофуранозил)тимин (V)
Раствор 44 г (91,2 ммоль) соединения IV в 30 мл ацетонитрила и 60 мл 1 М водного раствора H₂SO₄ выдерживают 18 ч при 75^oC. Охлаждают до комнатной температуры, нейтрализовывают сухим NaHCO₃, отфильтровывают, растворитель упаривают в вакууме (25^oC). Остаток экстрагируют этилацетатом, органическую фазу промывают H₂O (2·500 мл), высушивают над MgSO₄. После удаления растворителя при пониженном давлении получают чистый продукт V. Выход 36 г (89% ). R_f 0,31 (CHCl₃/MeOH 95/5). Спектр ПМР (CDCl₃, d м.д.): 1,74 с (3H,CH₃), 3,03 с (3H, CH₃), 5,78 д (1H, J_1',2' 1,99 Гц, H-1'), 5,14 дд (1H, J_2',OH' 3,95 Гц, H-2'), 4,60 с (1H,H-3'), 4,80 к (1H, J_5а',4' 5,27 Гц, J_5б',4' 9,49 Гц, H-4'), 4,02 м (2H, J_гем 12,14 Гц, H-5а,б'), 5,49 д (1H,OH-2'), 7,35 д (1H, J 1,15 Гц, H-6), 7,38 8,01 м (5H,ArH), 10,25 с (1H,NH). Спектр ЯМР¹³С (CDCl₃, d м.д.): 12,43 (C-5''), 38,42 (C-3''), 91,59 (C-1'), 79,00 (C-2'), 79,50 (C-3'), 81,66 (C-4'), 61,42 (C-5'), 111,09 (C-5), 151,30 (C-2) 164,38 (C-4), 135,29 (C-6), 128,69; 129,41; 129,63; 129,41; 129,63; 133,63 (C-аромат.), 166,21 (PhC=0). Найдено% C 48,87; H 4,29; N 6,07; S 6,94. C₁₈H₂₀N₂O₉S. Вычислено% C 49,09; H 4,55; N 6,36; S 7,27.

Стадия хлорирования
1-(2'-дезокси-2'-хлор-3'-O-метаносульфонил-5'-O-бензоил-b-D-ксилофуранозил)тимин (VI).

Раствор 0,44 г (1 ммоль) соединения V и 0,3 мл SOCl₂ в 4 мл ацетонитрила нагревают при кипении 3 ч. Растворитель упаривают при пониженном давлении (30^oC), остаток обрабатывают этилацетатом и водой. Органическую фазу отделяют, промывают 5%-ным раствором NaHCO₃, водой, сушат над MgSO₄, отфильтровывают и упаривают при пониженном давлении. Сухой остаток растворяют в горячем этаноле (7 мл), обрабатывают углем при кипении (0,2 г) и фильтруют. После удаления этанола при пониженном давлении получают 0,35 г (77%) продукта в виде пены. R_f 0,36 (CHCl₃/MeOH 95/5). Спектр ПМР (CDCl₃, d м.д.): 1,91 д (3H, J 1,15 Гц), CH₃), 3,12 с (3H,CH₃), 6,20 д (1H, J_1',2' 2,71 Гц, H-1'), 4,62 дд (1H, J_2',3' 2,15 Гц, H-2'), 5,29 дд (1H, J_3',4' 3,68 Гц, H-3'), 4,89 м (1H,H-4'), 4,78 дд (1H, J_5а',4' 5,60 Гц H-5а'), 4,72 ll (1H, J_5б',4' 5,53 Гц, J_гем 11,91 Гц, H-5,'), 7,67 д (1H, J 1,15 Гц, H-6), 7,47 8,08 м (5H, ArH), 8,72 с (1H,NH). Найдено% C 46,82; H 3,97; Cl 7,32; N 5,78. C₁₈H₁₉ClN₂O₈S. Вычислено% C 47,11; H 4,14; Cl 7,74; N 6,11.

Стадия дезоксигенирования.

1-(2-'дезокси-3'-0-метансфульфонил-5-'0-бензоил-b-D-ксилфоранозил)тимин (VII).

К раствору 0,28 г (0,61 ммоль) соединения VI в 3 мл сухого толуола добавляют 0,73 ммоль трибутилоловогидрида в 1 мл толуола. После нагревания смеси до 85^oC добавляют 10 мг азоизобутиронитрила и перемешивают 2 ч при этой температуре. Выпавший после охлаждения раствора осадок отфильтровывают, промывают пентаном и высушивают на воздухе Выход 0,23 г (90%). R₁ 0,30. R₁ 0,30 (CHCl₃/MeOH 95/5). Спектр ПМР (CDCl₃, d м.д.): 1,59 с (3H, CH₃), 3,09 с (3H, CH₃), 6,33 дд (1H, J_1,2'a 8,03 Гц, J_1',2б' 3,32 Гц, H-1'), 2,89 ддд (1H, J_2a',3', 5,51 Гц, H-2a'), 2,52 ддд (1H, J_гем 13,6 Гц, H-2б'), 4,41 ддд (1H, J_3',4', 4,1 Гц, H-3'), 5,38 т (1H, H-4'), 4,51 дд (2H, H-5a,б'), 7,39 с (1H, H-6), 8,21 с (1H,NH), 7,42-8,10 м (5H,ArH). Спектр ЯМР¹³С (CDCl₃, d м. д.): 12,69 (C-5''), 38,72 (C-3''), 83,77 (C-1'), 39,58 (C-2'), 78,23 (C-3'), 79,80 (C-4'), 61,47 (C-5'), 150,61 (C-2), 163,75 (C-4), 111,59 (C-5), 135,05 (C-6), 128,63; 129,20; 129,76; 133,63 (C-аромат.), 166,12 (PhC=0). Найдено% C 50,68; H 4,51; N 6,43; S 7,24. C₁₈H₂₀N₂O₈S. Вычислено C 50,49; H 4,72; N 6,60; S 7,55.

5'-0-бензоил-3'-дизокси-3'-азидотимидин (VIII).

Раствор 0,043 г (0,1 ммоль) соединения VII, 0,026 г (0,4 ммоль) азида натрия в 0,5 мл ДМФА нагревают при 150^oC 3 ч. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляют водой, продукт экстрагируют этилацетатом, органический слой промывают водой и высушивают над MgSO₃. Растворитель упаривают при пониженном давления, остаток хроматографируют на колонке с силикагелем (0,8 г). Получали 0,025 г (67%) продукта VIII. R₁ 0,37 (CHCl₃/MeOH 95/5). ИК-спектр n cm^-1):2112 (N₃(|). Спектр ПМР (CDCl₃, d м.д. ): 1,61 с (3H,CH₃), 6,20 т (1H, J_1,2a, 6,6 Гц, J_1,2б', 6,3 Гц, H-1'), 2,40 ддд (1H, J_2a',3' 7,4 Гц, H-2a'), 2,56 ддд (1H, J_2б',3' 7,47 Гц, J_гем 11,2 Гц, H-2б'), 4,40 дт (1H, J_3',4' 4,9 Гц, H-3'), 4,22 м (1H, H-4'), 4,59 дд (1H, J_5a',4' 3,7 Гц, H-5a'), 4,70 дд (1H, J_5б',4' 3,4 Гц, J_гем 12,2 Гц, H-5б'), 7,40-8,05 м (6H, H-6, ArH), 8,44 c (1H,NH). Найдено% C 54,96; H 4,08; N 18,47. C₁₇H₁₆N₂O₅. Вычислено С 55,14; H 4,32; M 18,92.

Примеры 2-10 стадии введения азидной группы проводятся как описано выше для примера 1.

Условия проведения реакции и выход 5'-0-бензоил-3'-азидо-3'-дезокситимидина (VIII) (см. табл. 4).

Снятие бензоильной группы осуществлено MeONa в MeOH. Выход конечного продукта составляет 95% Физико-химические характеристики соответствуют литературным [2]
Преимущества заявленного технического решения.

Предложен способ получения важного лекарственного препарата, независимой от стратегических и дорогих материалов и препаратов ограниченной доступности.

Способ протекает в обычных условиях реакции, не требует специальных растворителей или дорогих, недоступных и чувствительных реагентов.

В способе используется, производимое в стране, дешевая D-ксилоза, доступная в больших количествах.

Источники информации
1. JP 01,203,39989, 203,3991. (C1. C 07 H 19/067).

2. EP 0301908 кл. C 07 H 19/073.

3. B. R. Baker, R.E. Schab. Puromycin. Journal of the American chemical Socirty. 1955, vol. 77, N 22, рp. 5900-5905.

4. J.P. Horwitz, J. Chua, M. Noel, J. Org. Chem. 1964, vol. 29, N 7, pp. 2076-2078.

5. J.P. Horwitz, J.A. Urbanski, J. Chua, J. Org. Chem. 1962, vol. 27, N 9, pp. 330-3302.

6. J.P. Horwitz, J. Chua, A. Urbanski, M. Noel, J. Org. Chem. 1963, vol 28, N 4, pp. 942-944.

Формула изобретения

Способ получения 3'-азидо-2',3'-дидезокситимидина из 3'-О-метансульфонил-5'-О-защищенного производного β-D-O-оксилофуранозил тимина путем действия на него азидом щелочного металла в диметилформамиде при повышенной температуре в течение 3 10 ч с последующим снятием защитной группы с 5'-гидроксигруппы щелочным гидролизом в органическом растворителе и выделением целевого продукта, отличающийся тем, что 1-(5'-О-бензоил-3'-О-метансульфонил-2'-дезокси -β-D-треопентафуранозил)тимин подвергают взаимодействию с 1,5 моль-эквивалентом азида натрия при 130 - 150^oС с последующей обработкой метоксидом натрия в метаноле полученного промежуточного 1-(5'-О-бензоил 3'-азидо-3'-дезокси) тимидина и получением целевого продукта.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6